赵树巧 刘冰 薛辉 杨宪武
（石家庄市第一医院消化内三科 河北石家庄 050011）
【摘要】目的：通过对126例初治慢性乙型患者进行HBV P区扩增测序，观察已知耐药位点检测情况，并分析与临床特征的相关性。方法：应用QIAamp DNA Blood Mini Kit从患者血清样本中提取病毒DNA，采用巢式PCR扩增P区802bp核苷酸片段，通过测序，得出序列的变异位点与基因型。结果：126例患者中检出10例患者存在已知耐药位点变异，占7.94%，检出耐药位点患者与未检出耐药位点患者在性别、年龄、HBV DNA及基因型构成进行比较，差异均无显著性意义。结论：126例初治慢性乙型肝炎患者中有7.94%的患者检出耐药变异，耐药变异的检出率与患者的性别、年龄、HBV DNA及基因型构成均无显著相关。
【关键词】慢性乙型肝炎；预存耐药；临床特征
【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）04-0140-02
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是严重威害人类健康的病毒性疾病之一，全球约有3.5亿慢性HBV携带者，每年死于HBV感染相关的终末期肝病达到100万[1]。有效的抗HBV治疗不仅可以抑制病毒复制，还可延缓了病情的进展。目前用于治疗CHB的抗病毒药物有干扰素和核苷（酸）类似物（nucleos(t)ide analogues,NAs）。虽然NAs抗病毒治疗的有效率高于干扰素，但长期应用NAs后，部分患者会出现耐药变异，导致治疗失败。本文将对126例初治CHB患者的血清进行已知NAs耐药位点的检测分析，为CHB患者优化抗病毒治疗提供一定的实验依据。
1.资料与方法
1.1临床资料
本研究共纳入2013年1月至2015年5月在我院门诊或住院治疗的126例初治CHB患者，诊断标准符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》[2]。入组患者男性96人，占76.19%、HBeAg阳性患者78人，占61.90%。
1.2方法
1.2.1PCR扩增目的片段 所有患者均采集5ml全血，离心后取上清，应用QIAamp DNA Blood Mini Kit从血清样本中提取病毒DNA，HBV目的片段的扩增采用巢式PCR扩增，引物序列参考文献中采用的引物序列[3]。
1.2.2目的片段测序 PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，回收纯化，送北京诺赛基因组研究中心有限公司进行测序，测序得到的核苷酸序列输入HBVseq数据库，与库中序列进行比对，得出序列的变异位点与基因型。
1.3统计方法
统计学方法采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，不符合正态分布的连续型数值变量资料用秩和检验进行两组间的比较；分类资料用Fisher’s精概率法进行组间比较，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
126例初治CHB患者中，检出耐药位点患者与未检出耐药位点患者在性别、年龄、HBV DNA及基因型构成进行比较，差异均无显著性意义（P＞0.05），见下表。
3.讨论
HBV基因组是有部分单链区的环状双链DNA，HBV基因组是有部分单链区的环状双链DNA。HBV进入肝脏细胞后脱去病毒蛋白，以负链为模板延长正链，将各链缺口闭合成为共价闭合环状DNA（covalently closed circular，cccDNA）。以cccDNA为模板，利用RNA转录酶进行转录，产生4种长度的HBV mRNA，其中3.5kb的RNA含病毒DNA序列上的全部遗传信息，是病毒DNA基因组反转录的模板，称为病毒前基因组（pregenome，pgRNA）。pgRNA的反转录在病毒核心内进行，以pgRNA为模板，借P蛋白中的反转录酶延伸为全长负链DNA，正链DNA是以负链为模板，借聚合酶合成，反转录最终形成环状双链DNA。
HBV有很高的复制率，复制过程中由于DNA聚合酶（反转录酶）缺乏校正活性，发生差异后难以修正，故突变率很高。因此，由于HBV不断产生的自然突变，使HBV感染者体内，常形成以一个优势株为主的相关突变株病毒群。
本研究结果显示，126例未经过抗病毒治疗的CHB患者中，10例患者检出耐药位点，占7.94%，接近目前文献中报道的中国人群的耐药自然发生率。耐药变异的检出率与性别、年龄、HBVDNA及基因型无相关性。虽然未经治疗，包含与耐药相关的单个或联合突变的变异病毒或病毒准种已经存在。尽管只有一小部分患者体内存在预存耐药株，但很有可能影响其以后的抗病毒治疗效果。有研究提示对患者进行基线耐药变异的检测后，再选择抗病毒药物的疗效优于对照组，并且抗病毒治疗后耐药的发生率低于对照组[4]。因此，有必要对CHB患者进行预存耐药的检测，以降低耐药的发生。
【参考文献】
[1]Lavanchy D.Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat,2004,ll:97-107.
[2]中华医学会肝病学分会,中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版).中华肝脏病杂志,2011,19(1): 13-24.
[3]Ko SY,Oh HB,Park CW,Lee HC,Lee JE.Analysis of hepatitis B virus drug-resistant mutant haplotypes by ultra-deep pyrosequencing.ClinMicrobiol Infect,2012, 18(10):E404-11.
[4]盖洪鹏,孙伟翔,袁德胜,常青山,姜升,石龙. 预存耐药对核苷(酸)类似物抗病毒治疗应答和耐药的影响.临床肝胆病杂志,2012,(11):841-844.
论文作者:赵树巧,刘冰,薛辉,杨宪武
论文发表刊物:《心理医生》2016年4期
论文发表时间:2016/8/2
标签：患者论文; 检出论文; 抗病毒论文; 转录论文; 病毒论文; 乙型肝炎论文; 位点论文; 《心理医生》2016年4期论文;