【关键词】氧化苦参碱；偏头痛；行为学；
1前言
偏头痛是一种主要以患者单侧或双侧搏动性头痛为特征的原发性头痛，临床上主要使用选择性5-HT受体激动剂曲坦类药物，但是该药物依赖进口，价格较贵，且对存在心血管问题的病人需谨慎使用。氧化苦参碱主要是从我国传统药物苦参的干燥根及其他植物提取的生物碱，药理作用广泛，本实验主要探究氧化苦参碱的镇痛作用。氧化苦参碱在治疗剂量下对中枢神经系统产生抑制作用和保护功能，临床上有使用氧化苦参碱注射液或者配合西药来治疗癌痛的病例[1]。因此本实验通过观察使用氧化苦参碱前后行为学变化和测定血清NO含量来评价氧化苦参碱的镇痛效果。
2材料与方法
2.1实验动物及分组
将健康的30只KM小鼠(SPF级，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，合格证号：SCXK湘2019-0004)随机平均分为六组，每组5只，分别为假模型组、模型对照组、低剂量氧化苦参碱组、中剂量氧化苦参碱组、高剂量氧化苦参碱组和氟桂利嗪（阳性对照组）组。小鼠体重在18～22g。
2.2实验试剂及器材
苦参素胶囊(正大天晴药业集团公司，主要成分氧化苦参碱，每粒0.1g)，盐酸氟桂利嗪胶囊（西安杨森制药公司，主要成分氟桂利嗪，每粒5mg），硝酸甘油注射液（河南润弘制药公司，1ml：5mg），一氧化氮（NO）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所），分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司），TGL-16台式高速冷冻离心机（湖南湘仪仪器开发有限公司）。
2.3实验方法
假模型组和模型对照组腹腔注射生理盐水5天，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别腹腔注射50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg氧化苦参碱5天，阳性对照组灌胃注射4mg/kg氟桂利嗪5天。于最后一次注射30min后，除假模型组在小鼠头颈部皮下注射生理盐水外，其余各组均是头颈部皮下注射10mg/kg硝酸甘油制备偏头痛模型。当小鼠在注射硝酸甘油造模30min后出现双耳发红，前肢多次挠头，爬笼次数增加等焦躁不安的症状是，可判断造模成功。
2.4行为学观察
观察小鼠一般行为，在造模30min后，分别计数各组小鼠在30min内的爬笼次数，挠头次数。
2.5 血清NO指标测定
在观察完行为学表现后，摘眼球取血，用离心管取小鼠眶周静脉血，3000r/min离心15min，取上层血清，之后按照NO测定试剂盒说明书使用分光光度计测定血清NO含量。
2.6数据处理
实验数据以样本均值±标准差表示，并使用SPSS24.0软件进行统计分析，各因素不同水平下进行方差齐性检验，再使用单因素方差分析，事后比较使用LSD-t检验，P＜0.05有统计学意义。
3 结果
结果显示低剂量氧化苦参碱组的平均挠头次数和血清NO含量与模型对照组比较，差异不显著（P＞0.05），然而在平均爬笼次数水平上与之比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。中剂量氧化苦参碱组和高剂量氧化苦参碱组的平均挠头次数和平均爬笼次数显著高于模型对照组（P＜0.01），血清NO含量与之比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。阳性对照组与模型对照组比较，在平均挠头次数，平均爬笼次数和血清NO含量水平上差异都有显著统计学意义（P＜0.01）。
小鼠正常血清NO含量参考值49.96±23.76；*与模型对照组比较P＜0.05；**与模型对照组比较P＜0.01
4 结果讨论
硝酸甘油致偏头痛模型是研究偏头痛病理生理过程最为常用的一种方法，该方法操作简单，复制方便，成本节约，Tassorelli[2]研究发现硝酸甘油模型是以耳红、挠头、爬笼等焦躁型行为症状为特征，根据行为学表现可以评价干预治疗的效果。姜立志[3]临床研究发现正常对照组的血清NO含量比偏头痛患者低很多，且药物治疗后NO含量显著下降，病人症状得到缓解。硝酸甘油进入体内后，释放NO，舒张血管尤其是脑动脉血管，产生搏动性头痛和血管周围神经源性炎症，另外NO作为神经递质参与痛觉在中枢神经系统的传递，与偏头痛的发生发展密切相关[4]。在偏头痛的病理生理过程中存在痛觉过敏，陶然[5]等研究发现在硝酸甘油偏头痛模型中，大量兴奋性氨基酸释放诱导PKC和NMDAR活性的增强，从而激活NO-cGMP通路，导致痛觉过敏。而关于氧化苦参碱的镇痛机制，已有研究表明其与钙离子通道和GABA有关[6]，GABA作为抑制性神经递质，在脑中与兴奋性神经递质处于一种平衡状态，在偏头痛的小鼠中，氧化苦参碱改变了脑中以兴奋性神经递质为主导的状态，其中之一可能就是对NO-cGMP通路的干预。实验过程中高剂量组出现个别小鼠相比其他各组精神不振，中枢神经系统抑制效应过大。但是相应的血清NO含量并不是很低，可能是因为氧化苦参碱产生镇痛的主要靶点不是在NO。但是实验成本有限，无法印证除NO之外物质的表达情况。对于氧化苦参碱是否能用于临床治疗偏头痛，还需要了解相关疼痛因子的表达和大规模临床试验。
参考文献
[1] 袁小笋.复方苦参注射液治疗癌性疼痛50例[J].中国中医药现代远程教育.2015.13(11):41-42.
[2] Cristina Tassorelli.Rosaria Greco.Wang De-chun,et al.Nitroglycerin induces hyperalgesia in rats—a time-coursestudy[J]. Eur J Pharmacol2003,464(2-3):159-162.
[3] 姜立志.吴二兵等.天舒胶囊对偏头痛患者一氧化氮、一氧化氮合酶及血流动力学的影响[J]. 中华中医药杂志.2013.8. 2450-2452.
[4] 刘晓东.牛争平.左乙拉西坦对偏头痛大鼠血浆中降钙素基因相关肽及一氧化氮含量的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志.2015.6:763-766
[5] 陶然.朱正萍.杨晓苏.蛋白激酶Cγ亚型和N-甲基-天门冬氨酸受体1在硝酸甘油致偏头痛大鼠模型发病机制中的作用探讨[J].国际神经病学神经外科学杂志.2018.45(4):341-345
[6] 吕晓强.杨丽.邓扬鸥等.氧化苦参碱的镇痛作用对钙通道和γ-氨基丁酸的影响[J]. 中国中西医结合杂志.2015.5. 603-607.
论文作者:陈腾伟
论文发表刊物:《总装备部医学学报》2019年第10期
论文发表时间:2019/12/10
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