LCMS-IT-TOF鉴定人尿中氯胺酮及其代谢物论文

LCMS-IT-TOF 鉴定人尿中氯胺酮及其代谢物

王明智¹，潘红²

（1. 兰州市公安局刑事科学技术研究所，甘肃 兰州 730030；2. 白银市公安局刑事科学技术研究所，甘肃 白银 730900）

摘 要： 本文采用LCMS-IT-TOF 技术对人尿中氯胺酮及其代谢物进行鉴定，观察分析检查结果。

关键词： LCMS-IT-TOF 技术；人尿；氯胺酮；代谢物

0 引言

氯胺酮，俗称“K”粉，属于国家管制第一类精神药品^[1]。最近这些年，有调查发现，氯胺酮滥用现象愈演愈烈，氯胺酮所致的违法犯罪迅速发展，对此，体内氯胺酮检测已经纳入法庭科学毒物分析试验室工作范畴^[2]。通过检测血液及尿液等生物检材中的氯胺酮及代谢物，对判定滥用者有无吸食氯胺酮提供可靠依据，对此，氯胺酮在体内代谢的研究成为学者们探讨的一大课题。目前，LCMS-IT-TOF 是检测氯胺酮的常用技术，是临床研究的热点^[3]。本文通过LCMS-IT-TOF技术，鉴定人尿中氯胺酮及其代谢物，现在进行如下总结。

1 试验

1.1 仪器及试剂

1.1.1 仪器：①日本岛津公司LCMS-IT-TOF 系统，包含LC-20AD 输液泵、SIL-20AC 自动进样器、CBM-20A 控制器、CTO-20A 柱温箱、SPD-M20A 二极管阵列检测器、DGU-20A3 在线脱气机以及LCMS-IT-TOF 电喷雾电离-离子阱-飞行时间串级质谱仪。②美国TOMOS 公司3-18R 高速冷冻离心机。③美国SUPELCO 公司固相萃取仪。④美国Waters公司HLB3cc 固相萃取柱。⑤北京同泰联科技发展公司TTLDC 型氮吹仪。

1.1.2 试剂：①氯胺酮、去甲氯胺酮与去甲去氢氯胺酮由美国Cerilliant 公司提供。②β-葡萄糖醛酸酶由美国Sigma公司提供，22 mg，1134600 U/g，临用时，予以pH 值为4.8的乙酸钠缓冲溶液进行配制，配制成5000 Units/ mL。③乙酸、乙腈、乙酸铵及甲醇均是色谱纯，由美国Fisher 公司提供。④美国Milipore 公司Mili-Q 纯水系统制得流动相用水。

1.2 收集样品。①10 份氯胺酮滥用者尿液，各15 mL；②健康人空白尿液，15 mL。样品收集后，放置于-18℃冰箱内保存。

（1）色谱柱：Thermo Hypersil GOLD C18 柱，3.0 um，2.1mm I.D ×100 m mL

1.3.2 质谱条件：①离子源：ESI，同时扫描正负离子。②扫描 范 围：MS1m/z100-300；MS2m/z50-300；MS3m/z50-300。③加热模块温度：200℃。④CDL 温度：200℃。⑤雾化气流速：1.5 L/min。⑥干燥气流速：10 L/min。⑦离子源电压：①正离子+4.5 KV；②负离子-3.5 KV。⑧检测器电压：1.70 KV。⑨质量数校准方法：通过自动调谐，优化电压，外标法校准质量数。

1.3 色谱及质谱条件

FENG Shu-gai, LIU Yi-xuan, ZHANG Hui-qin, YAN Hong-li, ZHU Min, DU Hui, ZHANG Wen-jing, YIN Hui-rong, SONG Di,LIU Min, LIN Sha-sha, HU Ting-ting, WANG Ling, HONG Yi, SHI Min-feng

（2）流动相：①A 是10 mmol/L 乙酸铵与0.1%乙酸水溶液；②B 是乙腈。流速控制0.2 mL/min。

（5）梯度洗脱程序：①0-15 min，5%-15%B；②15-20 min，15%-30%B；③20-23 min，30%-90%B；④23-30 min，90%B；⑤30.1-35 min，5%B。

（4）进样量：1.0uL。

采用SPSS 14.0统计学软件对数据进行处理，计数资料以百分数（%）表示，采用x2检验；计量资料以“±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

（3）柱温：40℃。

1.3.1 色谱条件

通过MetID solution 代谢物鉴定软件以及Formula Predictor 分子式预测软件，自动分析10 例阳性尿液样品数据，每一样品测得氯胺酮代谢物41 个，其中各个化合物提取离子的色谱图如图1 所示。

2 结果

1.4 样品处理。10 份阳性尿液样品，各自取2 mL，分别采用0.1 mol/L 盐酸进行调节，直至达到弱酸水平（pH6），添加0.1 mLβ-葡萄糖醛酸酶溶液，基于50℃条件下，恒温酶解，持续30 min，按照10000 r/min 的标准，离心5 min，取上清液，且过HLB3cc 固相萃取小柱（先通过甲醇3 mL、超纯水3 mL 以及pH4.8 乙酸铵缓冲液3 mL 予以活化处理），予以3 mL 5%甲醇水溶液淋洗，将杂质去除，随后使用1 mL 甲醇进行洗脱处理，将洗脱液过0.22 um 有机微孔滤膜，供上机用。与此同时，按照同样的方法及操作流程，进行空白人尿试验。

图1 氯胺酮阳性尿液提取离子色谱图

依据氯胺酮、去甲氯胺酮以及去甲去氢氯胺酮对照品保留时间，M1 确定为氯胺酮，M2 是去甲氯胺酮，M22 则是去甲去氢氯胺酮。M3-M7 预测分子式是C₁₂H₁₄CINO₂，相比去甲氯胺酮仅仅多了一个氧，推测是去甲羟化氯胺酮。M8预测分子C₁₃H₁₄CINO，只比氯胺酮少了2 个氧，推测是去氢氯胺酮。M9 预测分子C₁₃H₁₄CINO₂，推测是去氢羟化氯胺酮。M10-M14 预测分子C₁₃H₁₆CINO₂，推测是羟化氯胺酮。M15-M16 预测分子C₁₃H18CINO，推测是加氢氯胺酮。M17-M20 预测分子式C₁₃H18CINO₂，推测是加氢羟化氯胺酮。M21-M23 预测分子式C₁₂H₁₆CINO，推测是加氢去甲氯胺酮。M24-M28 预测分子式C₁₂H₁₆CINO₂，推测是加氢去甲羟化氯胺酮。M29-M33 预测分子式C₁₂H₁₂CINO₂，推测是去甲去氢羟化氯胺酮。

恶性病变共有10例，主要分布在胸部与腹部，CT检查显示病灶区域密度不均匀，有点状钙化病灶存在，病变周围组织出现受压，增强扫描检查显示病灶区域有不均匀强化。MRI检查显示颈部为T1WI、T2WI高信号，增强扫描不存在强化。

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参考检测出的代谢物，推测氯胺酮在人体中可通过以下几个方式途径进行代谢：①氧化，代谢物为羟化氯胺酮；②去氢与氧化，代谢物为去氢氯胺酮与去氢羟化氯胺酮；③去甲、去氢及氧化，代谢物是去甲氯胺酮、去甲去氢氯胺酮，还有可能涉及其他羟化代谢产物；④加氢、去甲与氧化，代谢产物为去甲加氢氯胺酮、加氢氯胺酮，还可能得到其他羟化代谢产物。

再比如二姐，她有着自己的浪漫情怀，“总爱站在院子里望着那条通往山外的山路发呆”，含情脉脉地等待着自己的情郎。最后等来的却是母亲对她的婚姻指派。

参考文献

[1]张绍雨，黄增萍.尿中氯胺酮及其代谢物盘鉴和GC/MS/SIM 测定[J].中国法医学杂志，2004(02)：80-83.

[2]卓先义，沈保华，马栋，等.尿中氯胺酮及其代谢物检测的研究[J].中国司法鉴定，2005(05)：18-19+33.

[3]陈学国.分散液液微萃取-液相色谱法测定尿中氯胺酮[A].中国化学会.第五届全国“公共安全领域中的化学问题”暨第三届危险物质与安全应急技术研讨会论文集[C].中国化学会：2015：3.

中图分类号： R446.12

文献标识码： B

DOI： 10.19613/j.cnki.1671-3141.2019.21.105

本文引用格式： 王明智，潘红.LCMS-IT-TOF鉴定人尿中氯胺酮及其代谢物[J].世界最新医学信息文摘，2019，19(21)：152+167.

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