(1佳木斯大学医学院研究生院；2佳木斯大学附属第一医院；黑龙江省佳木斯 154000)
摘要：目的：探讨甘草酸二铵对小鼠脑出血后抗炎作用。研究方法：选取健康雄性昆明小鼠56只随机分成实验组A、B、C、D、E和F(对照组)、G(空白对照组),共7组,每组8只。实验组小鼠腹腔注射甘草酸二铵20ml/kg,每24小时重复注射一次,于脑出血造模后6h、1d、2d、3d、7d行相应神经功能学评分后处死小鼠,F组小鼠模拟脑出血模型并腹腔注射20mg/kg生理盐水,每24小时重复注射一次,并于实验组相应时间神经功能学评分后处死小鼠,G组小鼠只进行相应手术操作并于腹腔注射20mg/kg生理盐水,于实验组对应时间神经功能学评分后处死小鼠。处死后固定取脑,行免疫组化检测GFAP免疫蛋白检测.结果:甘草酸二胺组在与生理盐水组及假手术组脑组织GFPA表达方面相比较明显降低,各组间相比较 P 均 < 0. 05。结论:甘草酸二铵对小鼠急性脑出血神经保护作用是通过抑制胶质细胞的表达来实现的。
关键词：小鼠脑出血；炎症反应；胶质纤维酸性蛋白
高血压性脑出血是由于脑组织中细小动脉由于高血压的长期压迫作用下并在已在长期慢性病程的基础上发生的出血 [1] 。有研究发现脑出血后引起的炎症反将会对脑组织产生第二次危害,目前对脑出血后引起的炎症反应缺乏有效广泛适用的药物,越来越多的研究者开始注意到中药在治疗方面的功效。甘草酸二铵是甘草中皂苷类成分含有量最高的成分,甘草酸主要是由甘草次酸和葡萄糖醛酸组成。已有的研究表明它具有抑制炎症反应、抗击病毒侵袭、抵抗氧化、抑制肿瘤的发生及发展、也具有一定的免疫功能及护肝功效等多种药理功能.对消化道出血也有较好的作用,有研究证实当甘草酸二胺应用在脑梗死中能明显的降低患者的神经功能缺失程度 ,与抑制炎症反应的发生有关。但甘草酸二铵在脑出血保护作用未见报道。
材料与方法:
1.1材料
实验动物: 雄性昆明小鼠56 只,8 周龄,体质量18 ~ 22 g,购于哈尔滨医科大学实验动物学部
主要试剂及仪器:甘草酸二铵注射液;10%水合氯醛;4%多聚甲醛;HE染色 ；胶质纤维酸性蛋白免疫组化试剂盒；小鼠立体定位仪,超低温冰箱-80℃,多功能酶标仪洗板机,石蜡切片机;HIQNXQD摊片机;PHY III病理组织漂烘仪;自动脱水机RH-12EP;光学显微镜;
1.2小鼠脑出血模型的制作:
参照Hong J. Lee方法制作小鼠脑出血模型，并断尾法取血，利用微量注射射仪汲取新鲜血液约50ul,迅速插入已钻好的孔内,向内进针5mm(相当于尾状核部位)以10ul/min的速度注血,留针10min后迟缓性退针(约30s),钻孔以骨蜡封闭,缝合头皮。整个过程保持无菌操作。实验组小鼠给予腹腔注射20mg/kg的甘草酸二铵进行干预,对照组只进行相关手术操作向腹腔注射20mg/kg的生理盐水,之后每间隔24h重复处理一次。 实验组小鼠分别在术后6h、1d、2d、3d、7d评分后处死取脑。脑出血模型成功的标准为以脑组织石蜡切片在显微镜先观察到较明显的的血肿为准。
1.3分组处理:A、B、C、D、E实验组小鼠腹腔注射甘草酸二铵20ml/kg,每24小时重复注射一次,于脑出血后6h、1d、2d、3d、7d行相应评分后处死小鼠,F组小鼠模拟脑出血模型并腹腔注射20mg/kg生理盐水,每24小时重复注射一次, G组小鼠只进行相应手术操作并于腹腔注射20mg/kg生理盐水。并于实验组相应时间行神经评分后处死小鼠。
1.4相关观察指标 小鼠行4%多聚甲醛灌注取脑并固定后行石蜡切片,做HE染色、运用免疫组织化学的方法检测脑组织GFAP阳性细胞数目
1. 5统计学方法:采纳SPSS19.0统计软件行统计学处置,数据以均数±标准误体现。用单因素方差分析方法对原始数据进行统计学分析,当P值<0.05则具备统计学意义。
2.结果:免疫组化结果显示，
讨论：
高血压性脑出血是由于脑组织中细小动脉由于高血压的长期压迫作用下并在已在长期慢性病程的基础上发生的出血。[1] 有研究发现脑出血后引起的炎症反将会对脑组织产生第二次危害,目前对脑出血后引起的炎症反应缺乏有效广泛适用的药物,脑出血后的炎症介质的增加加快脑组织中细胞的死，细胞的死亡又进一步导致炎症因子的进一步增加，从而进一步加重炎症反应[2 ~3 ]。国外有研究发现, 当脑组织发生损伤后 GFAP表达水平明显增高, 其可能增加可能与脑内神经修复相关, 脑组织受到的的创伤越严重,GFAP表达水平越高,故对 GFAP高表达的实验研究对进一步明确脑出血后带来一系列的脑破坏破坏有更深刻的了解。王淑荣[ 4]研究发现脑出血后 2h病例中检测观察到明显星形胶质细胞增生和变性, 说明出血对正常脑组织是很强刺激因素。
通过本实验研究表明:生理盐水组、甘草酸二胺组和假手术组三组中胶质纤维酸性蛋白的表达量成明显下降的趋势,各组间两两相比后具有统计学差异;说明甘草酸二铵注射液在小鼠脑出血后抑制抑制炎症反应中发挥着一定作用。
参考文献：
[1]赵继宗，神经外科学（M），北京，人民卫生出版社，2014,561-562，
[2]Yuan B，Shen H，Lin L，et al． MicroＲNA367 negatively regulatesthe inflammatory response of microglia by targeting IＲAK4 in in-tracerebral hemorrhage［ J ］.JNeuroinflammation， 2015( 12) : 206．
［3］Yang XL，Kim CK，Kim TJ，et al． Anti-inflammatory effects of fi-masartan via Akt，EＲK，and NFκB pathways on astrocytes stimula-ted by hemolysate［J］． Inflamm Ｒes，2015，65( 2) : 115-123．
[ 4 ] 王淑荣,孙伟, 王德生, 等. 脑出血周 围组织神 经微丝和 胶质纤维酸性蛋 白 的变 化 [ J]. 哈尔滨医科大学学报, 2002, 36( 6) : 451.
论文作者:王德超1, 李明军2
论文发表刊物:《医师在线》2017年9月下第18期
论文发表时间:2017/12/6
标签：小鼠论文; 脑出血论文; 实验组论文; 炎症论文; 生理盐水论文; 组织论文; 腹腔论文; 《医师在线》2017年9月下第18期论文;