1.泸州医学院附属自贡市第四人民医院胸心外科 四川自贡643000 2.泸州医学院附属一院胸心外科 四川泸州 646000
摘要 目的 观察血管内皮生长因子C(VEGF-C)及其受体3(VEGFR-3)在食管癌组织中的表达，探讨其意义。 方法 采用免疫组织化学法检测食管鳞癌和癌旁食管组织中的VEGF-C、VEGFR-3的表达。 结果 食管鳞癌组织中VEGF-C和VEGFR-3表达阳性率分别为70.3%(23/46), 76%(23/46)，癌旁组织中表达阳性率分别为20%，14%，两者比较有统计学意义，P均<0.05。VEGF-C和VEGFR-3的表达与食管癌的淋巴结转移、浸润深度有关，但与肿瘤组织分化程度无关。结论 VEGF-C 、VEGFR-3的表达与食管鳞癌的发展，淋巴结转移有相关性。
关键词 ：食管鳞癌 ；VEGF-C； VEGFR-3；淋巴转移
Abstract：Objective：To detect the expression of vascular endothlial growth factor C(VEGF-C) and its receptor ,VEGF receptor(VEGFR-3) in esophageal squaphageal cell carcinoma(ESCC),and investigate its significance. Methods The expression of VEGF-C and VEGFR-3 on tumor tissues from 46 ESCC patients and 25 non-cancer tissues were detected by immunohistochemistry. Result The positive frenquency of VEGF-C and VEGFR-3 in ESCC were 70.3%(23/46), 76%(23/46) .The expression of those in non-cancer were 20%(5/25), 10%（1/25）.There was statistical significance between cancer and non-cancer(P<0.05) . The expression of VEGF-C and VEGFR-3 on tumor tissues was closely related to the lymph node metastasis and the depth of tumor invasion (P<0.05),and was not related to the degree of differentiation of tissue .Conclusion The expression of VEGF-C and VEGFR-3 is closely associated with development and lymph metastasis of ESCC.
Key words： esophageal squamous cell carcinoma(ESCC) ;VEGF-C; VEGFR-3; lymph metastasis
食管癌是一种常见的消化道肿瘤，我国是高发区之一，其中90%以上为鳞状细胞癌[1]。淋巴结转移是食管鳞癌主要的转移方式之一。如果能早期发现并阻止这种转移，将有助于改善病人的预后。目前发现新生淋巴管是影响肿瘤转移的一个重要因素，随着对淋巴管标记物和新生淋巴管生长因子研究深入，新生淋巴管与肿瘤转移之间的关系已成为肿瘤转移研究的重点。VEGFR-3、VEGF-C是淋巴管生成的重要因子。本研究通过免疫组化法检测VEGF-C、VEGFR-3在食管鳞癌中的表达，探讨其表达的临床意义。
1 材料和方法
1.1 研究对象
病例选自我院2010年4月至2010年11月经手术切除的食管癌患者，共计58例。其中男性49例，女性9例。年龄43岁～72岁。平均年龄64岁。肿瘤组织在原发灶取材，癌旁组织取自肿块旁5CM组织。按2002年第6版食管癌国际TNM分期，Ⅰ期2例，Ⅱa期 16例，Ⅱb期11例，Ⅲ期25例，Ⅳ期4例 。术前未经过任何放疗及化疗。
1.2 试剂和仪器
兔抗人VEGF-C多克隆抗体，兔抗人VEGFR-3多克隆抗体，两种试剂均购于北京中杉金桥生物科技有限公司。 即用型 MaxVision试剂盒，PBS，枸盐酸缓冲液均购自福州迈新生物技术开发有限公司。
1.3 实验方法
免疫组织化两步法，操作步骤按试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照。用光学显微镜观察免疫组织化学染色的切片，VEGF-C、 VEGFR-3定位于细胞浆，胞浆成透明或无色为阴性，胞浆呈棕黄色为阳性。按照Amioka等[2]评判标准，在400倍视野下，以着色细胞占视野细胞总数多少分级。0级：0；1级：＜25%；2级26%-50%；3级：＞50%。0级为阴性，1级以上为阳性。
1.4 统计学处理
全部数据采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理。应用χ2 检验及秩和检验，P＜0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 VEGF-C的表达
VEGF-C阳性颗粒主要位于癌细胞胞浆，部分间质细胞也有表达。在58例食管鳞癌组织中，44例（76%）VEGF-C表达阳性（见表1）,正常对照组中4例（17%）表达阳性。两者比较有统计学意义，P＜0.05。34例有淋巴结转移的食管鳞癌组织中，30例（88%）VEGF-C表达阳性，24例无淋巴结转移的食管鳞癌组织中，14例（34%）VEGF-C表达阳性，两者比较有统计学意义，P＜0.05。5例T1期患者中，1例（20%）VEGF-C的表达阳性，13例T2期患者中，9例（69%）表达阳性，30例T3期患者中，26例（87%）表达阳性， 10例T4期患者中，8例（80%）表达阳性。VEGF-C在T分期中表达差异有统计学意义。在58例食管鳞癌组织中VEGF-C的表达与组织分化程度无明显相关。
2.2 VEGFR-3的表达
VEGFR-3阳性部位主要位于癌细胞胞浆及个别核。在58例食管鳞癌组织中， 40例 （69%）VEGFR-3表达阳性（见表1）,正常对照组中9例（37%）表达阳性。两者比较有统计学意义，P＜0.05。34例有淋巴结转移的食管鳞癌组织中，28例（82%）VEGFR-3表达阳性，24例无淋巴结转移的食管鳞癌组织中，12例（50%）VEGFR-3表达阳性，两者比较有统计学意义，P＜0.05。5例T1期患者中， 2例（40%）VEGFR-3的表达阳性，13例T2期患者中，7例（54%）表达阳性，30例T3期患者中，22例（74%）表达阳性，10例T4期患者中，9例（90%）表达阳性。VEGFR-3在T分期中表达差异有统计学意义。在58例食管鳞癌组织中VEGFR-3的表达与组织分化程度无明显相关。
3 讨论
VEGF-C是VEGF家族中的一员，是第一个被发现的淋巴管生长因子。最初由Joukov等从人类前列腺癌细胞株PC-3的cDNA文库中克隆并分离出来。人类VEGF-C基因定位于4q34。VEGFR-3又被称为Flt4，是酪氨酸激酶受体家族成员之一，由胞外区（含7个免疫球蛋白同源结构域），跨膜区及胞内区组成。在胚胎早期表达于血管内皮细胞，随着胚胎发育其在血管上的表达降低，在成年组织中VEGFR-3主要局限于淋巴管内[3]。VEGFR-3是第一个被确定的淋巴管内皮标志，是VEGF-C特异受体。它的表达直接反映淋巴管数量。VEGF-C 与VEGFR-3有高度亲和力，VEGF-C通过一种自分泌途径，与VEGFR-3结合后通过活化诱导两个重要生存和增值信号分子发生磷酸化，保护淋巴管内皮细胞免于血清来源诱导和凋亡，促进淋巴管内皮细胞的增殖和迁移，从而发挥淋巴管新生的作用而促进肿瘤淋巴管转移[4-5]。
VEGF-C/VEGFR-3信号通道作为淋巴管生成的重要调控因子的作用已得到共识，但新生淋巴管与肿瘤转移之间是否存在关系，以及如何转移，转移调控的方式等都是肿瘤治疗研究的重点。近几年，通过对VEGF-C/VEGFR-3在人肿瘤中的表达及其与肿瘤淋巴结转移之间的关系做了大量研究，表明VEGF-C/VEGFR-3高表达与多种实体瘤淋巴管生成和淋巴结转移相关。Isaka等[6]的研究显示过量表达VEGF-C导致肿瘤周围淋巴管异常增生，这使肿瘤通过淋巴管转移更加容易。Furudoi等[7]在152例结肠癌组织中发现，71例（46.7%）VEGF-C表达阳性，并与淋巴管侵犯，淋巴结转移和浸润深度和预后有关。Skobe等[8]应用转染绿色荧光蛋白（GFP）标记的人类乳腺癌MUD、MB435细胞自发性乳腺癌转移的模型，证实当VEGF-C基因高表达时乳腺肿瘤有新生淋巴管生成，VEGF-C阳性的肿瘤发生淋巴结转移机会较对照组增加了60%。Hachisuka等[9]对78例胃癌术后标本进行检测，VEGF-C表达阳性率为27.8%，与淋巴浸润和淋巴管转移相关。用LYVE-1标记淋巴管内皮检测淋巴管密度，发现VEGF-C的表达与淋巴管密度明显相关，提示VEGF-C在胃癌淋巴管生成和转与食管癌淋巴结转移密切相关。Tatsuya Tanaka 等[10]统计1996～2005年间食管癌根治术106名患者，发现VEGF-C表达量与食管癌淋巴结转移密切相关，表达量越高，提示预后较差。Shimizu等[11]在胃癌动物模型研究中应用动物实验模型研究VEGFR-3抗体可明显降低肿瘤的淋巴管密度及淋巴结转移。
本研究中，用免疫组化的方法，检测食管癌VEGF-C及VEGFR-3的表达。发现食管鳞癌中VEGF-C及VEGFR-3表达明显高于对照组正常食管组织，有统计学意义，P＜0.05。表明肿瘤组织中可能分泌产生某些物质促进VEGF-C及VEGFR-3的表达。食管鳞癌组织中VEGF-C及VEGFR-3表达阳性率，有淋巴结转移患者要高于无淋巴结转移者，有统计学意义，P＜0.05，显示VEGF-C及VEGFR-3的表达均与淋巴结转移相关。T分期越高， VEGF-C及VEGFR-3表达阳性率越高，P＜0.05，说明VEGF-C/VEGFR-3表达与肿瘤浸润深度有关。
本研究中VEGF-C及VEGFR-3的表达与肿瘤浸润及淋巴结转移的相关性提示过度表达能增强癌细胞增殖，浸润力，促进癌细胞转移。VEGF-C/VEGFR-3信号传导通路的阻断有望成为抗肿瘤淋巴细胞转移的新靶点，对于主要经淋巴结转移，可采用肿瘤新生淋巴管抑制剂拮抗。目前，相关动物实验研究已经开展。相信随着对肿瘤新生淋巴管生成及淋巴结转移深入研究及其机制的逐渐明了，抗肿瘤新生淋巴管治疗有望成为继抗肿瘤新生血管治疗之后肿瘤生物治疗的一种新途径。
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10 Tanaka Tatsuya , Ishiguro Hideyuki, et al.Vascula endothelial growth factor C
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11 Shimizu K,Kubo H,et al.Suppression of VEGFR-3 signaling inhibits lymph node metastasis in gastric cancer.Cancer Sci 2004；95：328-333
论文作者:唐波1 戴天阳2 罗南1 赵夏1
论文发表刊物:《临床医学教育》2018年3期
论文发表时间:2018/4/19
标签：淋巴管论文; 阳性论文; 淋巴结论文; 食管论文; 肿瘤论文; 组织论文; 统计学论文; 《临床医学教育》2018年3期论文;