王启德
醴陵市邦和单采血浆有限公司 湖南醴陵 412200
【摘 要】目的：探讨酶联免疫吸附法（ELISA）在检测HBsAg的过程中出现假阳性的原因及解决方法。方法：回顾性分析2011年2月~2015年2月在我站并采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测的84例HBsAg呈弱阳性的血清标本，并送往省级检测机构进行聚合酶链反应（PCR）法的再次定量检测，确定采用ELISA法的假阳性率，并分析出现假阳性的原因。结果：对于采用 ELISA检测呈弱阳性的84例血清标本再次采用聚合酶链反应法（PCR）检测，检测结果为阴性的标本例数为15例，假阳性率为17.86%。导致出现假阳性的原因主要为标本检验、标本送检、标本采集及患者自身因素等。结论：在HBsAg检测的过程中，造成ELISA法出现假阳性的原因较多，因此在检测的过程中应该严格按照要求进行操作，认真做好对假阳性标本的复测，确保检测结果的正确性。
【关键词】酶联免疫吸附法；HBsAg；假阳性；原因
乙型病毒性肝炎，又称为乙型肝炎或者乙肝，主要是由于乙型肝炎病毒（HBsAg）感染引起的病毒性肝炎，其传播的途径较为广泛，近年来其发病率呈逐年升高的趋势[1]。目前临床主要是对患者进行血清HBsAg作为诊断乙肝的依据，常用的方法主要是酶联免疫吸附法（ELISA），其具有较高的灵敏度、操作方便，但是在实验室进行检测的过程中会由于各种原因造成检测结果出现假阳性，影响患者的诊断和治疗[2]。本文回顾性分析2011年2月~2015年2月在我站并采用ELISA法检测的84例HBsAg呈弱阳性的血清标本，并采用聚合酶连反应（PCR）法再次定量的检测，现将结果报告如下。
1 资料和方法
1.1 一般资料 选取2011年2月~2015年2月在我站并采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测的84例HBsAg呈弱阳性的血清标本作为研究对象，其中男47例，女37例，年龄在18~55岁之间，平均年龄（41.38±7.61）岁
1.2 检测方法
1.2.1 仪器与试剂 采用芬兰生产的雷勃MK3系列酶标仪，采用深圳汇松科技发展有限公司生产的洗板机，采用珠海丽珠医药有效公司生产的酶标试剂。采用美国ABI7500实时荧光定量PCR扩增仪进行乙肝核酸的检测进行再次确定。
1.2.2 检测方法 所有研究对象均在早晨采取空腹血3~5ml，将血液标本放置在离心机上分离血清，并放置1~2h，然后采用ELISA法对采集的血液标本进行HBsAg的检测。如果检测结果显示弱阳性，则再采用ELISA法进行检测，并连续检测三次。若三次的检测结果认为弱阳性则送往省级检测机构进行聚合酶链反应（PCR）法的最终复测，确定标本的检测结果。
1.3 分析方法 回归性分析所有患者的临床资料，并组织相关的检测人员对产生假阳性的原因进行分析，按照患者的年龄、性别、血液标本采集、送检、实验室检测等方面进行统计分析，对检测出现假阳性的原因进行总结。
1.4 统计学方法 将统计所得的原因按照例数输入电脑建立检验数据库，使用统计学软件SPSS19.0对所得数据进行统计学分析，P<0.05，统计结果的具有统计学意义。
2 结果
2.1 最终检测假阳性率 对于采用 ELISA检测呈弱阳性的84例血清标本再次采用聚合酶链反应法（PCR）检测，结果仍为阳性的标本例数为69例，阳性率为82.14%，检测结果为阴性的标本例数为15例，假阳性率为17.86%。
2.2 假阳性的年龄、性别分布情况 在15例假阳性标本中，20~40岁年龄段患者检测的假阳性率为14.81%，41~50岁年龄段患者检测的假阳性率为20.69%，50岁以上患者检测假阳性率为17.86%，三个年龄段患者在性别、年龄等方面的假阳性率无明显差异（P>0.05）。如表1所示。
3 讨论
乙型肝炎是临床常见的传染性、病毒性肝炎，临床的诊断对于治疗具有非常重要的意义。目前临床主要采用酶联免疫吸附法（ELISA）对患者进行血清HBsAg的检测，该方法具有较强的灵敏度和特异性，但是也极易受到其他因素的影响导致出现假阳性[3]。
酶联免疫吸附法（ELISA）检测的原理为通过乙肝病毒抗原与抗体的特异性结合以及对抗原抗体的酶标记，最终通过酶催化底物显色显示检测结果[4]。在使用酶联免疫吸附法进行检测时造成检测结果出现假阳性的原因主要有：①患者自身的原因，如患者患有风湿或者类风湿疾病或者高免疫球蛋白血症，这些疾病会造成患者血清中非特异性的IGG浓度升高，在对患者进行丙肝抗体检测时，IGG可能会与酶联免疫吸附的固相IGG、酶标IGG发生结合，造成检测结果出现阳性[5]；②标本的采集，采集人员在对患者进行血液标本采集的过程中并未严格的按照采集的标准进行，部分血液标本采集的时间过长，造成病毒的感染，造成检测结果出现阳性；③标本的送检，血清标本采集完成后需要立即进行血清的分离，并及时的送到检验室进行检测，对于不能及时送到的需要放入冰箱保存，如果存储时间过长、标本凝固不完全或者标本被细菌污染都会造成检测结果出现假阳性；④标本的检验，在标本进行检测的过程中，如果操作不规范也会造成检测结果出现假阳性，如，标本的加样时间过长，标本加样后孔壁上贴有微小血块，洗板的过程中出现液体的交叉，洗板针被堵塞，抽吸不完全以及洗液量不足、洗板次数少等。
本研究中，对于采用 ELISA检测呈弱阳性的84例血清标本再次采用聚合酶链反应法（PCR）检测，检测结果为阴性的标本例数为15例，假阳性率为17.86%。
综上所述，在乙肝抗体检测的过程中，造成ELISA法出现假阳性的原因较多，因此在检测的过程中应该严格按照要求进行操作，认真做好对假阳性标本的复测，确保检测结果的正确性。
参考文献：
[1]宋美兰，任芙蓉，龚晓燕，王卓妍.献血者HBsAg及抗-HCV ELISA筛查不合格标本的假阳性分析[J].北京医学，2013，05：391-395.
[2]何亚琼，张美，王蓓，童华诚.ELISA法检测HBsAg性能及影响因素探讨[J].现代医学，2013，07：501-503.
[3]郝丽.乙肝表面抗原弱阳性标本复检策略分析[J].现代免疫学，2013，05：412-416.
[4]刘宇宁，蔡菊英，刘晓音.血液筛查HBsAg、抗-HCV假阳性献血者归队的调查分析[J].中国输血杂志，2012，03：260-262.
[5]黄伟忠，张莉，唐景云，廖苑妮.ELISA检测HBsAg的假阳性情况分析[J].中国医学工程，2014，01：80-81.
论文作者:王启德
论文发表刊物:《航空军医》2016年第1期供稿
论文发表时间:2016/4/15
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