陈龙 常芮晗 （齐齐哈尔第一医院 161000）
摘要：目的 分析观察人参皂苷免疫纳米（VRIN）对裸鼠人胃癌NUGC-4组织中血管内皮生长因子D（VEGF-D）表达的影响。方法 将36只裸鼠放置于人胃癌NUGC-4组织中，根据干预方法的不同分为3组，分别为A组（n=12，生理盐水干预）、B组（n=12，5-Fu干预）及C组（n=12，VRIN干预）。通过免疫组织化学、Real time-PCR对胃肿瘤组织中的VEGF-D蛋白和mRNA表法进行检测。结果 A组、B组和C组淋巴转移率分别为83.33%、50.00%和8.33%。组间比较中发现，A组与C组淋巴转移率存在统计学差异（P<0.05）；A组与B组未体现统计学价值（P>0.05）。B组和C组得VEGF-D蛋白表达均低于A组（P<0.05）。结论 VRIN对抑制胃癌细胞裸鼠淋巴结细胞转移具有明显作用，而VEGF-D蛋白和mRNA表法则是VRIN预防和治疗胃癌淋巴结转移可能机制。
关键词：人参皂苷免疫纳米；胃癌；内皮生长因子D；实验分析
促使胃癌发展的是淋巴结转移，经历多年研究还是无法确定其机理和意义。近年来，VEGF-D被发现对淋巴管内皮生长因子和受体，对胃癌细胞分泌VEGF-D起到明显的抑制作用，此外还可阻断VEGF-D和受体VEGFR-3的结合，成为了胃癌转移方面的研究重点。本次研究将VEGFR-3作为介导，备置VRIN。将36只裸属建立在人胃癌NUGC-4移植模型中，详细观察其对VEGF-D表达的影响，进一步探究VRIN在胃癌防治中作用机理。
1实验材料
1.1动物与瘤株
使用无胸腺裸鼠36只，均为雄性鼠，体重介于18~20g，平均（19.43±3.56）g。采用美国AntiCaneer企业提供的红色荧光蛋白标记人胃癌细胞株，将细胞接种在裸鼠皮下，得瘤后，传代称为实体瘤。
1.2药物和试剂
人参皂苷免疫纳米（VRIN）被由制定药物研究室提供，当VRIN变为淡黄通明液体时，使用TEM观察到乳滴呈现为球形，分别将其粘度、电导率以及折光率等指标算出。VEGFR-3抗体则购买于天津金耀基酸有限公司；VEGF-D一抗则是选购英国Abcam公司；用于免疫组化检测试剂盒则选购福州迈新生物技术开发有效公司。
2实验方法
2.1造模、给药与分组
将备好得NUGC-4-RFP肿瘤胃癌放在培养液中，将之分割为1x1x1mm碎块。予以小鼠常规肌肉注射麻醉，待小鼠无痛觉后，借助显微镜工具，为裸鼠开展外科手术，于裸鼠左腹部做一纵向切口，将裸鼠胃暴露。将分割好的NUGC-4-RFP碎块放置裸鼠大弯部中，尔后缝合腹腔。手术需严格按照外科手术标准实施。结束6只裸鼠造模后，依据干预方法的差异分为三组，分别为A组（n=12，生理盐水干预）、B组（n=12，5-Fu干预）及C组（n=12，VRIN干预）。其中A组每次予以0.2ml生理盐水尾静脉注射干预；B组则是予以20mg/kg5-Fu注射腹腔注射干预；C组则是按照1mg/kg的标准予以VRIN尾静脉注射干预。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆3组完成不同的药物干预后，使用麻醉通过脱颈将荷瘤鼠处死，然后将裸鼠解剖，予以开放式荧光成像处理，根据得到的红色荧光表达的结果判断淋巴结转移的具体情况。迅速切取原发肿瘤和转移病病灶肿瘤，将之放置在含有4%浓度的甲醛和液氮中，以备后期研究使用。
2.2胃癌组织中VEGF-D蛋白表达检测
均按照试剂盒说明书开展瘤组中中VEGF-D蛋白表达进行检测。尔后将之放在10x20倍视野下，选出3个视野，通过计算机图像分析系统对3个选出视野展开分析，反映的光密度值越大，VEGF-D蛋白表达就会越明显[1]。
3结果
3.1 3组淋巴结转移情况分析
在实验结果中，A组、B组和C组淋巴转移率分别为83.33%、50.00%和8.33%。组间比较中发现，A组与C组淋巴转移率存在统计学差异（x2=13.594，p=0.000）；A组与B组未体现统计学价值（x2=3.000，p=0.083）。
3.2 3组原位移植瘤组织中VEGF-D蛋白表达分析
实验结果分析中，A组、B组和C组光密度值分别为（0.27±0.02）、（0.19±0.01）、（0.18±0.02）。A组与B组VEGF-D蛋白表达比较具备统计学价值（t=12.394，p=0.000）；A组与B组VEGF-D蛋白表达比较具备统计学意义（t=11.023，p=0.000）；明显可见B组和C组得VEGF-D蛋白表达均低于A组。
4讨论
近几年来，VEGF-D得发现促使胃癌淋巴结转移研究得以进一步发展，其表达与胃癌预后有着密切关联。人参昂贵得中药，具有明显得抗肿瘤效果，起到抑制肿瘤血管新生合调节肿瘤细胞得蛋白表达的作用[2]。
本次研究结果中可知，人参皂苷免疫纳米（VRIN）可有效抑制胃癌淋巴结转移，此外还可以将VEGF-D水平表达下调。由此可见，VRIN可以有效抑制胃癌肿瘤的转移，及时调整VEGF-D水平表达，有很大的概率是VRIN预防及治疗胃癌淋巴结转移的作用机制[3]。
综上所述，通过实验结果分析提示VRIN可能是一种抗胃癌细胞转移的有效药物，值得更加深入研究，为相关研究者提供有效借鉴。
参考文献
[1]马俊，鲁建军，缪蓉，等. 食管鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子C、D的表达变化及意义[J]. 山东医药，2016，56（37）：90-92.
[2]赵静静. 人参皂苷免疫纳米对胃癌荷瘤裸鼠侵袭转移及VEGF--C、TGF--β1表达的影响[D]. 南京中医药大学，2016，9（32）：23-102.
[3]戴小军，王维民，罗玉妍，等. 人参皂苷免疫纳米对裸鼠人胃癌NUGC-4组织中血管内皮生长因子D表达的影响[J]. 江苏中医药，2014，46（8）：76-78.
论文作者:陈龙 常芮晗
论文发表刊物:《航空军医》2018年5期
论文发表时间:2018/5/31
标签：胃癌论文; 淋巴结论文; 蛋白论文; 人参论文; 内皮论文; 免疫论文; 统计学论文; 《航空军医》2018年5期论文;