【摘要】目的：分析自身抗体结合多肽阵列重建在胰腺癌早期诊断中的应用价值。方法：收集2014 年1 月-2015 年6 月我院早期胰腺癌患者40例作为观察组研究对象，并选取同期来我院健康体检中心体检的健康者40 例作为对照组研究对象，均进行间接免疫荧光法检测，并结合多肽阵列重建，分析自身抗体结合多肽阵列重建的临床诊断价值。结果：观察组自身抗体阳性患者25 例（62.50%），多于对照组的7 例（17.50%），数据差异显著（P<0.05）。观察组40 例患者中，经自身抗体结合多肽阵列重建诊断39 例，诊断符合率为97.50%。结论：自身抗体结合多肽阵列重建在胰腺癌早期诊断中的应用价值较高，建议在临床上进行推广。
【关键词】自身抗体；多肽阵列重建；胰腺癌
【中图分类号】 R2 【文献标号】 A 【文章编号】9128-6509（2015）12-0007-02
胰腺癌是一种病程隐匿、早期诊断率低、发展快、易恶化且预后极差的一种恶性肿瘤，对患者的身体健康危害极大，临床主要根据影像学、病理或细胞学进行诊断，胰腺癌早诊断中可靠的特异性血清标志物较为缺乏[1]。本文主要分析了自身抗体结合多肽阵列重建在胰腺癌早期诊断中的应用价值，现作出如下总结性报告。
1 资料与方法
1.1 临床资料
收集2014 年1 月-2015 年6 月我院早期胰腺癌患者40 例（均经手术病理证实）作为观察组研究对象，其中男23 例，女17 例，最大年龄72 岁，最小年龄32 岁，平均（61.11±4.32）岁；并选取同期来我院健康体检中心体检的健康者40 例作为对照组研究对象，其中男22 例，女18 例，最大年龄68 岁，最小年龄30 岁，平均（61.38±4.26）岁。两组研究对象年龄、性别等方面根据统计学分析，无明显差异（P>0.05)，具有比较价值。
1.2 方法
1.2.1Pepscan 方法的建立
设计合成p53、k-ras、和MUC1 肿瘤抗原的Pepscan 筛选多肽阵列。分别对P53、k-ras、和MUC1 单克隆和多克隆抗体进行抗原决定簇作图（抗体识别的抗原决定簇已知）。以建立基于多肽阵列技术的Pepscan 方法。
1.2.2 抗原多肽筛选
初步建立胰腺癌特异肿瘤相关抗原的Epitope 指纹图谱，合成p53、MUC1 和k-ras 肿瘤抗原的Pepscan 多肽阵列。对40 例胰腺癌患者进行免疫印迹筛选，建立胰腺癌肿瘤相关抗原的Epitope 指纹图谱。
1.2.3 多肽阵列血清免疫印迹
5%脱脂牛奶封闭后在室温环境下静置30 分钟。随后将PBS 稀释的待测血清加入，在室温环境下孵育1h。PBS-T 洗10min×3 次。1:5000 稀释HRP 标记兔抗人IgA+IgG+IgM (H+L)(Sigma)抗体，室温孵育1h。PBS-T 洗10 分钟×3 次。ECL 显色，数码照相。
1.2.4 合成血清抗体检测多肽阵列
根据Peptide AA V0.3.0 软件分析检测结果，数据进行Genetic algorithm/k-nearest neighbor 分析，建立胰腺癌血清自身抗体的特征性线性抗原决定簇“指纹”图谱。挑选多肽，使用SPOT 技术合成胰腺癌抗体检测多肽阵列。为提高实验的准确性和可重复性，每个多肽都合成多个拷贝。
1.3 统计学分析
数据资料均采用SPSS19.5 进行统计分析，计量资料、计数资料采用均数（ x ±s）、百分比（%）表示，且分别用t、X2检验，P＜0.05 表示有统计学意义。
2 结果
经自身抗体结合多肽阵列重建诊断确诊39 例，与病理诊断结果对比，诊断符合率为97.50%。在本次研究中，观察组自身抗体阳性患者25例，对照组自身抗体阳性患者7 例，两组数据对比差异显著（P<0.05），详见表1.
表1 两组患者自身抗体阳性率对比
3 讨论
在世界范围内胰腺癌的发病率均有明显增长趋势，根据上海市区恶性肿瘤患病率统计，1995 年胰腺癌男、女患病率已分别为9.6/10 万、9.2/10万，在全身恶性肿瘤发生率中排在第7 和第8 位，对我国人们健康威胁极大[2]。现阶段，通过临床研究可知，建立快捷、准确的血清肿瘤自身抗体检测新方法，可省略蛋白重组表达和提纯等步骤来对肿瘤血清自身抗体进行检测，和传统检测方法相比，有操作简便、实验周期短且具有标准化等优势，所以在多种肿瘤抗原检测中得以应用及推广[3-4]；并且在高通量检测多种肿瘤相关抗体的表达中也适用，应用前景较为广阔。在研究中我们将P53、K-ras 和MUC1 三个胰腺癌中常见肿瘤相关抗原作为靶点，通过多肽阵列方法进行抗原决定簇作图，在进行血清抗体检测研究时选择阳性多肽组成血清抗体检测微阵列，主要目的是为了建立筛选TAAs 的抗原表位，以此来取代全长肿瘤相关抗原蛋白完成血清抗体检测[5]。
根据近年来国内外相关研究结果可知[6-7]，肿瘤抗原芯片在临床中的应用范围有限，单独或使用蛋白芯片技术实施肿瘤血清抗体研究均需解决肿瘤相关抗原制备问题。相关研究人员要在对肿瘤抗原表达载体前提下进行重组抗原蛋白表达，并实施目的蛋白的腹型及纯化过程，实际操作难度较大。并且根据不同抗原，表达载体构建系统的纯化、选择、复性方法也存在较大差异。Pepscan 技术的出现使该问题得到了方法学支持。Pepscan 是在多肽阵列的确定抗体识别的抗原表位基础上形成的一种新方法。该方法通过斑点合成（SPOT Synthesis）技术将抗原多肽分段合成到纤维素膜上组成Pepscan 阵列，与抗体孵育后，利用多肽序列可确定其识别的抗原表位，在现阶段临床上应用范围较广[8]。在本次研究中，观察组40 例研究对象中自身抗体阳性患者25 例（62.50%），多于对照组的7 例（17.50%），两组数据差异显著（P<0.05）。由此可知，在胰腺癌早期诊断中自身抗体结合多肽阵列重建具有较高的临床应用价值，可在临床上进行大范围推广。
参考文献：
[1]魏枫华，李满元.CEA 和CA19-9 在诊断早期胰腺癌中的价值[J].中国现代药物应用，2014,8（19）：70-71.
[2]李笋.MSCT 薄层增强扫描对早期胰腺癌的诊断价值[J].中国实用医药，2010,5（11）：120-121.
[3]党军强，廖江泰，任彦顺.胰腺癌的早期诊断和治疗进展[J].现代肿瘤医学，2015,23（9）：1287-1291.
[4]乔庆红，郭春林.胰腺癌的早期诊断[J].中国医药指南，2013,11 （上接第7 页）
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[5]Hocker JR,Postier RG,Li M,et al.Discriminating patientswith early-stage pancreatic cancer or chronic pancreatitis usingserum electrospray mass profiling[J].Cancer Letters，2015,359（2）：314-324.
[6]Ogura M,Shikano N,Nakajima S,et al.A strategy for improvingFDG accumulation for early detection of metastasis from primarypancreatic cancer: Stimulation of the Warburg effect in AsPC-1cells.[J].Nuclear Medicine and Biology，2015,42（5）：475-481.
论文作者:钟宝元 罗开源 刘清泉 曾祥福 邓龙颖
论文发表刊物:《健康前沿》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/1/25
标签：多肽论文; 抗体论文; 抗原论文; 阵列论文; 胰腺癌论文; 肿瘤论文; 血清论文; 《健康前沿》2015年12月供稿论文;