儿童氟牙症与维生素D受体FokⅠ基因的关系研究论文_周辰,季佳

1黑龙江省齐齐哈尔市建华医院 口腔科 161000;2黑龙江齐齐哈尔医学院附属第三医院 口腔科 161000

摘要:目的:探讨维生素D受体FokⅠ基因与儿童氟牙症的相关性。方法:在2017年5月到2018年5月,调查齐齐哈尔市5个高氟饮水区的自然村的儿童,其中,中、重度氟牙症80名儿童为试验组,健康儿童为对照组,在空腹状态下进行抽血,化验并分析维生素D受体FokⅠ基因多态性。结果:氟牙症儿童FF基因型分布频率高于健康儿童,ff基因型分布频率低于健康儿童。结论:维生素D受体FokⅠ基因与氟牙症有相关性。

关键词:氟牙症;FokⅠ基因;关系研究;

氟是人体中所必需的一种微量元素,人体中少量的氟元素可有效预防龋齿,但人体长时间摄入高氟可在体内形成并蓄积氟化物,从而对机体造成损伤。氟斑牙,也叫氟牙症,是其主要表现病症之一,可能导致牙釉质出现白垩、缺损以及着色变化,严重者可出现全部牙齿缺损,甚至出现氟中毒而导致死亡。而在高氟饮水区域,水中氟元素过量是导致地方性氟中毒的主要因素。齐齐哈尔市位于东北松嫩平原,具有较为复杂的地貌特征,某些区域地下水的氟含量过高,导致了齐齐哈尔市的一些区域成为了典型的高氟饮水中毒病区。控制氟元素的来源,降低氟化物的摄入,是预防地方性氟中毒的主要办法。

维生素D受体,也叫VDR,有着包括调节细胞分化和增殖,免疫调节功能,维持体内血清磷和钙的稳定,调节钙磷代谢等,而与1.25二羟基维生素D3 结合,可改变VDR的转录效率。VDR与多种疾病的发生特别是骨疾病与有相关性[1-2],本研究通过研究分析维生素D受体FokⅠ基因多态性,探讨与儿童氟斑牙之间的关系,为以后氟牙症的研究和精准医疗奠定基础。

1 资料和方法

1.1 一般资料

依据齐齐哈尔市疾病预防控制中心提供的《黑龙江省饮用水源高氟调查结果》,确定齐齐哈尔市5个自然村为高氟饮水区,并将该5个自然村作为调查点,检测水中氟化物。根据Dean法对150名儿童进行诊断,其中,轻度、中度及重度氟斑牙记为阳性,正常及可疑记为氟斑牙阴性,选取中度及重度氟牙症儿童60例为实验组,健康儿童60例为对照组,两组对象年龄、病情的严重程度、体质指数、性别等经统计学分析发现差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 要求提取空腹静脉血的标本,并按照说明书的要求提取基因组的DNA

1.2.2 引物查询与设计

通过检索维生素D受体基因的资料,从美国国家生物技术信息中心内gene bank中得到维生素受体基因的DNA序列。FokⅠ位点引物序列:上游5'ACTGACTCTGGCTCTGAC3',下游5'CACCTTGCTTCTTCTCCC3',预期产物片段246bp。PCR 扩增反应体系为50μL。

PCR 扩增条件为:94℃预变性5min,循环条件为94℃ 50s,55 ℃ 50s,72℃ 60s,循环5 次,然后94℃ 50 s,60℃ 50 s,72℃ 60 s,循环25 次,72 ℃末端延伸7 min。加入PCR 产物,混匀,反应产物经凝胶电泳,染色,借助紫外灯来观察产生的反应,并根据电泳条带数和位置,来判断胶原基因类型

1.2.3 PCR 产物的纯化使用普通DNA纯化试剂盒。

1.2.4 通过随机抽取10%的样本重复以上内容,从而使结果更具可信。

1.2.5 统计分析方法

两组儿童VDR 基因多态性分析采用Hardy-Weinberg平衡检验,计量资料用x±s表示,组间比较使用t检验,两组基因型频率分布的比较使用卡方检验。所有数据使用SPSS24.0软件进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组儿童FokⅠ位点基因型分布

两组儿童FokⅠ位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg 定律,说明具有遗传学代表性,见表 1。

3 讨论

氟牙症是由于外界环境中氟进入人体过多,从而引起牙釉质出现白垩、缺损以及着色变化等表现的疾病,近几年来,随着基因多态性的研究不断增多,人们对疾病的发病机制的研究也进入了新的领域,国外学者Vieira[3]等研究发现遗传因素对氟牙症的影响,国内学者黄辉[4]等研究了COLIA2基因多态性在氟牙发生发展中的作用,刘静波[5]等研究发现FokⅠ基因多态性与肺癌有相关关系。国外学者发现FokⅠ基因多态性可以解释白血病的遗传易感性,还有学者认为会影响到白血病细胞的分化[6]。因此氟牙症乃至其他疾病与基因之间的关系得到了学者的关注。

1,25-(OH)2D3能通过维生素D受体介导,发挥多种功能,如控制细胞增殖和分化,维持体内血清磷和钙的稳定,调控免疫应答、调节钙磷代谢维持体内矿物质平衡等。同时维生素D受体的转录效率可以因与1,25-(OH)2D3的结合受到影响。VDR 与多种疾病的发生特别是骨疾病与有相关性, Morriason[7]等通过研究发现维生素D受体基因多态性与骨密度之间有密切的联系,而牙齿的形成与骨骼的形成类似,钙、磷等多种离子参与了其矿化过程,而VDR能够维持机体钙磷平衡,因此本研究探讨维生素D受体FokⅠ基因多态性和氟牙症之间的关系。

研究中,我们获得了关于健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因FokⅠ的分布特点,发现两组儿童FokⅠ多态性分布差异有统计学意义(P<0.05)。因此我们能够推断健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因分布有差异,即与氟牙症之间有关联。进一步分析发现在氟牙症儿童和健康儿童中,FF基因型和ff基因型分布均存在显著差异,Ff基因型不存在显著差异,因此FF基因型和ff基因型和氟牙症的发生有相关性,提示可以通过检测FF基因性和ff基因型来对氟牙症高危人群进行筛选。通过对维生素D受体FokⅠ基因多态性和氟牙症发病之间的关系分析发现,携带FF基因型的儿童发生氟牙症的风险OR值为增高,等位基因中,F基因型的儿童发生氟牙症的风险增高,即F基因型也许是氟牙症的易感基因之一。

通过上述研究,我们可以看出维生素D受体FokⅠ基因与氟牙症之间有相关性,因此可以通过检测FF基因型和ff 基因型来筛选出氟牙症高危人群,这将对于氟牙症的防治发挥重要作用,因此本研究不仅有临床价值,如果能在未来推广使用,也会获得良好的社会效益。

参考文献:

[1] 韩金龙,王龙,祖源,等.维生素 D 受体基因 BsmⅠ、ApaⅠ和 TaqⅠ位点多态性与中国男性骨密度相关性的Meta 分析[J].解放军医学院学报,2015,36(11):1122-1126.

[2] 李媛媛,崔凌凌,李鑫德,等.中国汉族男性原发性痛风与维生素 D 受体基因 rs2228570 多态性的遗传易感性研究[J].中华内分泌代谢杂志,2015,31(4):894-897.

[3] Vieira AP,Hanocock R,Eggertsson H,el a1.Tooth quality in dental fluomsis genetic and environmental factors[J].Calcif Tissue Int,2005,76(1):17—25.

[4] 黄辉,贾新梅,巴月,等.COLlA2基因多态性与儿童氟斑牙关系[J].中国公共卫生,2007,23(4):445-447.

[5] 刘静波,侯燕燕,齐曦明,等.维生素D受体基因多态性与肺腺癌易感性的关系[J].河北医药,2014,36(12):1780-1782.

[6]Garay E,Donelly R,Wang E,Donnelly R,Wang X,et al.Resistance to 1,25D-induced differetiation in human acute myeloidleukemia HL60-40AF cells is associated wih reduced transcriptional activity and nuclear localization of the vitamin D receptor[J].J Cell Physiol,2007,213(3):816-825.

[7] Morrison NA,Qi JC,Tokita A,el a1.Prediction of bone density from vitamin D Receptor alleles [J].Nature,1994,367(6460):284-287.

论文作者:周辰,季佳

论文发表刊物:《健康世界》2018年11期

论文发表时间:2018/8/24

标签:;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  

儿童氟牙症与维生素D受体FokⅠ基因的关系研究论文_周辰,季佳
下载Doc文档

猜你喜欢