徐睿[1]2002年在《方剂治疗药物监测——冠心Ⅱ号临床药动、药效监测》文中研究说明背景、目的：方剂治疗药物监测（TDM）的设想是在“证治药动学假说”的基础上提出来的，认为有助于方剂发展的关键内容在于对从医生处方到药物发挥治疗作用或产生不良反应经过的药剂、药物动力学、药效和治疗作用这四个过程进行全面监测。本课题正是基于方剂TDM的要求，为进一步大规模临床试验研究积累运作经验、完善整体质量控制、提供有价值的基础资料，而进行小样本观察中药冠心Ⅱ号（组方川芎、丹参、赤芍、降香、红花1:2:1:1:1）治疗冠心病血瘀证病人的临床效果，并进行冠心病血瘀证病人口服冠心Ⅱ号后体内阿魏酸血药浓度测定及观察其药动学特征，初步奠定监测冠心Ⅱ号方药代动力学、药效作用的基础，为进一步完善方剂TDM定性定量的辨证论治、个体化用药方案，将“证治药动学假说"揉合入“方剂TDM"中。方法：在冠心Ⅱ号的药效研究中，选取冠心病血瘀证病人50例，随机分为两组，分别予以冠心Ⅱ号和消心痛治疗15天。观察和比较用药后两组对改善冠心病血瘀证病人的临床症状、心电图疗效、血液流变、血脂和血浆内皮素等指标的影响。在冠心Ⅱ号的药动研究中，选取10名冠心病血瘀证病人并留取病人在口服冠心Ⅱ号后5、10、15、30、60、90和120min时的血清样本。使用Waters高效液相色谱仪，Kromasil C18柱，流动相设置为甲醇-水-冰醋酸（36.4:63:0.6，v/v），流速1.0mL.min-1，检测波长322nm，内标物为对羟基苯甲醛，用乙晴去除人血清中的蛋白并提取血清样本中的阿魏酸，应用HPLC法测定血清样本中的阿魏酸浓度。结果：冠心Ⅱ号的药效研究结果显示：（1）冠心Ⅱ号可明显改善冠心病血瘀证病人的临床症状和提高心电图疗效，治疗组与对照组间无显着性差异；（2）冠心Ⅱ号可明显降低全血低切粘度，降低血清胆固醇和<WP=8>低密度脂蛋白水平，降低血浆内皮素，与消心痛组比较，两组有显着性差异。冠心Ⅱ号的药动研究结果显示：冠心病血瘀证病人口服冠心Ⅱ号后体内阿魏酸血药浓度在5、10、15、30、60、90和120min时分别为（10±5，21±12，29±16，34±11，17±4，12±4和7±2）μg.L-1，血药浓度-时间曲线符合二室开放模型，分布半衰期为9.9min，消除半衰期为33.9min。结论：冠心Ⅱ号方是治疗冠心病心绞痛的一个较好的方剂，在临床上可能通过多种途径、作用于多种环节达到消瘀止痛的目的。阿魏酸作为冠心Ⅱ号方经口服后在体内可能发挥药效的物质基础，其在冠心病血瘀证病人体内的药代动力学特征可为临床用药提供可供参考的定量化依据；以它为衡量指标进行治疗药物监测，丰富了方剂TDM的药代动力学和药效学监测内容，为进一步实施药效-药动监测提供基础，对临床上用药个体化、提高疗效有一定的指导意义。方剂TDM的设想是对“复方效应成分动力学假说”的拓展和深化，一方面通过观察证对机体独特的处置，为验证假说的科学性提供基础资料，并可据此为中医辨证分型精确化开拓新的思路；一方面为中医辨证论治、个体化治疗及不良反应的监控提供基础。
黄敬群[2]2003年在《方剂治疗药物监测（Ⅱ）》文中研究指明从二十世纪六十年代起，“治疗药物监测”广泛用于监测病人体液中的药物浓度，并研究浓度与效应关系，以利于制订个体化用药方案，减轻毒副作用，达到最佳疗效。无论如何，上面提到的思路或方法很少或没有用在中医临床。在对“证治药动学”长期研究的基础上，黄熙教授提出了“方剂治疗药物监测”的设想。旨在通过对方剂制剂学、药动学、药效学、治疗学的全面监测，建立可靠的方剂质量控制标准，阐明方剂药效物质、方剂配伍理论的科学内涵，尽可能地实施个体化、量化的辨证施治方案，以提高临床疗效和减轻毒副作用。 本文首先进行了丹参复方的制剂学监测(监测吸收入体内的成分)及冠心Ⅱ号来源的阿魏酸血清浓度测定的方法学研究。上述研究结果有助于方剂治疗药物监测的进一步研究。 目的： 为了初步探索方剂治疗药物监测中的制剂学和药动学中的方法学，本实验选择植物化学、药理与临床研究较为成熟的丹参及其复方冠心＊号为工具，在对丹参复方制剂学监测的基础上，建立RP－HPLC测定人血清中阿魏酸浓度的改进方法。方法与结果：1．高效液相色谱法测定不同煎煮条件下丹参和冠心＊号中丹参素、原儿茶醛的含量： （l）方法：反相高效液相色谱法。Kromasil 分析柱p50nun X 46rum，sum，No：C18B020307），流动相：乙胎一0刀…帅·L’磷酸二氢钾溶液汐：gi），磷酸调至pH 2．8，紫外检测波长：280urn，流速：l＊rnL·Inn1。 （2）结果：丹参素在 0．245～5．880哈（F09998），原儿茶醛在 0＊＊ ～0．504ty（r＝0．9996）范围内呈线性，丹参素和原儿茶醛最低检测浓度分别为9．SM”血－’和2．IM·血－’，回收率分别为93．24％（RSD 为2．53％）和102＊8％（RSD为1．gi％）。 门）结论：中药的煎煮时间和加水量对中药有效成分的煎出量均有影响。在煎煮时间相同的情况下，无论是丹参素还是原儿茶醛，加 12倍水的溶出率都高于加8倍水；随着煎煮时间的延长，丹参素和原儿茶醛的溶出率逐渐增高；冠心＊号煎剂五味药合煎，在任何加水量，任何煎煮时间条件下，其丹参素和原儿茶醛的溶出率都明显高于相同条件下的丹参煎剂。2．高效液相色谱法测定五种不同产地丹参中丹参素和原儿茶醛含量： （二）方法：反相高效液相色谱法。Ko——】分析柱仅50mx 46llllll－slirD．NO汇18B 02lllo），流动相：甲醇一1％冰醋酸 20：80，紫外检测波长：280urn，流速：1．oml．·a‘。 u）结果：丹参素在4．2－33．6ng·mL‘，原儿茶醛在0．36～l．SN·InL－‘范围内线性关系良好，丹参素和原儿茶醛最低检测限分别为10．sng和0．6ng。回收率分别为 99．36％（RSD为 l．289％）和 97．56％（RSD为 0．774＄）。 门）结论：丹参素的含量（陀·mL’）卢氏野生丹参＞洛阳丹参冲氏家种丹参＞蒲城丹参＞陕南丹参。原儿茶醛的含量（卜g·mL－’）蒲城丹参＞洛阳丹参＞卢氏野生丹参＞卢氏家种丹参＞陕南丹参。3．RI，nPLC测定人血清中阿魏酸浓度的改进方法： （）方法：y丑PLC法，采用 lro…il（ 柱为分析柱，甲醇－水－冰醋酸 （3．4：63：0石）为流动相，流速1刀InL·min－’，检测波长sHnm，内标物为对羟基苯甲醛。用乙脂既去除人血清中的蛋白，又提取血清中的阿魏酸。 Q）结果：阿魏酸在 9．94－159刀4ng伽L’范围内与峰面积呈良好线性关系 （r＝0．9925），日内和日间变异系数均＜10％，平均回收率为99．77％，最低检测浓度为sllg·InL‘。 （3）结论：该法简便、快速、灵敏、重现性好，低毒，适用于人血清中阿魏酸的定量分析。
甘洪全[3]2004年在《冠心Ⅱ号的药动学—药效学研究》文中进行了进一步梳理背景：中药复方药效物质基础不明是中药现代化的主要障碍之一。研究中药复方进入体内的化学成分是阐明中药复方药效物质基础的重要途径。研究表明，中药复方进入体内的化学成分能够定性定量；但复方进入体内的物质与复方效应间可能存在的内在联系尚未得到科学的阐明，这是复方药效物质基础研究的难点，也是目前复方药效物质基础研究的关键问题。在整体条件下，定量地统一地研究体内的中药复方成分药动学过程与复方药理效应的动态规律，即药动学(pharmacokinetics, PK)-药效学(pharmacodynamics, PD)结合研究，是解决上述关键问题的重要措施，也是中药复方研究的发展趋势。至今，中药复方的PK-PD结合研究，特别是临床研究尚未见到文献报道。 目的：本研究选择组方严谨、疗效确切的冠心Ⅱ号为工具药方，在严格药材质量、煎煮工艺等质量控制的前提下，建立中药复方多成分同时检测方法，以及健康志愿者无创伤性冠脉血流动力学观察技术，进行冠心Ⅱ号PK-PD结合的临床研究。 方法：1．以ZORBAX Extend-C_(18)反相柱(150×4.6 mm 5μm)为固定相，用1％乙酸甲醇溶液(A)-1％乙酸水溶液(B)系统作为流动相，线性梯度洗脱，由0 min的A(15％)-B(85％)逐渐变为25 min的A(40％)-B(60％)；流速为1.0 ml／min，常温下检测，丹参素和原儿茶醛为280 nm，芍药苷为230 nm，阿魏酸为321 nm，建立同时测定冠心Ⅱ号中丹参素、原儿茶醛、芍药苷和阿魏酸的高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)方法。2．严格进行药材质量与煎煮工艺等质量控制，包括药材的产地、购买途径与尘药鉴定，以及人工煎煮过程中的质量控制，如加水量、浸泡时间、煎煮火力和煎煮时间。3．用水浴法、乙腈、甲醇处理健康男性志愿者口服冠心Ⅱ号汤剂30min的含药血清，取适当稀释的冠心Ⅱ号汤剂和处理血清样品进样，分别以第四军医大学俘d匕周开究生学位论文恒流和梯度两种方法进行洗脱，光电二极管阵列检测器检测，比较含药血清和汤剂的HPLC指纹图谱，寻找血清中源于冠心H号的化学成分。4.水浴法处理血清样品，以对轻基苯甲醛为内标，In侧rtsil ODS一3柱(250 X 4.6 mm，5 pm)为固定相，甲醇一0.6%乙酸(43:57，v/v)为流动相，流速为1.0 ml/min，32Inln波长下检测，以HPLC法测定健康男性志愿者口服冠心n号汤剂后10、20、30、45、60、90、120和180 min的血清阿魏酸浓度，3P97软件拟合药动学参数。5.在建立彩色多普勒冠状动脉血流显像技术和多普勒组织成像技术的基础上，用无创影像学方法观察健康男性志愿者口服冠心n号汤剂对冠脉血流和心脏收缩舒张功能的影响。6.用微软公司excel2000软件处理数据，对健康男性志愿者口服冠心11号汤剂后冠脉血流动力学指标与血清中阿魏酸血药浓度进行相关分析。 结果:1.丹参素、原儿茶醛、芍药普和阿魏酸的HPLC检测线性范围分别是25.0一600.0 ng、0.8一25.6 ng、80.0一1280.0 ng和一0.0~1 60.0 ng，相关系数r分别是0.9993、0.9999、0.9995和0.9994，最低检测限分别是3.1、0.80、ro.0、0.42 ng，日内和日间变异系数均小于10%，平均加样回收率(n=5)分别是102.19% (RSD=0.51%)、100.54%(RSD=4 .67%)、99.99%(RSD=5.02%)和98.6%(RSD二6.72%)。2.上述HPLC法测得不同批次冠心n号汤剂中化学成分的含量，丹参素为0.773士0.0656m岁g(生药)，原儿茶醛为36.591士3.0590“g/g(生药)，芍药昔为2.655士0.2454mg/g(生药)，阿魏酸为85.052士7.5469 0 9/9(生药)，各批次间成分含量变易系数小于10%。3.水煎液中源于药材且能被检测到的色谱峰数目远少于药材中己知成分的数目;健康男性志愿者口服冠心n号汤剂后的含药血清中仅阿魏酸定性成功，丹参素、原儿茶醛和芍药普均未检测到;含药血清中存在而空白血清不存在的色谱峰且峰面积大于5000者均不超过10个。4.阿魏酸在6.0~360.ong/ml范围内线性关系良好，最低检测浓度为6.0n留ml，相关系数r为0.9984，日内和日间变异系数均小于10%，平均加样回收第四军医大学俘士研究生学位论文率(n=4)为97.49%(RSD=3.99%);以所建HPLC法测定11名健康男性志愿者口服冠心n号汤剂后血清阿魏酸的浓度，各时间点的平均值分别为46.89、91.72、115.94、92.99、84.45、62.34、44.64、30.59 ng/ml，拟合得到药动学参数，Ka= 0.00991/min，K卜0 .1 13/m in，T一反(Ka)=6.13min，T一泛(Ke)=69.gmin，T(Peak)=23.6min，C(max)=104.ing/ml，AUC=13271.5(ng/ml)·min，CUF(s)=0.O0034g/kg/nilnj(ng/ml)，V邝(e)=0.0342(g/kg)/(ng/ml)。5.多普勒组织成像技术测定健康男性志愿者二尖瓣环的运动速度，结果，Sa为11.97土l.36em/s，Ea为17.64士4.16elnjs，Aa为10.92士1 .23cn公s，E留Aa为1 .65士0.49，与国内外文献报道的数值基本一致:彩色多普勒冠脉血流显像技术测定健康男性志愿者冠状动脉前降支血流的结果，Vmax为31 .57士6.18c而s，Vmean为22.16士5.30 cn岁s，VTI为12.76士2.39ctn，与国内外的研究结果基本一致。健康男性志愿者口服冠心n号后，服药后各时间点的测量值与服药前比较，心率、收缩压、舒?
孙世仁[4]2002年在《方剂治疗药物监测（Ⅰ）—川芎复方的制剂学及其临床药动学监测》文中研究表明治疗药物监测(therapeutic drug monitoring,TDM)是近四十年来在治疗学领域内崛起的一门新的边缘学科。它通过监测体液内药物浓度并利用药代动力学原理和公式，实施个体化用药，提高药物的疗效，避免或减少毒性反应。TDM已成为当前临床医学中发展最快的领域之一，TDM的实施大大提高了临床患者用药的安全性、有效性和合理性。受此启迪，黄熙在其“证治药动学”假说和“方剂血清成分谱、靶成分概念”的基础上，提出了“方剂治疗药物监测“raditional Chinese medicine recipe therapeutic drug monitoring,TCMR-TDM)”的设想，旨在通过对方剂制剂学、方剂药动学、方剂药效学、方剂治疗学的全面监测，进行方剂配伍-血清化学成分／靶成分-证效关系的研究，建立可靠的方剂质量控制标准，阐明方剂药效物质、方剂配伍理论，尽可能地实施个体化、量化的辨证施治方案，以提高临床疗效和减轻毒副作用。由于方剂TDM属于方剂药理学、中医治疗学的创新领域，涉及多学科、多领域，因此在有限的时间内全面实施上述四个方面困难很大。故本文首先进行了方剂制剂学监测和方剂临床药动学监测的初步探索。 第四军医大学硕士学位论文 目的 本研究旨在进行方剂治疗药物监测的初步探索。选择研究较为成熟 的川苇复方为工具，以血瘀证患者为对象，在对川穹复方剂制剂学监测的 基础上，首次开展与方剂配伍和证相结合的方剂临床药动学研究。为方剂 制剂学监测和方剂临床药动学监测提供可借鉴的模式，为方剂治疗药物监 测的进一步实践奠定基础，同时也为“证治药动学”假说提供临床依据。 方法 1．）0％复方的制剂学监测：采用临床煎煮方法制备川苇汤、）d％丹参 汤、）；l苇赤芍汤，以新建立的HPLC法测定上述制剂中阿魏酸含量。以完 全随机设计的方差分析和 Dunnett t检验进行数据比较。 2．）0％复方的临床药动学监测：（）采用改良水浴法进行血清样品预 处理，以新建立的HPLC法测定健康人和血瘀证患者口服川穹汤后血清阿 魏酸浓度，以3P97药动学拟合软件拟合药动学参数，比较两组之间的药 动学差别。（2）以HPLC法测定血瘀证患者口服川羊汤、）d ％丹参汤、）0 苇赤芍汤后血清阿魏酸浓度，以3P97药动学拟合软件拟合药动学参数， 用随机单应组设计的方差分析＊——幻J检验进行组间差别比较。 结果 1．）0％复方的制剂学监测：（1）川苇复方制剂中阿魏酸HPLC测定的 方法学：以甲醇：水：冰醋酸（36．4：63：0．6，v八）为流动相，以KromasiL C；s柱 （150minX．6 mm，SPm）为固定相，流速 1．0 mL／min，检测波长： 322 urn。在此色谱条件下，阿魏酸和其他峰分离完全，阿魏酸在 3．378一7．882卜g．mL’范围具有良好的线性关系（r＝0．9971），高、中、｛ 浓度下的 日 内和日 间变异系数均巧％，加样回收率为 94．97t5．40－99．2516．2O，最低检坝限为 0．6756 ng。（2）阿魏酸含量坝定 结果：）4％单煎剂 FA含量为 233．16士 1．62pg／g．mL‘，配伍丹参时，其溶 5 第四军医大学硕士毕位论文 出量明显增加，为引0石6士4．9旭g血”’…＜0刀1卜而与赤芍配伍后，FA 溶出量却明显减少，为1乃．78士5．79呛g．InL”’（p＜0刀）。 二．川苇复方的临床药动学监测：（）人血清中阿魏酸HPLC测定的 方法学：以甲醇：水：醋酸（40：59．7：0．3，v／v）为流动相，Diamonsil（TM） 柱门 mm X 4石 mm，5 u m）为固定相，流速 1刀 mL／min，检测波长： 322 nxn，以香豆素为内标。在此色谱条件下，阿魏酸和内标分离完全，阿 魏酸在8刀449一965．3846ng．mL”‘范围具有良好的线性关系（＊0．9981）。最 低检坝浓度为 8＊44 gng·mL’，最低检狈限为 1＊04 ng。高、中、低浓度的 日内和日间变异系数均＜10％，平均回收率为99．3土5．＊％。Q）健康人和血 瘀证患者口服川穹汤后血清阿魏酸药动学结果：两组的药动学参数均符合 开放性二室模型，血瘀证组和健康组的主要药动学参数分别如下： V厂（c）／un．ml1一0＊064士0＊027和0＊093土0＊042；t；n。／min一24．53士23．85 和12．18士5石3；ti／2。／而＊一2刀．85h06．38和114．47士68．94 TIQk加h一4刀2 士3＊二和4．49上2．45；AUC／ng．min刁．ml＊－12062．＊上2145 ＊5和7112．7022 土二565
郭军[5]2003年在《方剂治疗药物监测（Ⅲ）》文中研究表明中华民族繁衍生息几千年，中医药学的作用和贡献是巨大的，但随着现代科学的发展，中医药的现代化对祖国医学的继承和发展显得越来越重要。中医治疗疾病的一个重要方面就是将辩证论治理论贯穿于中药方剂的配伍当中，方剂也成为体现传统医学证治精华的主要手段之一。目前在方剂研究中存在的一个基本问题是：究竟是方剂吸收入体内的什么化学成分引起的?证本质是什么?即方剂体内药效物质基础不清楚。证本质不清楚。也就是现今相关科学前沿所说的复方药效物质不清楚。黄熙教授在以往十余年“证治药动学假说及其六要素”的基础上，提出了“方剂治疗药物监 第四军医大学硕士学位论文测”设想，以期循序渐进地解决上述难题。该设想包括四方面的内容，即方剂制剂学、方剂药效学、方剂药动学和方剂治疗学监测。本研究在此思路与设想的基础上，进行速效救心丸的药动一药效学监测。拟运用气相色谱法（GC一 FID）建立对速效救心丸在人血中的冰片、）h穹嗓进行定性及定量研究的方法学：进行速效救心丸中冰片、川穹嗓在健康志愿者和冠心病血瘀症患者的血药浓度监测，并同步观察相关临床指标的变化，为进一步深入进行速效救心丸的临床TDM研究奠定基础。把科学定量化数据引入中医药临床，丰富中药方剂TDM体系，以摆脱单纯经验式治疗，为方剂治疗药物监测开辟一条新的途径。方祛：1．速效救心丸中川苇噎及冰片的气相色谱条件测定仪器：Agi lent（HP）4890D气相色谱仪；毛细管柱：15mXO．53nunX15um，FID（氢离于检测器）1．1对气相色谱条件进行摸索，最终确定检测条件为：柱温：85OC，进样日温度：230aC，空气压力：30mPa，氢气压力：30MPa氮气压力：14mPa，载气流量：8．3mVmln。1．2通过大量有关冰片及川穹嗓的报道文献中筛选对比，在正十四烷、樟脑、正辛醇、素中筛选出蔡为内标。对乙酸乙酯、正己烷、乙醇做对照品溶剂进行比较筛选，优选为乙醇。2．冠心病血瘀证患者服药方法和空白及服药后血浆的预处理实验2．1通过气相色谱方法对不同有机溶剂革取有效药物含量的多少进行比较筛选，并选定其中测试提取效果最好的正己烷加叁氯甲烷门0：1）加氢氧化钠为提取液。2．2通过不同的革取和预处理方法在气相检测中所获结果优劣，确立在服药后冠心病血瘀症患者及健康志愿者血样的采集方法及血清中的靶物质 ·6· 第四军医大学硕士学位论文测定的预处理方法。2．2．1制定冠心病血瘀症患者采样指标：包括用药前准备、服药时间、方法、剂量、采样时间、采样量等。2．2．2建立并测试样品预处理方法A．采血样肝素抗凝后立即置离心管中高速离心15min，分别提取血浆于一20 OC冻存。B．取服药后血浆 0．5ml，加入 Na0H溶液（0．05mol／1）100 ul，加入正己烷：叁氯甲烷（10：l）混合溶液 lml，振荡 30秒后，离心（2000转／分）5分钟，取有机层置带塞刻度尖底管中4℃氮气吹至20 pl进样。3．气相色谱分析法对冠心病血瘀症患者服用速效救心丸后血样中川穹噎及冰片的定性检测 取健康志愿者服药后smin、10min时间点的血样进行预处理，采取前述方法革取血浆中相关成分。除检测原样品外，同时对原样品加入内标及对照品进行检测。各样本进样后分别进行不同服药时间点之间，以及加对照品前后的峰面积比较，甄别确认保留时间下的出峰成分性质。川穹嗓的保留时间为5．6SZmin，冰片中异龙脑、龙脑保留时间分别为8．982min、9．515min，内标案的保留时间为10．slsmin。4．病例收集 选取冠心病血瘀症患者10例，健康对照组10例，早晨空腹采空白血后，舌下含服速效救心丸，按每公斤体重 10mg口服。服药观测点：空腹、服药后设 5、10、30、60、9 0分钟六个观测点。以上各观测点均测脉搏、血压、心电图。结果： 1．健康志愿者及冠心病血瘀证患者含服速效救心丸后体内冰片的血药浓度在 5、10、30、60、90分钟时，分别为 5．703f2．990、S．684士6．616、 ·7· 第四军医大学硕土学位论文16．46、20．04t9．987、11．63t3．788、6．968I3．345。且冠心病血瘀症患者与健康对照组有明显差异h州．05）。 2．健康志愿者及冠心病血瘀症患者含服速效救心丸后血压、心率及心电图变化：健康对照组空腹、服药后5、10、30、60、90分钟分别为：收缩压124f18．0、117fi3．4、115fi3．6、lllllo．0、116ti3．2、116土13．SInmHg；舒张压72土15．2、67．5士15．2、66．l士12．4、63．5土13．4．67．5士14．4、65．l士13。8 mmHg：心率75．2土13．4、74．7士15．3、70．3上9．6、68．7 fi 0．4、67．5 f 9．7、68 fg．6次／分。空腹、服药后5、10、30、60、90分钟分别为：患者组收缩压149士29．5、150士29．5、139士24．5、144土19．9、
王永刚[6]2007年在《冠心Ⅱ号和芎芍对大鼠血流动力学的影响及其血管内皮保护机制初探》文中认为目的：研究胃肠道给冠心Ⅱ号和芎芍(川芎和赤芍配伍)对大鼠血流动力学的影响，并初探对血管内皮(细胞)的保护机制。方法：冠心Ⅱ号冻干粉(10．2g／kg，相当于中药材30g／kg)和芎芍冻干粉(9．6g／kg，相当于中药材30g／kg)一次经麻醉大鼠十二指肠给药后，对其心率(HR)、ECG、平均动脉压(MAP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左心室发展压(LVDP)、压力-率积(PRP)、左室内压上升和下降最大速率(LV dP／dt max和LV dP／dt mix)进行3h动态监测；运用分光光度计测定药后3h血浆和心肌组织中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原性谷胱苷肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)等；采用HPLC技术同步测定一次灌胃芎芍冻干粉后30min大鼠血浆中芍药甙和阿魏酸。结果：①血流动力学监测表明：对HR芎芍和冠心Ⅱ号在5min开始降低，前者持续到3h，后持续到60min(p＜0．05或0．01)；两方对ECG均没有显着的差异(p＞0．05)；对MAP芎芍和冠心Ⅱ号在5min开始降低，前者持续到3h(p＜0．05或0．01)，后者在5-60min降低有明显差异(p＜0．05)；两方都对LVSP均无明显差异(p＞0．05)，但芎芍在120min左右对LVEP降低比冠心Ⅱ号有明显差异(p＜0．05)；对LVEDP芎芍和冠心Ⅱ号在5min后开始升高，前者在5-60min升高有明显的差异(p＜0．05)，后者在5-30min升高有明显的差异(p＜0．05)，两者在30-60min之间有明显差异(p＜0．05)；对LVDP芎芍在120min左右略有降低(p＜0．05)，冠心Ⅱ号则无明显差异(p＞0．05)；对PRP芎芍在15min后降低有明显的差异(p＜0．05或0．01)，冠心Ⅱ号在30-60min之间降低有明显差异(p＜0．05)，前者在15min处和60min后与后者有明显差异(p＜0．05或0．01)；两方对LV dP／dt max均无明显的影响(p＞0．05)；对LV dP／dt mix芎芍在5-15min和60min后升高有明显差异(p＜0．05)，冠心Ⅱ号在10-90min升高有明显差异(p＜0．05)；两方表现在压力相关环上，最低点均向右上偏移。②冠心Ⅱ号和芎芍与生理盐水比较，对大鼠血清中NO水平增加(p＜0．05)；血清和心肌组织中T-AOC增加(p＜0．01或0．05)，血清中iNOS降低(p＜0．05或0．01)，心肌组织iNOS无明显差异(p＞0．05)；血清和心肌组织中T-AOC和GSH增加(p＜0．05)，血清中T-SOD和CuZn-SOD降低(p＜0．01)。③初步测定出芎芍冻干粉大鼠灌胃后30min血浆中含有芍药甙和阿魏酸。结论：冠心Ⅱ号和芎芍都具有一定的负性心率和降压作用，以及对左心室内压的影响，提示两方可能都具有一定的扩张动脉，降低心肌耗氧量和增加冠脉血流量的作用。其降压机制之一在于降低HR和NO介导的内皮性血管扩张引起。两方均具有一定的抗氧化作用，能够调节体内氧化还原稳态平衡，因此对血管内皮(细胞)具有一定的保护作用。芎芍冻干粉在大鼠体内的有效成分初步确定了芍药甙和阿魏酸。
王雁梅[7]2005年在《RP-HPLC法监测生化汤制剂及其药代动力学研究》文中进行了进一步梳理对中药进行现代化研究是当今我国生命科学研究的重点项目之一。中药药理学作为解决中药尤其是中药复方药效作用原理这一关键环节的重要学科,是当前中药现代化研究的热点之一。目前,我国对中药复方药理学的研究虽有很大的进展,但相当一部分还是局限于某种药效的观察,对作用机制的研究比较薄弱。本研究以“证治药动学”和“方剂血清成分谱”假说为指导,将传统中医理论与现代医学理论相融会,选择组方严谨、疗效确切的生化汤、冠心Ⅱ号为工具药方,在严格药材质量、煎煮工艺等质量控制的前提下,进行生化汤临床药代动力学研究及冠心Ⅱ号体内外成分谱对照初探。 方法:1.RP-HPLC法,采用Inertsil ODS-3柱(250mm×4.6mm,5μm)为固定相,甲醇-水(含1%乙酸)(45:55,v/v)为流动相,流速1.0ml·min~(-1),检测波长为321nm,外标法定量。比较生化汤单煎液与共煎液中阿魏酸的含量;考察由甘草和干姜的不同炮制品与生化汤中其它叁味药组合构成的4种样本中阿魏酸含量的变化;比较不同溶媒煎煮生化汤中阿魏酸含量的变化。2.水浴法处理血清样品,以对羟基苯甲醛为内标,Inertsil ODS-3柱(250mm×4.6mm,5μm)为固定相,甲醇—水(含0.6%冰醋酸)(43:57,v/v)为流动相,流速为1.0ml/min,321nm波长下检测,以RP-HPLC法测定健康女性志愿者口服生化汤后血清FA浓度,用3P97程序计算药动学参数。3.用水浴法、乙腈、甲醇处理健康男性志愿者口服冠心Ⅱ号汤剂30min的含药血清,采用恒流和梯度洗脱两种方法进行色
杨玉兴[8]2003年在《生物方剂分析药理学：逍遥散临床药动及冠心Ⅱ号实验药效的初步研究》文中指出由于方剂体内药效物质基础和证本质不清楚等因素致使方剂药理学研究难以深入。针对此现象，受“生物药物分析”启发，黄熙教授在其“证治药动学”理论和实践的研究基础上，提出了“生物方剂分析中医药研究”设想，包括生物方剂分析药效学研究、药动学研究、质量控制标准研究、制剂学研究、证本质研究等内容。 既往方剂药动学研究多采用非血药浓度法，药效学研究则忽视了究竟是方剂的什么化学成分引起证机体产生药效作用。本研究从生物体内分析着手，选择不同方剂从药动学(临床)、整体的药效学(基础)两个方面进行了生物方剂分析药理学的初步研究。 首先研究了10例肝郁脾虚证患者一次口服“加味逍遥散”汤剂后当归来源的阿魏酸(FA)在患者体内的药代动力学特征。方法：1．应用乙腈提取法预处理血样，反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定患者在口服加味逍遥散汤剂后0、5、10、15、30、60、90和120min共8个时间点血清样本中的FA浓度。色谱条件：KromasilC18柱(250×4.6mm，5um)为固定相，甲醇-水-冰醋(40：59.6：0.4,v／v)为流动相，流速：1.0ml／min，检测波长λ：322nm；内标为对-羟基苯甲醛。2．以3P97软件拟合药动学参数。结果：1．FA血清第四军医大学硕士学位论文．4，最低检测B浓度为4．692ng·mL’（信噪 卜3），线性范围为7．82－195．sng·mL一位和．99713），平均回收率一9．38％，CV均小于10％；2．肝郁牌虚证患者的血药浓度一时间曲线符合二室开放模型，tllZ广41．54士23．952if，t；／29－gi刀1士63．14min，tp＝37二9士14．78min，C；＊肌一18．29上8．58 ng·mL＊，AUC－2443．48士8万石ong iL‘·mh。结论：且．方法简便、快速、灵敏、准确而专一；2．口服加味逍遥散水煎液后FA自胃肠道吸收慢，达峰时间为30min左右，且消除缓慢；3．该实验为生物方剂分析临床药动学研究提供了实验和理论依据。 继之探讨了“冠心＊号”对大鼠心肌缺血一再灌注损伤（MI／RI）模型心肌细胞凋亡相关基因Bax、BCI－2、Fas蛋白表达的影响，并结合血清药动学研究。方法：采用冠状动脉结扎一松结法建立在体大鼠MI／RI模型，以SABC免疫组化法与医学图像分析相结合的方法检测心肌细胞中Bax、Bcl．2、Fas蛋白表达的变化。结果：1．模型组大鼠心率在缺血期明显加快（P＜0刀1），再灌注后减慢（P t 0刀 1，0刀5）；冠心＊号大、小剂量组再灌注 6h，心率较缺血前、后均有下降（P＜0刀5）；与模型组同时间点相比，大剂量组缺血期及再灌注 5、6h心率均明显减慢（P＜0刀1）。2缺血再灌注后 Bax、Fas蛋白表达显着增强，BclZ蛋白表达显着下降（Pwto．01）；冠心＊号干预后，Bax。Fas蛋白表达下降，BclZ蛋白表达上调（Pwto刀1，0刀5）；且随剂量增大Bax蛋白表达进一步降低（P＜0刀1）。3．保留的大鼠多次口服冠心＊号后的血样正在进行药动学研究。结论：1．冠心＊号可通过减慢大鼠缺血期及再灌注期心率而保护受损心脏；2．冠心＊号可通过下调凋亡刺激基因B3X、F＆S蛋白表达、上调凋亡抑制基因k—2蛋白表达从而保护 MWI心脏，且存在一定的量一效关系，干预心肌细胞凋亡减轻MI／RI可能是其药效学分子机制之一；3．为生物方剂分析整体药效学研究提供了实验和理论依据。 以上研究思路未见文献报道。结果表明方剂药理学研究与体内有效成分分析相结合是可行和必要的，为方剂药理学研究提供了可借鉴的模式，为生物方剂分析中医药研究奠定了基础。
谷艳[9]2010年在《冠心Ⅱ号不同配伍方及不同剂型对丹参素、阿魏酸药代动力学的影响》文中研究指明方剂配伍规律的现代研究是中医药现代化研究的重点和难点。随着科学进步及中医药现代化进程的加快,利用有效成分及有效组分进行组方配伍已成为方剂配伍规律研究的新模式。本课题为国家973计划项目《方剂配伍规律研究》的一部分,实验选择经典方剂冠心Ⅱ号为工具药,通过对冠心Ⅱ号不同组分配伍和不同剂型中的药效成分——丹参素、阿魏酸在Beagle犬体内药动学过程的较深入研究,获得冠心Ⅱ号全方配伍规律及其科学内涵的诠释,同时就传统汤剂存在的合理性做出评价,为组分配伍模式的完善提供新的例证。目的：研究冠心Ⅱ号不同配伍方和不同剂型的药效成分丹参素、阿魏酸在Beagle犬体内的药代动力学过程,获得对冠心Ⅱ号配伍规律及其科学内涵的合理诠释。方法：1.以色谱柱ZORBAX Eclipse plus C18(2.1×10mm,1.8μm)为固定相,以水-乙腈(v/v=83：17)为流动相,电离源为ESI(-),MRM模式检测,同时优化多种生物样品预处理方法,建立丹参素、阿魏酸在血浆中的液-质联用(LC-MS/MS)检测分析方法。2.将冠心Ⅱ号按功效拆分为不同配伍组：冠心Ⅱ号全方提取物重组方组(A组)、活血药提取物重组方(B组)、理气药提取物重组方组(C组)、丹参提取物组(D组)和川芎提取物组(E组)；另设冠心Ⅱ号全方汤剂组(F组)。实验按拉丁方设计法循环6周期(即6次)给Beagle犬灌服冠心Ⅱ号各配伍方及全方汤剂。应用LC-MS/MS检测犬血浆中丹参素、阿魏酸含量。利用药代动力学软件计算各组药代动力学参数：药-时曲线下面积(AUC)、体内平均滞留时间(MRT)、T1/2、表观分布容积(V)、清除率(CL)、峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax),并比较组间差异。结果：1.建立了灵敏、特异、准确、可靠的丹参素、阿魏酸在Beagle犬血浆中的LC-MS/MS分析方法。2.冠心Ⅱ号不同配伍方的丹参素、阿魏酸在Beagle犬体内的药动学研究显示,与B、D两组比较,A组丹参素的Cmax和AUC呈增高趋势,但无统计学意义；与C、E两组比较,A组阿魏酸的CL呈降低趋势,V呈增高趋势。即冠心Ⅱ号不同配伍方中丹参素、阿魏酸的药动学参数均有差异趋势,但无统计学意义。3.冠心Ⅱ号不同剂型的丹参素、阿魏酸在Beagle犬体内的药动学研究显示,与A组比较,F组丹参素的AUC、Cmax和CL均显着增高(P<0.01或0.05),而V和MRT则显着降低(P<0.01或0.05),F组阿魏酸Tmax和MRT(0→t)均显着增高(P<0.01或0.05),而Cmax、CL和V则显着性降低(P<0.01),T1/2则无显着性差异。即冠心Ⅱ号不同剂型中丹参素、阿魏酸的药动学参数除T1/2外均有统计学意义。结论：1.按功效拆方,冠心Ⅱ号不同配伍方的丹参素和阿魏酸在Beagle犬体内的药代动力学过程基本一致。2.冠心Ⅱ号全方汤剂比全方提取物重组方的丹参素达峰浓度和生物利用度高,比全方提取物重组方的阿魏酸清除慢、体内滞留时间长。3.综合分析冠心Ⅱ号的丹参素、阿魏酸的药代动力学与药效学的结果(全方汤剂优于全方有效组分重组方),可以看出,冠心Ⅱ号疗效的发挥可能是通过活血化瘀来实现的,而行气、理气可助活血化瘀。4.中药传统汤剂有其存在的合理性。本文以药代动力学为手段,首次以功效拆方阐释方剂组合原则,对冠心Ⅱ号有效组分研究方剂配伍规律进行了初步探索；首次通过传统汤剂与全方有效组分重组方的体内过程的比较,验证了中药传统汤剂有其存在的合理性；、并且建立了同时处理含丹参素、阿魏酸两种化学成分的血浆样品的方法,为中药复方多组分的生物样品预处理及药代动力学研究提供了方法学借鉴。
王煜[10]2014年在《冠心Ⅱ号主要吸收成分羟基红花黄色素A抗动脉粥样硬化的机理及相对贡献度研究》文中进行了进一步梳理目的：动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是脂质代谢异常导致的动脉血管壁的慢性炎症性疾病,是冠心病、心肌梗死、高血压等心血管疾病共同的病理基础。冠心II号由已故的着名中医学家郭士魁先生所创制,方含丹参、川芎、赤芍、红花和降香五味中药(比例2：1：1：1：1),是治疗冠心病的经验方。中医方剂的疗效作用是中药中多种化学成分共同作用的结果。本实验目的：①运用超高效液相色谱(UPLC)法测定冠心Ⅱ号中有效成分的含量,定量分析阿魏酸、羟基红花黄色素A、丹参素、芍药苷和原儿茶醛5种成分；②建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS、MS)法定量定性分析C57BL/6J小鼠灌胃冠心Ⅱ号血浆中3种主要吸收成分阿魏酸、羟基红花黄色素A和丹参素；③选用ApoE-/-小鼠并给予高脂饮食饲养建立动脉粥样硬化模型,从氧化应激机制角度,研究冠心Ⅱ号主要吸收成分羟基红花黄色素A抗动脉粥样硬化的机理及相对贡献度。方法：①超高效液相色谱(UPLC)法测定冠心Ⅱ号中阿魏酸、羟基红花黄色素A、丹参素、芍药苷和原儿茶醛5种有效成分的含量。色谱条件：流动相：甲醇(A)和1%乙酸水(B)；梯度洗脱：Omin97%B:1min97%B；6min85%B；11min80%B；15min55%B。②超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法对C57BL/6J小鼠灌胃冠心Ⅱ号血浆主要吸收成分的定性定量分析。色谱条件：流动相：甲醇(A)-O.1%甲酸(B)；梯度洗脱：Omin90%B；5min40%B；6min10%B；7min10%B；8min90%B.质谱条件：离子源：ESI((电喷雾电离,electrospray ionization)；检测方式：正离子模式；扫描方式：MRM(多反应监测,multiple-reaetion monitoring)；定量分析时的离子反应分别为m/z192.8-m/z133.96(阿魏酸)、m/z611-m/z491.04(羟基红花黄色素A)和m/z196.8-m/z178.96(丹参素)。③选定主要吸收成分羟基红花黄色素A,与母方冠心Ⅱ号对ApoE-/-小鼠抗动脉粥样硬化的疗效进行比较并明确机理,运用公式(相对贡献度=成分疗效÷母方疗效×100%),初步定量主要吸收成分羟基红花黄色素A对冠心Ⅱ号抗动脉粥样硬化的相对贡献度。在本课题研究中,以As模型组为参照,成分疗效是指与As模型组比较,给予羟基红花黄色素A干预后,各种药效指标含量或表达水平上升或下降的变化差值；母方疗效是指与As模型组比较,给予冠心Ⅱ号干预后,各种药效指标含量或表达水平上升或下降的变化差值,二者变化差值的比值即为羟基红花黄色素A的相对贡献度。选用ApoE-/-小鼠给予高脂饮食喂养8周建立动脉粥样硬化模型,行血脂[甘油叁酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]水平检测、主动脉弓HE染色和油红O染色以及血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)含量测定；Real Time Q-PCR检测胸腹主动脉肿瘤坏死因子-α[(TNF-α)、血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)、白介素-1β(IL-1β)mRNA水平；Western Blot检测胸腹主动脉TNF-α、VCAM-1、IL-1β表达。结果：①UPLC法测定冠心Ⅱ号汤剂中阿魏酸、羟基红花黄色素A、丹参素、原儿茶醛和芍药苷5种有效成分的含量。15min内5种成分良好分离,色谱峰单一且无杂峰干扰。线性回归、精确度、准确度、回收率、重现性和样本稳定性均良好。5种有效成分含量分别为：阿魏酸128.84+0.47(ng/mg·生药)、羟基红花黄色素A1949.61±1.56(ng/mg·生药)、丹参素270.38±1.95(ng/mg·生药)、原儿茶醛184.84±0.80(ng/mg·生药)、芍药苷389.67±0.91(ng/mg·生药)。②UPLC-MS/MS法对C57BL/6J小鼠灌胃冠心Ⅱ号血浆3种主要吸收成分的定量定性分析,结果提示阿魏酸、羟基红花黄色素A、丹参素均可在血浆中检测到,含量分别为：20.4ng/ml.154.Ong/ml和6.9ng/ml,其中羟基红花黄色素A含量最高。③选用ApoE-/-小鼠予以高脂饮食饲养建立动脉粥样硬化模型,结果提示：a)).血清血脂水平检测：与正常对照组相比,模型组TC、HDL-C、LDL-C水平增高,但TG没有差异。冠心Ⅱ号和羟基红花黄色素A干预后TC、HDL-C、LDL-C水平下降,其中羟基红花黄色素A对冠心Ⅱ号降低血脂TC、HDL-C、LDL-C水平的相对贡献度分别为：46.42%、64.09%、53.89%；b).HE染色镜下可见动脉粥样斑块形成,油红O染色可见脂质及斑块呈红色。斑块面积分析,模型组为(43.25+3.70)%,冠心Ⅱ号组为(30.20+1.48)%,羟基红花黄色素A组为(35.63+2.06)%。羟基红花黄色素A对冠心Ⅱ号减少斑块面积的相对贡献度为58.39%；c).血清MDA、SOD、GSH、CAT含量测定：与正常对照组相比,模型组MDA含量增加,SCD、GSH、CAT水平下降；冠心Ⅱ号和羟基红花黄色素A干预后MDA含量减少；SOD、GSB、CAT水平升高。羟基红花黄色素A对冠心Ⅱ号降低MDA含量和升高CAT、SOD、GSH水平的相对贡献度分别为：55.79%、56.00%、32.61%、28.34%; d). Real Time Q-PCR检测胸腹主动脉TNF-α、VCAM-1和IL-1βmRNA水平：与正常对照组相比,模型组TNF-α、VCAM-1和IL-1βmRNA表达水平升高；冠心Ⅱ号和羟基红花黄色素A干预后TNF-a. VCAM-1和IL-1βmRNA表达水平下降；羟基红花黄色素A对冠心Ⅱ号降低TNF-α、VCAM-1和IL-1βmRNA表达水平的相对贡献度分别为：81.83%、85.96%和82.67%；e).Western Blot检测胸腹主动脉TNF-α、VCAM-1和IL-1β表达：与正常对照组相比,模型组TNF-α、VCAM-1和IL-1β表达升高；冠心Ⅱ号和羟基红花黄色素A干预后TNF-α、VCAM-1和IL-1p表达下降；羟基红花黄色素A对冠心Ⅱ号降低TNF-α、VCAM-1和IL-1β表达的相对贡献度分别为：58.88%、61.83%和52.17%。结论：①运用超高效液相色谱(UPLC)方法对冠心Ⅱ号汤剂中阿魏酸、羟基红花黄色素A、丹参素、芍药苷和原儿茶醛5种有效成分的含量测定,该方法快速灵敏、准确可靠、稳定且重复性好。②采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法定性定量分析C57BL/6J小鼠灌胃冠心Ⅱ号血浆中3种主要吸收成分为阿魏酸、羟基红花黄色素A和丹参素,其中羟基红花黄色素A含量最高。为研究羟基红花黄色素A对冠心Ⅱ号抗动脉粥样硬化的机理及相对贡献度奠定了基础。③ApoE-/-小鼠经过高脂饮食喂养8周后,形成了典型的冠状动脉粥样硬化病变。冠心Ⅱ号和羟基红花黄色素A灌胃后,可以改善As病变小鼠血脂水平及斑块进展程度。④As病变小鼠机体氧化应激状态增强,冠心Ⅱ号和羟基红花黄色素A具有降低氧化应激水平从而减轻As病变程度的作用。⑤主要吸收成分羟基红花黄色素A和母方冠心Ⅱ号通过抗氧化应激发挥抗As作用,比较二者疗效,可认为羟基红花黄色素A在冠心Ⅱ号抗As过程中发挥了一定的相对贡献度。
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