1.山西省肿瘤医院外科特需病区 太原 030013；2.山西省肿瘤医院病理科 太原 030013
【摘 要】目的 检测乳腺癌组织磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α（PIK3CA）基因热点突变，并分析其与临床病理特征的关系。方法 选取96例原发性乳腺癌患者石蜡组织标本，提取肿瘤组织DNA，对第9外显子和第20外显子上5种热点突变进行PCR扩增，检测PIK3CA基因的突变状态。结果 96例乳腺癌组织中检测到PIK3CA突变26例，突变率27.08％。以20外显子H1047R突变为主，突变率12.50%。同时检测到H1047L突变8例，E545K突变4例，E542K突变1例及H1047L和E545K双突变1例。PIK3CA 基因突变与患者年龄、病理类型、肿瘤大小、淋巴结状态、ER/PR表达水平和HER-2表达状态之间无明显相关性，P>0.05。结论 乳腺癌中PIK3CA基因突变频率较高，可能与乳腺癌的发生发展有关，但与乳腺癌临床病理特征之间无明显相关性。
【关键词】PIK3CA；基因突变；乳腺癌
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发生与激素水平异常、癌基因激活及抑癌基因失活等多种机制有关。本研究通过对乳腺癌组织中PIK3CA基因热点突变区域的检测，探讨乳腺癌PIK3CA基因突变与临床病理特征之间的相关性。
1 材料与方法
1.1一般资料
收集山西省肿瘤医院2016年3月至2017年5月原发性乳腺癌组织标本96例，入选标准：所有病例均经病理医师确诊为乳腺癌并行ER、PR和HER2免疫组织化学染色；所获得剩余标本可满足基因检测需要。标本类型：病理诊断为浸润性导管癌79例，导管原位癌7例，浸润性小叶癌6例，其他类型4例。患者年龄30～75（51.10±10.46）岁，中位年龄51岁；男性1例，女性95例。
1.2方法
所有标本均经10%中性福尔马林固定6~24 h，常规标准自动脱水，石蜡包埋，用于苏木素-伊红染色（HE染色法）、IHC和PCR检测。（1）IHC：选用正电荷载玻片，切片厚度3 μm，65 ℃烤片1 h。运用Ventana全自动IHC染色设备检测ER、PR及HER2蛋白表达。（2）PCR：视组织大小不同切取8 μm厚切片4~20片，经二甲苯脱蜡及无水乙醇洗涤后，对照HE染色片将肿瘤组织部位刮入1.5 ml Eppendorf管中。使用福尔马林固定石蜡包埋组织样品DNA分离试剂盒（厦门艾德生物医药科技股份有限公司）提取DNA。使用人类PIK3CA基因突变检测试剂盒（厦门艾德生物医药科技股份有限公司）检测PIK3CA第9外显子和第20外显子上5种热点突变（包括H1047R、H1047L、E542K、E545K和E545D），具体操作按试剂盒说明书进行。
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1.3免疫组化判定标准
ER及PR判定标准：≥１％的肿瘤细胞核呈现不同程度的着色时，即为阳性；整张切片中＜１％的肿瘤细胞核呈现不同程度的着色或完全无着色为阴性。HER2判定标准：0：无染色或≤10％的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；1+：>10％的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；2+：>10％的浸润癌细胞呈现不完整和／或弱至中等强度的细胞膜染色；或者≤10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色；3+：>10％的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色。IHC 3+为HER2阳性；IHC 0和1+为HER2阴性。IHC 2+病例应选取不同的组织块重新检测，或经FISH检测确认。
1.4统计学方法
采用SSPS 16.0统计软件进行数据分析。PIK3CA基因热点突变状态与乳腺癌临床病理特征的关系采用χ２检验或Fisher确切概率法，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 PIK3CA基因热点突变检测结果
96例乳腺癌组织中检测到PIK3CA突变26例，突变率27.08%。其中第9外显子突变5例，包括E545K突变4例（4.17%），E542K突变1例（1.04%）；第20外显子突变20例，包括H1047R突变12例（12.50%）和H1047L突变8例（8.33%）。其中１例患者同时发生H1047L突变和E545K突变。
2.2 PIK3CA 基因突变与乳腺癌临床病理特征之间的关系
通过统计分析发现PIK3CA突变与非突变患者在年龄、病理类型、肿瘤大小、淋巴结转移等临床特征之间无显著相关性；PIK3CA突变更容易发生在ER、PR阳性的患者中，但差异无统计学意义；HER-2蛋白表达与PIK3CA 基因是否突变未见明显关联。
3 讨论
PIK3CA基因突变是乳腺癌中最常见的突变之一，研究表明PIK3CA突变导致的AKT持续活化能够引发乳腺上皮细胞的生长和转化，抑制细胞凋亡，是乳腺癌发生最重要的途径之一。
不同报道中乳腺癌PIK3CA基因突变率不等，可达8-40%，在我们的研究中，检测到乳腺癌PIK3CA基因的突变率为27.08%，与大部分报道数据相似，略低于TCGA报道的突变率。我们发现第20外显子突变较第9外显子突变更加常见，与Firoz Ahmad等的研究结果一致[1]。
PIK3CA 基因突变与乳腺癌临床病理特征之间的关系报道不一。本次研究中，发现PIK3CA突变与患者年龄、病理类型、肿瘤大小、淋巴结转移、激素受体及HER-2表达状态都不存在相关性。这与Firoz Ahmad[1]和廖绍光[2]等的报道一致。
目前对于PIK3CA基因突变与乳腺癌临床病理之间的相关性认识还不够明确，结论也不一致。因此还需要更大量样本的研究，进一步分析PIK3CA基因突变与乳腺癌临床病理特征之间的关系，从而找出不同类型乳腺癌的分子特征，并成为肿瘤临床治疗的潜在靶点。
参考文献：
[1]Ahmad F，Badwe A，Verma G，et al. Molecular evaluation of PIK3CA gene mutation in breast cancer：determination of frequency，distribution pattern and its association with clinicopathological findings in Indian patients[J]. Med Oncol，2016，33（7）：74.
[2]廖绍光，傅国平，王雅杰．上海地区妇女乳腺癌组织PIK3CA基因热点突变区域研究[J]．中华肿瘤防治杂志，2009，16（18）：1365-1367．
论文作者:杨斌1,孙瑞2,高宁2
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2018年6月下第12期
论文发表时间:2018/11/27
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