李韩平[1]2003年在《应用噬菌体随机肽库展示技术筛选肝癌抗体模拟肽及高活性重组蛋白的构建》文中研究指明肝癌，是恶性程度极高的肿瘤，也是人类最常见、最致命的恶性肿瘤之一。目前治疗仍以手术切除和化疗为主，虽然能得到暂时缓解和生命得以延长，但效果都不是很理想。在药物治疗方面，基于抗体的导向治疗具有毒副作用小、选择性强、效果持久等优点，已有部分基因工程抗体药物进入临床实验。但抗体自身局限性及抗体的来源又使得其使用得到限制。基因工程抗体的诞生为肿瘤的诊断和治疗带来了希望。小分子抗体具有免疫原性低、易于渗透目标组织、毒副作用小、且易与效应分子相连构成新功能的抗体分子如产生双特性Ab及构建免疫毒素等优点，不断开展单链抗体、单域抗体、独立性重链可变区、最小识别单位(MRU)等抗体片段的研究工作。但这些抗体片段与亲本抗体相比，抗原结合活性存在不同程度的下降。因此选择一种行之有效的治疗方案和寻找一种疗效特异的药物迫在眉睫。 采用多肽文库技术从噬菌体肽库中筛选抗体模拟小肽则是一种全新的导向治疗思路。利用噬菌体表面展示技术，特别是其中的肽文库技术和噬菌体表位文库技术已显示出明显的技术优势。通过利用噬菌体肽库展示技术，我们试图从12肽噬菌体文库、环状7肽噬菌体文库寻找一种能与肝癌细胞特异性结合的模拟短肽，为肝癌的免疫治疗提供一些帮助。 一、特异性短肽的筛选 通过噬菌体表面展示随机肽库，以肝癌细胞系为靶分子，进行多轮生物淘选，使噬菌体出现富集，以正常肝细胞系为对照，挑选出阳性克隆进行序列测定，筛选出与肝癌细胞特异结合并具高亲和力的抗体模拟肽。 二、原核表达质粒的构建及蛋白质纯化 本室通过蛋白质工程手段设计超抗原TSST-1的缺失或点突变体，使之失去对MHC-Ⅱ正常组织的结合能力，从而降低了其毒副作用，但保留激活T细胞和刺激细胞因子的产生能力；将筛选的抗体模拟肽与TSST-1突变体基因融合或化学耦联，构建重组表达质粒。表达蛋白进行纯化后，以单链抗体导向的TSST-1为对照，观察多肽导向的TSST-1抑瘤杀伤效果，对多肽与SAg结合物对肝癌进行导向治疗的可行性作出评价。 本研究利用噬菌体表面展示技术，获得了与肝癌细胞特异结合并具高亲和力的抗体模拟肽，并得到了重组表达蛋白，为肝癌进一步的免疫治疗提供了理论依据。
段玲欣[2]2009年在《旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究》文中研究表明为筛选旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因,观察其抗肿瘤效果,以探讨其抗肿瘤机制,本研究首先构建了旋毛虫cDNA表达文库,用抗Sp2/0骨髓瘤细胞的多克隆抗体对文库进行筛选,获得旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因,利用5’-RACE技术进行末端快速扩增获得全长后,将该基因在真核表达载体中表达。应用斑点杂交技术对相关抗原基因进行定位,并进行小鼠抗肿瘤试验。实验结果表明,成功构建了旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库,文库容量为1.9×106pfu/mL,重组率为97.5%,扩增后文库滴度为1.6×109pfu/mL。经过3轮筛选,获得一个旋毛虫肌幼虫相关抗原基因片段,通过5’-RACE扩增该基因全长,测序结果显示TS2全长为569bp,含有一大小为411bp的开放阅读框。将其命名为TS2。登陆NCBI进行Blast比对发现该基因为核糖体蛋白S24基因,与DNA修复、细胞发育调控和细胞分化有关。ELM服务器分析结构域,表明此序列蛋白质含有4个精氨酸二元转移酶切割位点,1个羧基肽酰胺化位点和1个氨基葡聚糖附着位点。核酸疫苗重组质粒pVAX1-TS2转染Hela细胞,PCR和Western blotting检测结果表明目的基因在其中得到正确转录和表达,表达蛋白具有反应原性。应用核酸疫苗重组质粒免疫小鼠进行的体内抗肿瘤试验表明,试验组小鼠产生了特异的细胞免疫应答,CD3+、CD4+T淋巴细胞均进行了有效增殖。试验组和对照组肿瘤体积和重量的统计学分析比较表明,旋毛虫核酸疫苗重组质粒的抑瘤效果明显高于对照组。
参考文献：
[1]. 应用噬菌体随机肽库展示技术筛选肝癌抗体模拟肽及高活性重组蛋白的构建[D]. 李韩平. 陕西师范大学. 2003
[2]. 旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究[D]. 段玲欣. 吉林大学. 2009