【摘要】目的:对强直性脊柱炎患者的人类白细胞相关抗原B27（HLA-B27）采用流式细胞术进行检测的方法进行分析，并探讨其阳性率和强直性脊柱炎的关系。方法:选取本院在2012年2月～2013年10月间收治的100例强直性脊柱炎患者与50例进行健康体检人群，将前者设为观察组，将后者设为对照组，给予两组受检者采用流式细胞术对HLA-B27进行检测，观察两组受检者HLA-B27的阳性率。结果:经过检测后，观察组与对照组的HLA-B27的阳性率明显具有差异性，两组对比具有差异性，P<0.05，统计学有意义。结论:通过采用流式细胞术对人体中的HLA-B27进行检测，能够尽早的对强直性脊柱炎患者进行诊断与治疗，具有显著的临床价值。
【关键词】流式细胞术 HLA-B27 强直性脊柱炎
【中图分类号】R446.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）35-0168-02
Flow cytometry detection of HLA B27 - in patients with ankylosing spondylitis clinical studies
【Abstract】Objective: in patients with ankylosing spondylitis human leukocyte antigen B27 related (HLA B27) using flow cytometry to detect method is analyzed, and its positive relationship with the laymen spondylitis. Selection methods: our hospital in between 2012 february and 2013 october of 100 patients with ankylosing spondylitis and 50 cases of healthy check-up crowd, set as the observation group, the former to the latter set as control group, give two groups of subjects using flow cytometry to detect HLA, B27, observe two groups of subjects of HLA, B27 positive rate. Results: after test, the observation group and control group of HLA - B27 positive rate has obvious difference, comparing the two groups have differences, P < 0.05, statistically significant. Conclusion: by using flow cytometry to detect HLA B27 - in to the human body, as soon as possible for diagnosis and treatment in patien-ts with ankylosing spondylitis, has significant clinical value.
【Key words】 flow cytometry HLA B27 Ankylosing spondylitis
强直性脊柱炎（AS）主要是以中轴关节慢性炎症为主的一种全身性的自身免疫性疾病，该种疾病在人体的骶骼关节、髋关节、椎间关节，更为严重的还会对患者的内脏以及其他的组织造成影响，发展为慢性进展性炎性疾病[1]。根据有关数据统计，在AS患者中其HLA-B27是呈现阳性状态。为了能够进一步的对人体中的HLA-B27进行检测，从而尽早的做出诊断，文章将选取本院在2012年2月～2013年10月间收治的100例强直性脊柱炎患者与50例进行健康体检人群，将前者设为观察组，将后者设为对照组，详细报告结果如下。
1 资料与方法
1.1临床资料
选取本院在2012年2月～2013年10月间收治的100例强直性脊柱炎患者与50例进行健康体检人群，将前者设为观察组，将后者设为对照组。其中男性受检者有91例，女性受检者有59例，年龄在15～45岁，平均年龄为26.3±3.1岁。其中观察组受检者均符合强直性脊柱炎的诊断标准；对照组受检者身体并无显著临床炎症性病症。
1.2方法
给予两组受检者采用流式细胞术对HLA-B27进行检测，其检测方法如下。
1.2.1材料准备
选择美国BD公司所生产的FACScalibur流式细胞仪，试剂选择北京利文公司所提供的抗HLA-B27FITC/抗CD3PE抗体、溶血素。
1.2.2检测方法
⑴抽取两组受检者的外周静脉血2ml，将其加入到ACD抗凝的真空采血管中，并轻轻摇匀；
⑵使用移液器将已经混匀的抗凝血50ul加入到加入了30ul抗HLA-B27/抗CD3PE抗体的流式细胞仪所专用的试管底部；
⑶在每一管的试管中加入1:10稀释的溶血素2ml,低速混匀，在常温下，避光12min；
⑷低速离心机以1200r/min的速度对试管中的液体离心5min，将上清液除去；
⑸留50ul液体在试管的底部，使用低速混匀，并加入300ulPBS缓冲液重悬细胞，低速混匀后进行检测；
⑹先用caliBRITE beads和HLA B27calibation beads调试仪器，并通过试剂批号的后缀确定界值(decision maker)的位置；
⑺在BD公司的HLA-B27自动软件下获取15000个细胞，检测其中的T淋巴细胞HLA-B27FITC信号的荧光强度[2]，进行数据自动分析。
1.3观察指标
将所有受检者最终检测HLA-B27FITC信号的荧光强度与decision marker的值进行对比，decision marker的值为147。当其检测值≥HLA-B27的界值时阳性，＜HLA-B27的界值，为阴性[3]。
1.4统计学分析
两组受检者经过检测的数据阳性率采用SPSS10.0统计学软件进行数据处理，计量资料采用t进行检验，当P<0.05时，具有差异性，统计学有意义。
2 结果
经过检测后，观察组与对照组的HLA-B27的阳性率明显具有差异性，两组对比具有差异性，P<0.05，统计学有意义，详情见表1。
表1 两组受检者HLA-B27阳性率
3 结论
3.1强直性脊柱炎与流式细胞术
强直性脊柱炎在临床的发病上比较缓慢，而且也比较隐匿，因此在日常的常规诊断中很难被发现。其主要的临床症状是腰背疼痛，在活动后会有好转的迹象，在静止休息的时候会加重疼痛。如果不及时进行治疗，将会造成严重的骨质酥松、骨折，更有甚者会发生致残的情况，严重影响患者的日常生活活动[4]。且该种疾病在后期的预后效果非常差，会对患者关节造成严重的并发症。而流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或是其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段。其能够高速的分析上万个细胞，并同时从一个细胞中检测多个参数，具有速度快，精度高、准确性高的优点。因此采用流式细胞术对强直性脊柱炎患者进行检测，能够有效的检测出其阳性率。
3.2强直性脊柱炎与HLA-B27
在正常人群中，HLA-B27的阳性率在4%～8%之间，通过表1可以了解到对照组的阳性率为6%，这就与相关文献吻合。且观察组受检者的HLA-B27的阳性率明显高于对照组的HLA-B27的阳性率，这就证明了HLA-B27是与强直性脊柱炎的发病具有一定联系的。HLA-B27是一种具有高度遗传多态性的人类白细胞抗B作为上的一个等位基因，其位于人第6号染色体的断臂上，是由8个外显子与7个内含子所组成的糖蛋白[5]。该种产物在免疫系统中主要对细胞之间的相互识别与诱导免疫反应进行负责，能够调节免疫应答。在正常的情况下，HLA-B27的表达水平比较低，但是经过细胞毒性T淋巴细胞在凶险的发育过程中的阳性与隐性的选择后，因为其不能够诱导克隆删除与激发免疫应答，因此就会造成自身免疫反应对组织造成损伤。
参考文献
[1]倪吴花,胡晓霞,章圣辉等.强直性脊柱炎867例HLA-B27的表达及意义[J].实用医学杂志,2008,24(9):1511-1513.
[2]周文英,汤艳萍,叶于阗等.流式细胞术检测HLA-B27临界值的设置对强直性脊柱炎诊断的影响[J].中国实验诊断学,2009,13(6):732-734.
[3]朱宇芳.流式细胞术检测人类白细胞抗原-B27在诊断强直性脊柱炎中的价值[J].国际检验医学杂志,2010,31(7):735-736.
[4]赵晓君,薛鸾,陈云飞等.三种方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27的效果比较[J].山东医药,2011,51(43):48-49.
[5]刘波,邱萌.HLA-B27表达阴性的早中期强直性脊柱炎患者调查[J].中国医药导报,2011,08(12):63-64.
论文作者:张英哲
论文发表刊物:《医药前沿》2013年第35期供稿
论文发表时间:2014-3-7
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