摘要：目的：分析结核患者结核杆菌检验的方法及效果。方法：选择2016年1月-2016年12月在我院接受治疗肺结核患者60例，分别经由荧光定量PCR检查、痰涂片检查、涂片金胺“0”染色法、T-SPOT.TB检测法进行检测，分析5种检查结果阳性率。结果：60例肺结核患者TB-PCR检查、罗氏改良痰培养、痰液直接厚涂片检查、涂片金胺“0”染色法、T-SPOT.TB检测法检测阳性率分别为71.67%（43/60）、93.33%（56/60）、75.00%（45/60）、68.33%（41/60）、58.33（35/60）。结论：肺结核患者经由罗氏改良痰培养检验痰结核杆菌准确率较高，建议进一步在临床应用及推广。
关键词：结核；痰结核杆菌；血液标本；血液检验
肺结核是由结核杆菌感染肺部造成的传染性疾病，可累及机体多个脏器及系统，还能够与其他疾病相互影响，进一步加重病情，尤其是对于老年、幼儿等特殊患者而言，影响更加严重，不仅病情发展快，复杂多变，而且很容易出现诸多并发症，治疗效果也有限，引发多器官衰竭风险也明显高于普通患者。我国目前已经成为肺结核发病的重灾区，若未能及时得到有效治疗，可导致患者病情进一步发展，甚至发展至难治性肺结核。因此早期诊断治疗就显得非常重要[1-2]。通常情况下，肺结核多经X线检出，但很多肺结核患者多无典型肺结核典型影像学检查，导致很容易出现假阳性[3]。本次研究选择2016年1月-2016年12月在我院接受治疗肺结核患者60例，收集其痰液、血液标本，分别经由PCR检查、痰涂片检查、罗氏培养法等五种实验室检测方法进行检测，分析检查结果阳性率，获得一定检验成果，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
本次研究选择2016年1月-2016年12月在我院接受治疗肺结核患者60例，其中男性53例，女性7例，年龄18-70岁，年龄平均（30.56 9.74）岁，病程4个-43年，病程平均（29.60 10.18）年；60例中包括复治者9例，约占15.00%；主要临床表现包括咳嗽、气短、咯痰、胸部疼痛、浑身乏力、纳差、体温上升、盗汗以及消瘦等。
1.2本次研究对象纳入标准如下
本次研究对象纳入标准如下：（1）临床资料完整，研究中途无脱出；（2）入院后给予CT影像学检查、肺组织活检等检查，结合药敏试验结果，临床表现，明确肺结核诊断；（3）精神系统正常，能够与人正常交流，能够阅读文字资料；（4）对本次研究内容知情，自愿参与，患者本人、家属或法定代理人同意与医院签订知情同意书。
1.3本次研究排除标准
本次研究对象排除标准如下：（1）临床资料不完整，经沟通后，不愿意配合本次研究者；（2）除肺结核以外的其他传染性疾病，结核杆菌感染其他脏器[4]；（3）肿瘤，凝血障碍、白血病等血液系统疾病；（4）心肝肾等严重脏器疾病；（5）其他不适合参加本次研究者。
1.4检验方法
1.4.1痰液标本收集方法
所有患者均收集其晨起痰液标本，即晨起深呼吸后，咳痰，由专门容器收集；若患者无法咯出痰液，则收集其咽拭子标本，也就是肺部分泌物。所有标本采集完毕后送检实验室进行进行检验。
1.4.2血液标本收集方法
所有人均在清晨空腹状态下抽取肘部静脉血2ml。所有标本采集完毕后，妥善保存，并送检实验室进行进行检验。
1.4.3检验仪器及试剂
本次研究检验仪器及试剂主要包括光学显微镜，型号奥林巴斯CX23，实时荧光定量PCR仪，型号为安捷论Mx3000；所有试剂均与检验方法保持一致。其他主要检验研究仪器以及试剂包括：（1）高速离心机及微型离心机；（2）微型混匀器；（3）水浴箱；（3）冰箱，-80℃；（4）生物安全柜；（5）干式恒温箱；石炭酸复红染液，95%乙醇等。
1.4.4荧光定量PCR检查
取适当NaOH溶液，与痰液标本进行混合，置于37℃环境下，停留40min；混合液进入离心机离心，去除上清液，将剩下混合液使用生理盐水冲洗处理，直至检验pH结果为中性：样本处理→提取DNA→PCR扩增，按照荧光值变化情况，评估结核杆菌检验阳性率，其中荧光信号为FAM465-510nm通道。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆
1.4.5罗氏改良痰培养
选择罗氏改良痰培养试剂，严格遵守试验操作规程：获取痰标本→改良罗氏培养基接种利用碱处理法→培养第3、7d观察细菌生长情况，第7d后有菌落生长，其抗酸染色（+），痰培养结果（+），培养8周后，仍无任何细菌菌落生长，则痰培养结果（-）。
1.4.6直接厚痰涂片检查
痰液标本经尼式抗酸染色后，涂片（2.5×2.0cm痰膜，呈卵圆形），置于光学显微镜下观察，3-9条/100视野可诊断为阳性；阅片后，玻片经脱油干燥后按照序号妥善保存，以备复检。
1.4.7涂片金胺“0”染色法
痰液标本经荧光染色→蒸馏水洗→酒精脱色→复染漂洗→晾干镜检备用步骤依次处理痰液标本，其中试验操作严格遵守相关规章制度及试剂说明书完成。
1.4.8T-SPOT.TB
收集肢体末端静脉血标本，经肝素抗凝，利用T-SPOT.TB试剂盒采取酶联免疫斑点技术完成检验操作，其中严格遵守试剂说明书完成。
1.5统计学分析
本次研究选择SPSS18.0软件对数据进行统计学分析，经由率（%）表示计数资料，施行 检验，当 <0.05，提示数据差异显著，能够获得统计学意义。
2.结果
60例肺结核患者TB-PCR检查、罗氏改良痰培养、痰液直接厚涂片检查、涂片金胺“0”染色法、T-SPOT.TB检测法检测阳性率分别为88.89%（53/60）、93.33%（56/60）、75.00%（45/60）、68.33%（41/60）、58.33%（35/60），其中假阳性为5.00%（3/60）、1.67%（1/60）、13.33%（8/60）、15.00%（9/60）、16.67%（10/60），对比阳性率及假阳性率， =16.8493、10.6180， =0.0015、0.0145。
3.讨论
肺结核是一种常见的呼吸系统传染性疾病，传播速度很快，若未能及时接受有效诊断及治疗，很容易引发结核杆菌感染其他脏器或系统，比如骨结核、肠道结核、肾脏结核，不仅带给患者较大痛苦，还能提高治疗难度，加速病情进展，延长治疗时间，增加脏器功能衰竭风险[5-6]。随着我国医疗水平的不断深入发展，对肺结核防控力度的逐步加强，加上民众对于医疗卫生要求的逐渐提高，综合作用之下，很多结核患者获得了及时有效的治疗。但据医学调查显示，肺结核患者发病率仍然居高不下，现已成为全世界突出的公共卫生问题。
肺结核发病早期，并无典型临床表现，而且由于症状复杂多样，很容易被其他疾病所掩盖，出现误诊及漏诊情况，致使病情进一步发展，不利于治疗及预后。肺结核病情一般比较长，多经痰培养完成检验过程，少数依靠血液标本完成检测结核菌过程[7-8]。本次研究中TB-PCR检查、罗氏改良痰培养、痰液直接厚涂片检查、涂片金胺“0”染色法均为痰培养方法，T-SPOT.TB检测法则是获取外周血样本后经肝素抗凝后检测，5种检验方法中，阳性率最高者罗氏改良痰培养，其次为TB-PCR检查，而T-SPOT.TB阳性率58.33%，但需要注意的是，该方法选择检验血液样本，极大地丰富了检验素材与方法，能够在检测痰液不方便的时候，提供结核分枝杆菌的检验服务。
总之，肺结核患者经由罗氏改良痰培养检验痰结核杆菌准确率较高，但临床使用时需结合其他检查结果、临床表现进行综合判断，并选择合适的检验方式。
参考文献：
[1]文岚，王孝君，郭彦昌，等.痰中结核分枝杆菌DNA提取方法的比较及在LAMP检测中的应用[J].湖南师范大学学报（医学版），2013，10（3）：61-65.
[2]孙娜.结核杆菌抗体检测在结核病诊断中的应用价值[J].中国医药指南，2016，14（15）：40-41.
[3]张全华，李桂霞，白洁，等.皮肤结核实验室检测方法的比较研究[J].西部医学，2016，28（7）：1009-1012.
[4]王艳玲.血清结核杆菌标本抗体检测对结核病诊断的意义[J].医疗装备，2016，29（23）：134-135.
[5]许宏涛，陈东科，赖惠英.结核分枝杆菌四种常用方法检测比较[J].中国热带医学，2015，15（05）：612-614.
[6]戴振华.结核分枝杆菌抗原定量检测技术的建立及其初步评价[D].北京：中国人民解放军军事医学科学院，2014.
[7]凌显桢，罗建文.结核分枝杆菌实验室检测方法的研究进展[J].中国当代医药，2013，20（1）：21-22.
[8]李宁，伍严安，胡辛兰，等.结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药情况分析[J].实验与检验医学，2013，31（3）：214-216.
论文作者:于江
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第12期
论文发表时间:2017/9/12
标签：肺结核论文; 涂片论文; 标本论文; 结核杆菌论文; 患者论文; 结核论文; 分枝论文; 《中国误诊学杂志》2017年第12期论文;