（湖南省怀化市辰溪县疾病预防控制中心 湖南省怀化市辰溪县 419500）
摘要：目的 研究两种方法检测外环境标本中霍乱弧菌效果。方法 资料分析本地区2016年8月-2017年8月收集的各种标本共370份，均采取分离培养法与胶体金法检测外环境标本中霍乱弧菌，观察所有标本检测符合率。结果 经检测健康人群、鱼类涂抹、养殖水、水与海产品、厕所涂抹、江水、蛙类、熟食品及生活污水等标本共370份，胶体金法检测阳性数共３份，分离培养法检测阳性３份，且经血清鉴定皆为O1群霍乱弧菌稻叶型，检测结果符合率达100%。结论 于检测外环境标本中的霍乱弧菌中实施胶体金法能够用于快速筛查，并提供快速报告，且辅以培养法可完成霍乱弧菌确诊情况，可被推广与应用。
关键词：两种方法；外环境标本；霍乱弧菌；研究
霍乱是因霍乱弧菌而引发的急性肠道传染病，其具发病急、涉及范围大、传播快等特点[1]。针对外环境中的霍乱弧菌予以检测为防治霍乱重要部分，作为金标准霍乱弧菌分离培养法的检测时间比较长，而胶体金法检测室通过膜层析技术与单克隆抗体胶体金技术研制形成的，其用于检测外环境标本中的霍乱弧菌中检查结果易判断[2]。本研究为进一步验证其检测价值，就选取的370份各项标本资料予以分析，现作下列报告：
1.资料与方法
1.1一般资料
资料分析本地区2016年8月-2017年8月收集的各种标本共370份，其中6份生活污水，12份厕所涂抹标本，37份沅江水，136份水产品与海产品，32份养殖水，77份鱼类涂抹标本，10份蛙类，12份熟食品，48份健康人群标本。
1.2方法
1.2.1检测试剂：由北京博奥森生物技术有限公司提供碱性蛋白胨水；由青岛高科技工业园海博生物技术有限公司提供四号琼脂；O1群霍乱弧菌多价血清，稻叶、小川分型血清；由上海乔羽生物科技有限公司生产霍乱弧菌胶体金免疫检测卡，上述试剂皆于有效期内进行使用。
1.2.2检测方法 胶体金法快速检测：根据试剂的具体使用要求用滴管吸取碱性蛋白胨水（已增菌），并置于胶体金试纸条上，于2-15分钟内对检测结果予以密切观察，超过15分钟结果不计算在内；分离培养法：根据“霍乱诊断标准”中的方法予以病原菌分离培养，并鉴定血清情况。
1.3观察指标与评定标准
观察并分析分离培养法与胶体金法对外环境中各类标本（健康人群、鱼类涂抹、养殖水、水与海产品、厕所涂抹、江水、蛙类、熟食品及生活污水）中的霍乱弧菌检测符合率。评定标准[3]：仅出现1条紫红色线条，即仅C线（质控线）属阴性；出现两条紫红色线条即T线（反应带）与C线（质控线）属阳性；仅出现T线（反应带）或者无任何线条出现或出现即无效。
1.4统计原理
探究数据，皆由SPSS22.0统计软件解析，计量数据经由（±s）表达，计数单位经由[n（%）]表达。
2.结果
经检测健康人群、鱼类涂抹、养殖水、水与海产品、厕所涂抹、江水、蛙类、熟食品及生活污水等标本共370份，胶体金法检测阳性数共３份，分离培养法检测阳性３份，且经血清鉴定皆为O1群霍乱弧菌稻叶型，检测结果符合率达100%，详见表1。
3.讨论
培养分离法为检测外环境标本中的霍乱弧菌金标准，但由于进行外环境标本霍乱弧菌生化分析、分离培养及鉴定形态学等一系列时间大约3天，且操作环节复杂，不仅工作量大，而且消耗大量时间[4]。目前快速检测技术中的荧光定量PCR、PCR等应用愈来愈广泛，但其对实验室相关仪器设备的要求比较高，且检测费用高昂，导致上述技术难以应用于基层范围。
为探讨有效的检测方案，本研究就选取的370份各项标本资料予以观察分析，其中采取的胶体金法即快速法是通过膜层析技术与单克隆抗体胶体金标记技术研制成的，其可有效应用于标本检测可能存在霍乱弧菌的群菌体抗原中，此方案不仅操作简便、快捷，而且检测的结果较清晰，比较容易判断，于控制疫情方面可发挥重要作用[5]。日常监测外环境标本中存在大量的其它杂菌，而日常监测工作中大多予以分离培养法，其将干扰分离鉴定霍乱弧菌的结果，导致较难检测出霍乱弧菌，不仅加大检测工作难度，而且难以快速将检测报告发出[6]。但采取胶体金快速检测法不仅简便、快速，对标本二次增菌后予以立即检测，15min内即可得出检测结果，以快速提示是否存在霍乱弧菌，这对防控疫情具重要价值[7]。经研究观察并分析结果显示：经检测健康人群、鱼类涂抹、养殖水、水与海产品、厕所涂抹、江水、蛙类、熟食品及生活污水等标本共370份，胶体金法检测阳性数共３份，分离培养法检测阳性３份，且经血清鉴定皆为O1群霍乱弧菌稻叶型，检测结果符合率达100%；提示于检测外环境标本中的霍乱弧菌中实施胶体金法能够用于快速筛查，且辅以培养法可完成霍乱弧菌确诊情况；这与刘敏[8]文献结果一致性较高。但因为胶体金快速法无法得到病原菌，且难以开展分析流行病学资料、血清分型等工作。所以，于采取胶体金快速检测法予以筛查同时，需辅以分离培养法，不仅为疫情防控提供有效依据，而且确保获取菌株确诊及开展其他项目研究。本研究因受标本份数等因素限制未对2种检测手段的灵敏度与特异度情况予以分析，待进一步研究再作完善。
总结上文，胶体金法应用于外环境标本中的霍乱弧菌检测中实可快速筛查，且提供快速报告，同时辅以培养法可完成霍乱弧菌确诊情况，具实际应用价值。
参考文献
[1]程晋霞，曾静，张西萌，等.海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和环介导等温扩增快速检测方法的建立[J].中国食品学报，2015，15（2）：168-173.
[2]胡兴娟，沈飚，江玲丽，等.海产品中霍乱弧菌实时浊度LAMP 检测方法的建立[J].河南农业科学，2014，（10）：127-130.
[3]程晋霞，曾静，刘莉，等.海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和实时荧光PCR快速检测方法的建立[J].中华预防医学杂志，2014，48（2）：133-137.
[4]李凤娟，阚飙，王多春，等.非O1非O139群霍乱弧菌多重PCR和SYBR Green实时PCR检测方法的建立[J].中华流行病学杂志，2014，35（1）：66-70.
[5]蒋蔚，易力，陈永军，等.水产品中霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌多重PCR检测方法的建立[J].中国动物传染病学报，2016，24（1）：44-51.
[6]陈福辉，杨梦，刘晓青，等.胶体金免疫层析法应用于环境水体中霍乱检测的效果评价[J].现代预防医学，2015，42（3）：420-422.
[7]刘玉梅.水产品中霍乱弧菌检测方法在基层中的应用分析[J].中国农村卫生，2017，（6）：16-17.
[8]刘敏.基于胶体金快速检测法检测霍乱弧菌的评价（以公安县霍乱疫情为例）[J].中国社区医师，2014，（17）：113-114.
论文作者:肖慧
论文发表刊物:《航空军医》2017年28期
论文发表时间:2018/2/2
标签：弧菌论文; 霍乱论文; 标本论文; 胶体论文; 快速论文; 环境论文; 海产品论文; 《航空军医》2017年28期论文;