王国勇[1]1994年在《高血压时阻力血管平滑肌钙激活钾通道的特性及调节》文中提出高血压的主要表现是血管张力持续升高，血管对加压物质的反应性增高，形成外周阻力的异常增高。因此，近年来对于高血压发病的血管机制的研究受到高度的重视。血管张力持续升高乃是血管舒缩活动异常所致。阻力血管的舒缩在形成外周阻力中具有直接的重要意义。平滑肌细胞膜的离子通道的活动正常是血管平滑肌兴奋收缩过程起始的关键，也是细胞的兴奋性与膜的稳定性得以维持的保证。血管平滑肌的收缩起始于胞内游离Ca~(2+)浓度的升高。胞内Ca~(2+)主要是胞外Ca~(2+)经电压依赖性钙通道进入胞内的。电压依赖性钙通道的启闭受膜电位控制，膜电位去极化促其开放，膜电位复极化促其关闭。膜电位主要由钾通道控制的，钾通道电导增大，膜电位复极化，钾通道电导减小，膜电位去极化。钾通道的活动可控制钙通道的启闭和具有膜稳定作用，因此，它在血管平滑肌的舒缩机制中显得尤为重要。钙激活钾通道活动是胞内钙升高的直接的而有效的负反馈机制之一，它在控制血管平滑细胞胞内钙浓度和膜电位及调节血管平滑肌张力方面具有重要的作用。高血压时阻力血管平滑肌的这一负反馈机制是否发生了变化以及这种变化的机制如何?至今未见报道。本实验的目的就是利用膜片箝方法较为系统地研究阻力血管平滑肌钙激活钾通道在高血压中的作用。 动物选用雄性卒中易感型自发性高血压大鼠SHRsp及其常压对照WKY大鼠，血压分别为170±16.3mmHg和100±10.5mmHg。击头处死大鼠，取出肠系膜在充氧克氏液中分离制备好肠系膜动脉
桂培春[2]1998年在《NO激活SHR_（SP）和常压大鼠阻力血管平滑肌K_（Ca）效应的异同》文中研究指明前言 血管平滑肌细胞膜电位是调节血管张力的主要因素，当钾通道开放时，K~+外流增加，细胞膜产生超极化，可抑制电压依赖性钙通道开放，降低胞内钙离子浓度，引起血管平滑肌舒张。K_(Ca)在血管平滑肌细胞膜上密度高，再加上其电导较大，因此，它对膜电位影响较大，可以负反馈地调节血管张力。NO是EDRF和外源性硝基类扩血管药物的主要活性成分，有研究表明，内外源性NO可以通过cGMP依赖的蛋白激酶(PKG)使通道蛋白磷酸化或直接激活大动脉的平滑肌K_(Ca)。但在对血管张力调节作用较大血管更为显著的阻力血管段，NO对其平滑肌细胞膜K_(Ca)激活作用途径如何，尚乏研究报道。此外，抑制脱磷酸化是否也能激活K_(Ca)，它与NO激活效应有何关系。还有，当胞内钙离子浓度增高，K_(Ca)开放增加时，是否影响NO激活效应。还有高血压发病机制是一个复杂的生理学问题，目前尚未明了。它的显著特征是血管外周阻力增高，而K_(Ca)在调节血管的肌源性张力中具有重要作用，因此，高血压时阻力血管平滑肌K_(Ca)有何变化、NO对其激活效应以及作用途径有无改变，均值得研究。 材料与方法：用酶消化的Wistar、WKY大鼠和卒中易感型自发性高血压大鼠(SHR_(SP))的肠系膜动脉A_4-A_5分支或Wistar大鼠的脑动脉的单个平滑肌细胞作膜片箝单通道或全细胞记录。所记录的电流经膜片箝放大器(List L／M-EPC7)放大和滤波，再经pclamp5．5．1软件的数据
郑永芳, 王国勇, 鲍光宏, 屈金河, 王晓芳[3]1998年在《硝普钠对SHRsp阻力血管平滑肌钙激活钾通道的影响》文中进行了进一步梳理目的观察硝基类扩血管药硝普钠（ｓｏｄｉｕｍｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ，ＳＮＰ）对卒中易感型自发高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）及其正常血压对照ＷＫＹ大鼠肠系膜动脉Ａ４－Ａ５分支阻力血管平滑肌钙激活钾通道（ＫＣａ）的作用。方法用细胞贴附式膜片箝（ｐａｔｃｈｃｌａｍｐ）技术。结果发现ＳＮＰ可激活ＳＨＲｓｐ与ＷＫＹ阻力血管平滑肌ＫＣａ在同等剂量（１ｎｍｏｌ／Ｌ）ＳＮＰ作用下，被激活的ＳＨＲｓｐＫＣａ的电导、通道开放电流等均小于正常对照ＷＫＹ大鼠。同等剂量（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）的８－Ｂｒ－ｃＧＭＰ激活ＳＨＲｓｐＫＣａ的效应亦弱于ＷＫＹ，结果与ＳＮＰ激活作用相似。结论高血压时阻力血管平滑肌ＫＣａ对舒血管的血管内皮释放因子／一氧化氮（ＥＤＲＦ／ＮＯ）的反应减弱。
韩冬云[4]2003年在《N-甲基小檗胺对大鼠肠系膜阻力血管平滑肌细胞钙激活钾电流的作用》文中认为前言 高血压是危害人类健康的重要疾病，其发病因素是多方面的，然而，由于高血压的主要表现是外周阻力血管张力持续升高，同时血管对加压物质的反应性增高，因此，高血压发病的血管机制受到高度重视。 血管张力持续升高是血管舒缩活动异常所致，血管舒缩活动则取决于平滑肌的收缩与舒张状态。细胞膜离子通道的正常活动是血管平滑肌兴奋舒缩过程的关键，也是维持细胞的兴奋性与膜稳定性的保证。其中，钙通道与钾通道的作用至为重要。钾通道通过影响细胞膜电位引起电压依赖性钙通道的开放与关闭，改变胞内游离Ca~(2+)浓度进而影响血管的舒缩状态。近年来应用膜片钳技术发现血管平滑肌细胞膜上至少存在四种不同类型的钾离子通道，钙激活钾(K_(Ca))通道在调节血管的舒缩中起着重要作用。 NMB是从小檗属植物中提取的一种生物碱。动物实验表明小檗胺具有降压、抗心律失常、抗心肌缺血等作用。本实验室以前的研究表明NMB可抑制豚鼠心室肌细胞Ca~(2+)电流和ATP敏感钾电流，从离子转运角度阐明其抗心律失常作用的机理。但有关NMB降压机制的研究尚未见报道。本实验应用膜片钳全细胞记录模式观察了NMB对大鼠肠系膜阻力血管平滑肌细胞I_(Kca)的影响，以阐明其降压的离子机制。 实验方法 1．大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞的制备 Wistar大鼠，体重(300±20)g，由中国医科大学实验动物部提供，95兼用。m％水含氯醛4价他 ．麻醉，开腹分离肠系膜动脉A。－A。分支并迅速移至冰冷的含钙生理盐溶液中，经修饰后用小剪子将动脉剪碎，用二步酶解法分离出单个血管平滑肌细胞，当细胞数量最多、质量最好时，收集细胞。将细胞悬液保存于4℃冰箱中，8小时内使用。 2．I。c。的电生理记录 选取胞膜光滑完整，胞浆均匀，长梭形舒展的细胞进行实验。全细胞状态形成后，用 pCLAMP 5．5．1软件程序发放刺激并收集记录信号。采用保持电位为一60 mV，刺激电位为一60 mV－＋60mV，步阶脉冲 10 mV，波宽 500 ms，刺激间隔 3 s的方波钳制方案进行刺激。 3．数据分析 记录的电流在 pCLAMP 5．5．1程序中进行分析和电流大小的测量／。。。幅度为刺激结束时相对于零电流水平的值，数据用 k。S表示，将同一细胞用药前后的电流值进行配对资料的 t检验，P＜0．05具有统计学意义。 实验 结 果 三种浓度的 NMB（0．1＊＊0卜mol·L叫）可使I卜。幅值分别由给药前的（33．62 t 2．00）pA／nF增至给药后的（35．68土互．87）PA／PF、（42．90 i 2·73）PA／PF和（59·36。二．39）PA／PF（n＝6f＜0．01）。其增加后分别为对照的1．06。o．02、1．28。O．03和1·77土0·09（n＝6，P＜0．01）倍。其它指令电位下1。m的改变也符合此趋势。 ·2· 讨 论 1．膜片钳技术及其在心血管研究中的应用 80年代初发展起来的膜片钳技术已成为研究细胞膜离子通 道和药物作用机制不可缺少的重要手段。膜片钳技术由离子单通 道记录和全细胞记录两部分组．成。近年来研究离子通道的变化对 细胞功能的影响以及在药物作用机制的研究中越来越多地采用全 细胞记录方式。 近年来，随着人们对高血压发病机制认识的不断深人，各类抗 高血压药物应运而生。其中开发作用于血管平滑肌钾通道的药物 成为研究的热点。本实验应用膜片钳技术全细胞记录模式观察了 NMB对血管平滑肌细胞Ih的作用，阐明其降压的离子机制。 2．大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞的制备 内脏血管床含有大量的阻力血管，承担着相当部分循环外周 阻力。另外内脏血管对循环中活性物质及药物十分敏感，所以，内 脏血管的舒缩在血压的变化以及高血压发病中的意义更为突出。 故本实验利用大鼠内脏肠系膜动脉A4－A。分支阻力血管平滑肌 细胞来研究NMB的降压作用正是从其对阻力血管的影响来阐明 其机制的。 本实验分离细胞的方法用较少的酶在二h内即能分得舒展的 长梭形细胞，具有较高的成活率（＞70助人所测电流均以电流密 度表示，以消除细胞大小不同所带来的实验误差，使结果具有更好 的可比性。 3．NMB对大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞I加的作用 钙激活钾通道在调节血管的舒缩活动中起着十分重要的作 用，其功能的正常与否直接影响着血管平滑肌的张力。已证明动 物血管平滑肌细胞主要存在大电导钙激活钾通道。细胞外Ca卜 。3·浓度升高及细胞膜去极化均可促进通道开放，钾离子顺电一化学梯度外流，导致细胞膜超极化，阻止细胞对C／”的摄取、储存和释放，使细胞内Ca卜浓度降低而引起血管舒张。研究表明，血管平滑肌细胞Kc。通道功能减弱是高血压发生和维持的主要原因之一。因此，近年来作用于Kc。通道的血管舒张剂受到广泛关注。 本实验条件下引出的外向钾电流主要包
邱妍妍[5]2011年在《高血压患者肠系膜动脉平滑肌细胞BK_(Ca)对NO敏感性的改变及机制的研究》文中提出目的：高血压(hypertension, HT)是冠心病、脑中风等众多心血管疾病的最大的独立危险因素,对人类健康影响极大,有效的降压可显著降低患者的死亡率。在高血压疾病的进程中,常伴随着血压调节的生理因素的异常,包括交感神经和血管活性物质如一氧化氮(nitric oxide, NO)水平的改变等。小动脉张力增高,外周血管阻力持续升高是高血压的主要表现,其机制至今尚未完全阐明。肠系膜动脉作为人体主要的内脏血管,在全身的动脉中所占比例最大,是形成外周阻力的主要血管,对循环中的活性物质敏感,对血压的调节具有重要意义。大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channels, BKCa)在血管平滑肌细胞膜上分布广泛,是血管平滑肌上主要的负反馈调节器,在调节血管平滑肌张力机制中起着重要作用。NO是一种内源性的血管舒张因子,也是调节心血管系统功能的重要的细胞信使分子,可通过激活BKca发挥其调节作用。目前关于NO与心血管疾病关系的研究多集中于高血压时NO分泌量变化的报道,而高血压状态下BKca对NO的敏感性是否有变化较少报道,深入讨论这些问题对揭示高血压发生的病理生理机制具有重要意义。本实验应用膜片钳单通道电流记录、实时荧光定量PCR和Western blot技术,观察高血压患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs) BKCa通道对NO的敏感性变化,以及测定在NO-BKca通路上与这种变化相关调控因子sGCα、sGCβ和cGKI的mRNA与蛋白表达水平的变化,进一步探讨原发性高血压发生发展过程中可能的离子通道功能变化,为高血压发病机制的阐明提供更多的实验依据。方法：(1)膜片钳实验：35例接受腹部手术的患者分为两组：高血压组(hypertension group,HT)20例,血压正常组(normotension group, NT)15例。取其切除的肠系膜动脉,纵向剖开剪成2 mm×2 mm的组织条块,置于酶液中进行两步消化。选取贴壁良好,折光性强,具有较强立体感,表面光滑的平滑肌细胞进行实验。取细胞置于对称性高钾溶液([K+]o:[K+]i=140:140mM)中,用单通道膜片钳技术记录电流,所得电流通过膜片钳放大器(CEZ-2200)放大,滤波(1 KHz)后输入计算机,经pClamp 6.0软件采集电流,Clampfit10.1软件系统进行数据分析。在细胞贴附式膜片(cell-attached)和内面向外式膜片(inside-out)上观察NO对BKca通道的影响,并比较HT组和NT组BKca通道对NO敏感性的变化。(2) Real-time PCR实验：①32例接受腹部手术的患者分为两组：HT组12例,NT组20例,取其切除的肠系膜动脉作为研究对象；②提取肠系膜动脉总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)构建标准品和标准曲线；③以GAPDH为内参照基因,采用SYBR Green I法实时荧光定量PCR技术检测高血压患者和正常血压患者肠系膜动脉平滑肌sGCα、sGCβ和cGKI基因mRNA水平。(3) Western blot实验：①32例HT组16例,NT组16例,取接受腹部手术患者切除的肠系膜动脉作为研究对象；②首先提取肠系膜组织总蛋白并测定样品蛋白浓度,将样品总蛋白上样于预灌制的12%聚丙烯酰胺凝胶中,60V,40分钟,过了浓缩胶后改为120V,40分钟进行电泳,然后恒流(390mA)转印50分钟,5%脱脂奶粉4°C封闭过夜。次日室温下将膜用sGCα、sGCβ和cGKI一抗孵育5h,洗膜之后用羊抗兔IgG二抗(1：5000)室温孵育l h,最后显色成像,采用Quantity One软件对sGCα、sGCβ和cGKI特异性条带进行半定量分析,同时用GAPDH蛋白的表达量做为内对照。结果：(1)急性酶分离的肠系膜动脉平滑肌细胞BKca通道的基本特性：①在对称性高钾溶液中,inside-out上,记录到的肠系膜动脉平滑肌细胞BKca通道电导值为200.0±6.97 pS(n=9),具有电压依赖性和钙敏感性。②在outside-out下(Vm=+30mV),200 nM的IbTX几乎能够完全阻断通道活动。(2)HT组与NT组BKca通道对NO敏感性变化的比较：①在cell-attached(Vm=+40mV)下,给予NO供体硝普钠(sodium nitroprusside, SNP) 100μM后NT组BKca通道开放概率(NPo)由0.007±0.002增至0.015+0.004(n=9,P<0.05),平均开放时间由5.339±1.389(ms)增至10.241±2.290(ms)(n=9,P<0.05),平均关闭时间由1289.492±299.291(ms)缩短至901.174+176.264(ms)(n=9,P<0.05)；给予SNP 100μM后,HT组BKca通道平均开放时间由6.010±1.557(ms)增至9.356±1.482(ms)(n=9,P<0.05),通道开放概率和平均关闭时间均无统计学上差异。电流幅值用药前后无明显变化。②在inside-out (Vm=+40 mV)下,给予SNP后NT组BKca通道开放概率(NPo)由0.004±0.001增至0.014±0.003(n=9,P<0.05),平均开放时间由4.837±0.978(ms)增至6.731±1.555(ms)(n=9,P<0.05)；平均关闭时间由1852.972±587.168(ms)缩短至762.020±213.296(ms)(n=9,P<0.05)。给予SNP 100μM后,HT组BKca通道平均开放时间由8.110±1.99(ms)增至10.271±2.345(ms)(n=9,P<0.05),通道开放概率和平均关闭时间均无统计学上差异。电流幅值用药前后无明显变化。③与NT组相比,HT组给予SNP后BKca通道开放概率增加倍数和平均关闭时间减少倍数均降低。(3)HT组sGCαsGβ和cGKI基因mRNA的变化：①总RNA质量：提取的总RNA通过紫外分光光度仪测量,A260/A280在1.80-2.10之间,A260/A230在1.90-2.20之间,浓度大于100 ng/ul,通过1%琼脂糖凝胶电泳得出,28S带和18S带明显,灰度比大于1,5S带不明显,无拖尾；②标准曲线和熔解曲线：标准曲线线性关系良好,相关系数R2>0.99。sGCa基因的标准曲线为y=-0.30x+7.28, R2=0.999; sGCβ基因的标准曲线为y=-0.30x+7.44,R2=0.998; cGKI基因的标准曲线为y=-0.29x+7.60, R2=1.000; GAPDH基因的标准曲线为y=-0.30x+7.40,R2=0.999。熔解曲线呈明显单峰状,退火温度与预测值基本一致；③HT组和NT组sGCα/GAPDH比值分别为0.1035±0.0322 (n=9),0.1843±0.0210 (n=15), HT组sGCa基因mRNA水平低于NT组,P<0.05；HT组和NT组sGCβ/GAPDH比值分别为0.0393±0.0064 (n=5),0.0712±0.0103 (n=8), HT组sGCβ基因mRNA水平低于NT,P<0.05；HT组和NT组cGKI/GAPDH比值分别为0.0271±0.0108 (n=8),0.0706±0.0164 (n=7), HT组cGKI基因mRNA水平低于NT组,P<0.05; (4)HT sGCα、sGCβ和cGKI蛋白表达量的变化：HT组和NT组sGCα、sGCβ和cGKI蛋白的相对表达量分别为0.5510+0.0220(n=15),0.6483±0.0468 (n=9);0.4583±0.0209 (n=16),0.7690±0.0392 (n=15); 0.5418±0.1028 (n=13),0.6692±0.0249 (n=11); HT组sGCα、sGCβ和cGKI蛋白表达水平低于NT组,P<0.05。结论：(1)在cell-attached和inside-out构型上,NO对人肠系膜动脉平滑肌细胞BKca均有激活作用。(2)在cell-attached和inside-out构型上,HT组BKca通道对NO敏感性降低。(3)在高血压疾病状态下,NO-BKca通路上sGCα、sGCβ和cGKI基因mRNA下调。(4)在高血压疾病状态下,NO-BKca通路上sGCα、sGCβ和cGKI蛋白表达下调。在高血压疾病状态下NO-BKca通路上sGCα、sGCβ和cGKI基因和蛋白表达水平的下调可能是引起BKca对NO的反应性降低的原因。
杨艳, 曾晓荣[6]2006年在《血管平滑肌钙激活钾通道及其在高血压发病中的功能异常》文中认为目的:血管平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)是血管平滑肌细胞膜电位的主要调控器,它调节血管张力。研究表明高血压时出现脉管张力增高及对扩张的血管的缓冲能力下降等多种病理状态与血管平滑肌BKCa功能变化有关,包括与BKCa对Ca2+火花的调节反应发生变化相关。本文综述高血压时血管平滑肌BKCa功能和结构变化的研究报道。
贾国栋[7]2003年在《新型抗高血压药物盐酸埃他卡林血管药理学作用特征的研究》文中指出高血压严重危害人类健康。目前抗高血压药物种类繁多，但选择性高、疗效好而副作用少的理想药物很少，因此研制能稳定降压、逆转器官损伤并能改善病人生活质量的新型抗高血压药物有着重要的意义。ATP敏感性钾通道开放剂(ATP-sensitive potassium channel openers,K_(ATP)COs)是近年来发展起来的一类新型抗高血压药物，具有效价高、作用强、高度心血管选择性和部分逆转心血管病理损害等特点。盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride,Ipt)是军事医学科学院毒物药物研究所设计与合成的脂肪胺类化合物，具有确切、平稳和持久的降低血压作用，对心率的影响轻；在高血压状态下降压作用强；可逆转高血压心脏和血管结构和功能重构；逆转高血压导致的脑和肾脏损伤；其心血管效应可被ATP敏感性钾通道特异性阻断剂格列苯脲拮抗，可占据KATP开放剂P1075的结合位点；在“两肾一夹”肾性高血压大鼠模型和肺动脉高压模型上，Ipt对动脉平滑肌的钾电流具有增强作用。提示Ipt具有K_(ATP)COs的某些药理学特征。另一组研究表明：在脑卒中易感型自发性高血压大鼠上，Ipt可逆转血浆中内皮素水平病理性增高；Ipt可对抗肺动脉内注射ET-1诱发的肺动脉高压。提示Ipt汪型扛窗血压扭物业区埃亿卡林血而扭理学作用特征的研死 申文勿县可能对内皮素系统功能产生影响。基于上述研究背景，本文旨在进一步研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林血管药理学作用特征。l盐酸埃他卡林赃性扩血管作用特征的研究 采用大鼠主动脉和尾动脉两种组织，对比观察Ipt对大、小动脉扩血管作用特征的差异。结果表明，Ipt在 10－’－10’‘moffe范围内对 KCI预致收缩的大鼠尾动脉血管条产生剂量依赖性舒张反应，且具有部分内皮依赖性，但对主动脉离体血管环无明显的舒张反应。提示，Ipt具有选择性舒张小动脉作用。…舒张大鼠尾动脉作用具有以下特征： （l）…舒张大鼠尾动邮用随着胞外 KCIO0－100。OI几）浓度的增加而降低，符合 K。PCOS在高浓度 KCI时舒血管效应明显减弱的特征。 cUpt舒张小动脉作用能被ATP敏感性钾通道阻断剂格列苯腺阻断，但不能被钙激活性钾通道阻断剂四乙锭、内向整流钾通道阻断剂B／和电压依赖性钾通道阻断剂个氨基吮嚏所桔抗。 （）…与此那地尔比较，后者对大、小动脉舒张作用不具有选择性；且无内皮依赖性，对格列苯腺的阻断效应不及Ipt敏感。 以）Ipt诱发自发性高血压大鼠尾动脉舒张反应较正常血压大鼠显著增强，并对格列苯脉的阻断效应更敏感，但内皮依赖性不明显。2盐酸埃他卡林对小动脉平滑肌细胞钾通洲用的特征 分别在急性分离的大鼠尾动脉和肺动脉平滑肌细胞上形成膜片钳全细胞记录方式，给子去极化方波刺激，皆可激活一种明显延迟；失活极为缓慢，具有明显电压依赖性的外向电流；将电极内液中的 KCI以同浓度的 CSCI替代，并在外液中加入钾通道阻断剂四乙铰OOmOI几）可完全阻断所记录的外向电流。说明本实验条件下方波刺激诱导的外向电流为钾电流，且具有明显的延迟整流特性。 罩医进修学欧俗士用位论文 刃4 页 淆丝扛胃血压厉物土区块他卡杜血社荷理攀作用特征的研兄 申文纫婴 在大鼠尾动脉平滑肌细胞上，… 10“mol／L对方波刺激诱发的钾电流 具有显著增强作用；在大鼠肺动脉平滑肌细胞上，Ipt 10”’m＊几和 10“ITI＊几 对诱发的钾电流均有显著增强作用，该作用能被KATP通道阻断剂格列苯豚 阻断。提示，仰具有增加小动脉平滑肌细胞外向钾电流作用，该作用与激 活KAh通道有关。 3大、小动脉内皮依莉性舒张反应特征的比较 在大鼠主动脉离体血管环上，用NO合酶抑制剂L－NAME，或／和鸟菩 酸环化酶抑制剂MB在不同环节阻断NO途径，可完全阻断ACh诱发的内 皮依赖性舒张反应；而用环氧化酶抑制剂Indo抑制环氧酶功能，只能部分 地阻断内皮依赖性舒张反应。提示，NO可能是介导大鼠主动脉内皮依赖 性舒张反应的主要因子。然而，在大鼠尾动脉血管条上：用L－NAME或／ 和 MB在不同环节阻断 NO途径，或用 Indo抑制环氧酶功能，皆能部分地 阻断ACh诱发的内皮依赖性舒张反应；用L－NAME或／和MB在不同环节 阻断NO途径的基础上，再用Indo阻断PGI。，仍不能完全阻断内皮依赖性 舒张反应。提示，在大鼠尾动脉中，除了NO和PGI。外，内皮细胞还释放 一种非 NO非 PGI。的扩血管物质（可能是内皮源性超极化因子），共同参 与内皮依赖性舒张反应。 本研究进一步证实了高血压状态下大、，］、动脉内皮依赖性舒张反应皆 明显受到抑制。在肾性高血压大鼠主动脉中，NO仍是介导内皮依赖性舒 张反应的主要因子，其主动脉内皮依赖性反应的减
郑永芳[8]1999年在《高血压内脏阻力血管平滑肌L型、T型钙通道与钙激活钾通道机制》文中指出至今高血压仍是危害人民健康的重要疾病。探明其外周阻力增高的血管机制,以期逐步完善其防治措施实属首要。本研究应用膜片箝技术的全细胞、细胞贴附与膜内向外方式,观察成年卒中易感型自发高血压大鼠(SHRsp)与
何加强[9]1996年在《SHRsp大鼠内脏阻力血管平滑肌钙通道动力学特征及其调节》文中认为高血压是危害人类健康的主要疾患之一，其发病机理迄今仍未明嘹。高血压的主要表现是血管张力持续升高及血管对各种加压物质的反应性增强所致的血压异常，故近年来有关高血压发病血管机制的研究受到高度重视。 内脏阻力血管的舒缩在形成外周阻力中具有重要作用。从一定意义上说，它们的活动直接决定着血压的高低。众所周知，平滑肌细胞收缩过程的启动与完成必须有钙离子的参与，细胞膜钙通道的启闭控制着经钙通道的外钙内流，是调节胞内钙浓度高低的主要途径。因此，质膜钙通道的功能活动直接影响着血管平滑肌细胞(VSMC)的兴奋收缩耦联，从而决定外周阻力血管张力，影响血压的高低。近年来，有关高血压大鼠血管平滑肌细胞钙通道的研究甚少，主要原因是高血压大鼠血管单个平滑肌细胞分离技术的困难以及平滑肌细胞钙电流太小和钙电流的Rundown现象．虽然已有的几篇报道认同高血压时VSMC钙通道功能异常，但亦发现许多矛盾的结果。那么在肠系膜动脉阻力血管段，高血压大鼠的VSMC钙通道活动的特性与调节是否发生了变化是亟待研究的问题，至今国内外尚未见报道。本实验的目的就是在改进肠系膜动脉阻力血管平滑肌单细胞酶法分离技术的基础上，采用膜片箝技术较为系统地研究阻力血管平滑肌钙通道在高血压时特性与调节的改变。 动物选用雄性卒中易感型自发性高血压大鼠SHRsp及常压对照大鼠Wistar。实验前，清醒状态下测量血压分别为200±11.9mmHg和96.9±6.9mmHg(P＜0.01)。动物断头处死，迅速取出肠系膜在充氧的有钙Kreb's液中分离制备好肠系膜动脉床，仔细选出A4-A5段阻力血管分支，剪碎后置无钙Kreb's液中酶法(胰蛋白酶、胶原酶和弹力酶)分离单个VSMC。全细胞及单通道记录用电极液和池子液均为我们基于文献修饰的溶液配方，主要特点是无钠、钾离子，并加入一定的通道阻断剂以排除其它膜电流干扰。全细胞刺激方式为：箝制电压(HP)为-40或-80mV，检测电压(TP)每步10mV阶跃从-30mV或-70mV至+70mV。稳态失活曲线(F∞)用双脉冲法记录。单通道刺激方式与全细胞方式类似，即HP=-40mV或-80mV，TP为-10mV、0mV和+10mV。膜片箝放大器为EPC-7型．所得结果用PCLAMP5.51软件处理。
叶海琼[10]2013年在《BKca-α、BKca-β1在妊娠期高血压疾病胎盘小动脉平滑肌中的表达》文中研究说明目的：妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy，HDCP）是严重危及母儿健康的妊娠期特有的疾病，其基本病理生理变化是全身小动脉痉挛，从而导致胎盘血流灌注减少，胎盘缺血缺氧。大电导钙激活钾通道（large-conductance calcium-activated potassium channels, BKCa）是在调节血管平滑肌张力机制中发挥重要作用的一种离子通道，因此提出了BKca通道在妊娠期高血压疾病中起血管舒张作用的观点。本实验通过检测大电导钙激活钾通道α亚基（编码基因KCNMA1）和β1亚基（编码基因KCNMB1）在妊娠期高血压孕妇和正常血压（normal tension，NT）孕妇胎盘小动脉平滑肌中表达的水平,了解妊娠期高血压疾病时大电导钙激活钾离子通道的功能变化，探讨大电导钙激活钾通道α亚基和β1亚基在妊娠期高血压疾病中的作用。方法：（1）RT-PCR实验:①15例确诊为妊娠期高血压疾病并终止妊娠的孕妇为病例组（HDCP组），15例终止妊娠的正常孕妇为对照组（NT组），取胎盘小血管组织块作为研究对象；②提取胎盘小动脉血管平滑肌总RNA、合成cDNA并进行PCR反应；③以β-actin为内参基因，将目的基因和内参基因所有PCR产物电泳后用凝胶成像系统成像并进行灰度值测定。（2）免疫印迹法（Western blot实验）：①研究对象同RT-PCR实验；②首先提取胎盘小动脉血管平滑肌总蛋白，将样品总蛋白上样于预灌制的聚丙烯酰胺凝胶中，选择合适电压进行电泳，然后恒流（400mA）转印2小时，5％脱脂奶粉中缓慢摇荡1小时。③室温下将膜用BKca通道α亚基、β1亚基的一抗（1:1000）进行孵育，洗膜之后用羊抗兔IgG二抗（1:2000）室温孵育1h，最后显色成像，用Quantity-One软件进行灰度分析，以β-actin为内参来校正目的蛋白的相对表达量。实验结果以均数±标准差（xˉ±s）表示。采用SPSS17.0进行配对t检验，P<0.05认为差异有统计学意义。结果：（1）RT-PCR技术检测人胎盘小动脉平滑肌BKca通道KCNMA1mRNA和KCNMB1mRNA的表达量：HDCP组KCNMA1/β-actin比值为1.0062±0.0776（n=15），NT组是0.9938±0.1151（n=15），两组比较差异无统计学意义（P=0.093＞0.05）；HDCP组KCNMB1/β-actin比值为0.4180±0.0197（n=15），NT组是1.5722±0.0314（n=15），两组比较差异有统计学意义（P=0.001<0.05），HDCP组KCNMB1基因mRNA水平低于NT组。（2）Western blot技术检测人胎盘小动脉平滑肌BKca通道KCNMA1和KCNMB1的蛋白表达量：HDCP组KCNMA1/β-actin比值为1.0012±0.1698（n=15），NT组是1.0282±0.1806（n=15），两组比较差异无统计学意义（P=0.091＞0.05）；HDCP组KCNMB1/β-actin比值为0.4181±0.0808（n=15），NT组是1.6168±0.0126（n=15），两组比较差异有统计学意义（P=0.001<0.05），HDCP组KCNMB1蛋白水平低于NT组。结论：（1）在妊娠期高血压疾病状态下，胎盘小动脉平滑肌BKca通道α亚基编码的KCNMA1基因mRNA水平无明显变化，β1亚基编码的KCNMB1基因mRNA水平表达明显下调。（2）在妊娠期高血压疾病状态下，胎盘小动脉平滑肌BKca通道α亚基的蛋白表达水平无明显变化，β1亚基的蛋白表达水平明显下调。
参考文献：
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[9]. SHRsp大鼠内脏阻力血管平滑肌钙通道动力学特征及其调节[D]. 何加强. 中国协和医科大学. 1996
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