湖南省郴州市第一人民医院检验科 423000
【摘 要】目的：分析探讨CYP3A5基因多态性对肾移植患者术后他克莫司血药浓度/剂量比值（C/D）的影响。方法：选取我院在2017年2月-2018年6月间所收治的70例行肾移植患者作为此次研究对象，对肾移植患者CYP3A5基因多态性进行检测，同时观察并统计不同基因型对于血药浓度/剂量比的影响。结果：术后3个月，CYP3A5 *3/*3基因型患者术后血药浓度/剂量比均比基因型 *1/*1和 *1/*3明显偏高，对比差异明显，P<0.05，具有统计学意义。结论：CYP3A5基因多态性对肾移植患者术后服用他克莫司血药浓度/剂量比产生一定的影响，CYP3A5 *3/*3基因型患者他克莫司血药浓度与剂量比值较高。
【关键词】肾移植；他克莫司；血药浓度；CYP3A5基因多态性
他克莫司（FK506）是肾移植后患者需要终生服用的一线免疫抑制剂，但其治疗窗狭窄，病人服用后血药浓度个体间差异大，这极大地困扰着临床医生的合理用药，使得临床上经常有应用FK506后难以达到合适的治疗浓度而导致急性排斥或因血药浓度过度升高而产生毒性及不良反应报道的例子[1]。细胞色素P450 3A5（CYP3A5）是FK506的主要代谢酶之一，其基因的多态性可以明显影响CYP3A5的表达和酶活性，这使得不同基因型的病人代谢FK506速度极不一样。为了了解CYP3A5基因多态性对FK506代谢的影响，更好地指导FK506的临床使用，此次研究将检测移植患者的CYP3A5基因型，检测患者的FK506血药浓度，分析CYP3A5基因型与FK506/剂量比的关系。现将此次研究结果报告如下：
1 资料与方法
1.1一般资料
选取我院在2017年2月-2018年6月间所收治的70例行初次肾移植患者作为此次研究对象，所有患者均排除术后1个月内存在肝肾功能障碍，由于手术原因导致移植物失功以及服用利福平与红霉素等对CYP活性造成影响的药物，且所有患者均对研究知情并签署知情同意书。其中男性患者42例，女性28例，患者年龄分布在18-53岁，平均年龄为（39.2±1.3）岁；患者体重分布在36-78 kg，平均体重为（56.3±2.3）kg。依照CYP3A5基因多态性，将70例肾移植患者分为三组，即18例* 1/*1型、24例*1/* 3型与28例*3/*3型。
1.2方法
（1）他克莫司血药浓度的测定[2]：对所有患者于肾移植以后7 d-3个月内均给予临床及实验室评价。其中临床评估主要包括患者的体重、他克莫司药物每天的剂量及其血药浓度，统计血药浓度/剂量比值（C/D），其中C为血药浓度（μg/L），D是每日患者药物的服用剂量[mg/（kg?d）]。要求患者在前1 d晚上7时服用他克莫司药物，并于次日早晨7点在服药前抽取1 mL血量，同时置于15%的EDTA-Na2进行抗凝，运用ELISA法对他克莫司药物的血药浓度进行检测。
（2）DNA提取与CYP3A5基因多态性的分析：在空腹状态下，在10 mL静脉血中加入EDTA-Na2进行抗凝处理。运用改进盐析法对其外周白细胞中的DNA进行提取，DNA的提取物在-2℃下予以长期保存，在4℃予以短期保存。运用PCR-RFLP法对CYP3A5基因多态性进行检测，PCR引物由上海钰森生物有限公司提供，其中正引物为5'-CAT CAG TTAGTAGAC AGA TGA-3'，负引物为5'-GGT CCA AAC AGGGAAGAA ATA-3'。而PCR的反应条件主要包括变性、退火与延伸三步，分别为95℃30 s、55℃30 s及72℃30 s，共包括35个循环，选取7μL PCR的扩增产物对限制酶SspⅠ在37℃条件下孵育酶切3 h，而酶切产物通过4%的琼脂糖溴乙锭进行电泳分离，并在紫外灯条件下进行观察和判读。PCR其扩增产物的长度为293 bp，经过SspⅠ酶切以后，*1等位基因共包括三个片段，即148 bp、125 bp与20 bp，而*3等位基因给共包括168 bp与125 bp两个片段。
2 结果
术后3个月，CYP3A5 *3/*3基因型患者术后血药浓度/剂量比均比基因型 *1/*1和 *1/*3明显偏高，对比差异明显，P<0.05，具有统计学意义。具体数据详见下表1：
表1 CYP3A5 不同基因型患者于肾移植后C/D值比较[]
3 讨论
他克莫司（FK506）是一种强效的免疫抑制剂，是从放线菌中分离出来的发酵产物，属大环内酯类抗生素。自从1989年Starzl首次用于肝移植病人，取得良好效果后，短短几年内，FK506在世界范围内得到了广泛的应用，其对预防及治疗急性排斥反应的良好疗效得到移植专家的一致肯定。但是FK506的治疗窗窄，血药浓度过高或用药控制不好常常发生药物不良反应，其中主要为肝毒性、肾毒性，也可见神经毒性、胃肠道反应、血液系统等。
FK506主要在人体肝脏和肠道代谢，主要代谢酶是细胞色素CYP3A酶系，包括CYP3A4、CYP3A5等。研究表明，编码这两种代谢酶相关基因多态性会影响CYP3A4和CYP3A5的活性及表达量，进而可能影响FK506的药动学，引起药物代谢个体差异，YP3A5其表达及活性表现出高度的多态性，且个体与种族间的差异性比较大[3]。为了了解CYP3A5基因多态性对FK506代谢的影响，更好地指导FK506的临床使用，此次研究以我院所收治的70例行初次肾移植患者作为此次研究对象，对肾移植患者CYP3A5基因多态性进行检测，同时观察并统计不同基因型对于他克莫司浓度/剂量比的影响，以便指导肾移植术后患者合理用药，提升用药的安全性与有效性。研究结果表明，术后3个月，CYP3A5 *3/*3基因型患者术后血药浓度/剂量比均比基因型 *1/*1和 *1/*3明显偏高，对比差异明显，P<0.05，具有统计学意义。
综上所述，CYP3A5基因多态性对肾移植患者术后服用他克莫司血药浓度/剂量比产生一定的影响，CYP3A5 *3/*3基因型患者他克莫司血药浓度与剂量比值较高。
参考文献：
[1]程颖，李弘，杨蕾，等.CYP3A5基因多态性对肾移植受者他克莫司血药浓度的影响[J].中国医刊，2016，51（12）：39-42.
[2]卫泽武，王学彬，张文文，等.CYP3A5*3基因多态性对稳定期肾移植受者他克莫司血药浓度及肾功能的影响[J].中国药房，2018，16（2）：183-187.
[3]朱琳，常水，曲振华，等.CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性与肾移植受者他克莫司血药浓度的关系[J].肾脏病与透析肾移植杂志，2017，10（6）：522-527.
基金项目：
湖南省郴州市第一人民医院资助科研项目（N2010-036）。
论文作者:江杨华,龚烨,李艳
论文发表刊物:《兰大学报（医学版）》2018年5期
论文发表时间:2018/9/20
标签：多态性论文; 浓度论文; 患者论文; 剂量论文; 基因论文; 肾移植论文; 术后论文; 《兰大学报（医学版）》2018年5期论文;