【摘要】目的：比较荧光定量PCR检测HBV(乙肝病毒)-DNA与ELISA(酶联免疫吸附法)检测HBsAg(乙肝表面抗原)诊断乙型肝炎的价值。方法：分别纳入198份HBsAg有反应性标本(s/co≥1)，作为A组，105份HBsAg灰区可疑标本(0.8≤s/co＜1)，作为B组，990份HBsAg无反应性标本(s/co＜0.8)，做为C组；对三组标本进行FQ-PCR(荧光定量聚合酶链反应)检测，将A组阴性标本和B、C组阳性标本再进行HBV-M(乙肝病毒标志物检测)5项检测。对比两种方法检测结果。结果：A、B、C三组经FQ-PCR检测HBV-DNA有反应性标本分别为108例（54.55%）、34例（32.38%）、5例（0.51%）。结论：为提高输血安全，应首先采用ELISA法检测HBsAg对样本进行筛查，去除有反应性血液标本后再对无反应性血液标本进行FQ-PCRHBV-DNA核酸检测，最终排除有反应性血液。
【关键词】荧光定量PCR；荧光定量聚合酶链反应；酶联免疫吸附法；乙肝病毒标志物
【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）27-0124-02
乙肝病毒标志物包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 5项，ELISA是常用的筛查方法，但其对检测HBsAg结果仅可反映机体对HBV感染的免疫反应状态，此外因抗原、抗体变异、窗口期等因素影响可能导致检测结果不可靠[1-2]。目前FQ-PCR是检测HBV-DNA的最佳方案，该技术是一种核酸检测技术，该技术应用优势包括完全闭管检测，不需要进行PCR后处理，可连续检测出荧光信号的变化，定量的准确性较高，可较好反应HBV复制情况[3-4]。研究纳入ABC组3项标本，行FQ-PCR检测后的A组阴性、B、C组阳性样本再作HBV-M（乙肝病毒标志物）检测，现将具体报道如下：
1.资料与方法
1.1 一般资料
本单位于2017年1月－2018年1月对10721份无偿献血者采集血浆标本，献血者年龄范围在22～55周岁，其中男57390人、女46669人。
1.2 方法
仪器设备：厦门新创科技有限公司生产的HBsAg试剂；上海科华公司生产的ELISA 试剂、瑞士HAMILTON公司生产的FAME全自动酶分析系统；由专业实验室技术人员进行检测，严格按照试剂盒说明书完成操作，结果判定：有反应性：s/co≥1；无反应性：s/co＜0.8；灰区可疑：0.8 ≤s/co＜1。
HBV-M 5项检测：采用ELISA试剂，实验人员严格按照说明书进行操作，进行分析，结果判定：有反应性：s/co≥1 ；无反应性：s/co＜1。
FQ-PCR检测：采用中山医科大学达安基因股份有限公司生产的HBV-DNA试剂盒；美国 PE-5700 型 PCR扩增仪，实验人员严格按照说明书进行操作，待反应结束后使用电脑自动分析计算HBV-DNA定量结果，以cP/ml表示结果。需注意的是以下情况不参加平均值的统计：求算术平均值的方法计算HBV-DNA平均拷贝数时发现无反应性结果。结果判定：有反应性：≥1000 cP/ml；无反应性：＜1000 cP/ml。
2.结果
A组标本经FQ-PCR检测，HBV-DNA有反应性为108例(54.55%)；无反应性90例(标本A1)。
B组标本检测后HBV-DNA有反应性34例(32.38%)，作为标本B1。
C组标本检测后HBV-DNA有反应性为5例(0.51%)，作为标本C1。分别对标本A1、B1、C1组再进行HBV-M 5项检测，结果见表1-3。
从表2和表3可以看出,FQ-PCR检测为阳性样本，再经ELISA HBsAg检测，为可疑或阴性。
3.讨论
A组标本ELISA检测有反应性经FQ-PCR检测，阳性率仅为54.55%，实际上血液中的HBsAg多为空壳，不含有病毒颗粒，对病毒复制、传染性强弱不能直观反映，而HBV-DNA指标可直接反映HBV复制情况，可直接检测病毒本身，由此可见血站可采用ELISA法结合FQ-PCR检测，表1结果显示90例HBsAg有反应性，大部分患者属于“正常”的HBsAg携带者。表1中模式2、3、4说明ELISA检测结果中无论存在几项有反应性，无完整的病毒颗粒依然会存在，表示机体未出现病毒复制，病毒相对静止，处于无活动状态。出现该现象情况亦可能与HBV-DNA所用引物不匹配有关；此外HBV-DNA检测结果如呈假阴性则可能表示HBV-DNA整合于宿主细胞基因中，该情况下采用FQ-PCR检测方法依然无法检出，表示机体传染性相对较低[5]。
标本B 34例(32.38%)，该结果说明HBsAg“窗口期”可能指部分灰区可疑，采用FQ-PCR检测方法具有高度灵敏性，结果同样验证出血站有必要架设灰区可疑。表2模式1与表3模式1的存在可能说明目前HBsAg检测试剂盒检测后可能出现ayr、ayw等亚型的检测漏检现象，该试剂盒主要针对adr、adw亚型进行检测[6]。FQ-PCR可对病毒本身进行检测，具有高特异性。此外有研究显示HBsAg与HBsAb2者结合后可能出现免疫复合物，易导致血清中虽然存在HBsAg但无法检测到[7]。表2中模式2中的HBsAb是免疫保护性抗体，其中6例对HBV-DNA有反应性，考虑到可能因HBsAg灰区可疑有关，由此我们认为表2模式2、表3模式1可能是HBV隐性感染的恢复期，该阶段机体虽然出现免疫反应，但依然处于HBsAg向HBsAb转化阶段，但该阶段体内依然存在残余病毒，该结果表明低滴度的HBsAg缺少有效的免疫杀伤细胞，依然存在感染风险[8]。表2中的3、4、5、6结果表明在一定条件下HBcAb、HBeAb一类的非保护性抗体依然可发生复制，具有传染性风险。标本3中有反应性5例，结果表明HBV-DNA检测具有灵敏性与特异性。
综上所述，应用ELIS法检测HBsAg，对血液进行筛选去除有反应性血液标本后，再对无反应性血液标本进行HBV-DNA核酸检测，最终排除有反应性血液，提高输血安全。
【参考文献】
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论文作者:周玉航
论文发表刊物:《医药前沿》2019年27期
论文发表时间:2019/11/7
标签：标本论文; 定量论文; 荧光论文; 免疫论文; 乙肝病毒论文; 乙肝论文; 可疑论文; 《医药前沿》2019年27期论文;