王昱1 甘平(通讯作者)2
（1贵阳医学院 贵州 贵阳 550004；2贵阳医学院附属医院 贵州 贵阳 550004）
【摘要】 目的：观察N-乙酰半胱氨酸（NAC）对高糖致大鼠腹膜间皮细胞(HPMC)烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX-2）及硫氧还蛋白-1（Trx-1）表达的影响，探讨其对高糖所致腹膜间皮细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：将30只健康雄性SD大鼠按随机数字法分为对照组（n=10）：每日一次25ml生理盐水腹腔注射，在接受28d腹腔注射后，改为每日一次5ml生理盐水灌胃，连续灌胃8周。模型组（n=10，HGC）：每日一次25ml 4.25%腹腔透析液腹腔注射，连续注射28d，并于入组后第8、10、12、22、24、26d给予0.6mg/kg剂量的LPS进行腹腔注射，以建立腹膜纤维化模型。于28d后同样改为每日一次5ml生理盐水灌胃，连续灌胃8周。治疗组（n=10，NAC）：在成功建立腹膜纤维化模型后，给予100mg/kg剂量的NAC悬液每日一次灌胃，连续灌胃8周。实验周期12周。后取腹膜组织以免疫组化学检测壁层腹膜间皮细胞NOX-2及Trx-1的表达。结果：对照组NOX-2及Trx-1少量阳性表达，而HGC与NAC组NOX-2及Trx-1阳性表达与对照组相比明显上调，但HGC组显著高于NAC组，三组间比较，差异存在统计学意义（P<0.05）。结论：N-乙酰半胱氨酸可拮抗高糖致大鼠引起的腹膜间皮细胞NOX-2及Trx-1表达，减轻氧化应激损伤，从而延缓腹膜纤维化的发生。
【关键词】N-乙酰半胱氨酸；高糖；腹膜间皮细胞；氧化应激；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶；硫氧还蛋白-1
【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）09-0099-02
腹膜透析是治疗急慢性肾功能衰竭的主要方法。腹膜透析相关性腹膜纤维化可导致腹膜超滤功能丧失，是导致患者退出腹透治疗的重要原因[1]。长期腹透时，高糖腹透液可引起腹膜间皮细胞的严重损伤，最终导致腹膜纤维化的发生[2]。虽然目前认为高糖状态可导致腹膜纤维化的发生，但其发生机制仍未十分明确[3]。为深入探讨持续高血糖状态导致腹膜纤维化的作用机制，本研究应用（临床最经典的）高糖+LPS法建立腹膜透析腹膜纤维化动物模型，探讨NAC是否能显著下调高糖致大鼠腹膜间皮细胞NOX-2及Trx-1的表达，抗氧化应激，使腹膜纤维化减轻。
1.实验材料
1.1 实验动物 随机将30只健康雄性SD级大鼠分为对照组、HGC组及NAC组三组，每组10只，所有入选大鼠均由本溪实验动物中心提供（动物批号:SCXK（辽）-2010-0001），且体重均需在（250±30）g之间。其中，对照组，体重236-263g，平均（251.35±13.21）g；HGC组，体重231～266g，平均（252.61±13.56）g；NAC组，体重233～271g，平均（255.58±15.05）g。三组体重分析，差异无统计意义（P>0.05），具可比性。
1.2 干预方法 对照组大鼠，入组后首先给予每日一次25ml生理盐水腹腔注射，在接受28d腹腔注射后，改为每日一次5ml生理盐水灌胃，连续灌胃8周。HGC组大鼠，入组后首先给予每日一次25ml4.25%腹腔透析液腹腔注射，连续注射28d，并于入组后第8、10、12、22、24、26d给予0.6mg/kg剂量的LPS进行腹腔注射，以建立腹膜纤维化模型。于28d后同样改为每日一次5ml生理盐水灌胃，连续灌胃8周。NAC组大鼠，在成功建立腹膜纤维化模型后，给予100mg/kg剂量的NAC悬液每日一次灌胃，连续灌胃8周。实验周期12周。
1.3 观察指标及方法 大鼠均于入组12周后，进行断头处死，留取腹膜组织作为标本，对NOX-2及Trx-1进行免疫组织化学染色，并于显微镜对其进行观察。所观察指标结果中，以出现深浅不等、形状不规则棕色颗粒为阳性。对比三组NOX-2及Trx-1阳性表达率。
1.4 统计方法 将SPSS 19.0作为统计学分析软件，所得数据均为计数数据，并以百分率进行表示，应用卡方检验进行统计学分析，以P<0.05时作为差异存在统计学意义。
2.结果
对照组腹膜组织中NOX-2及Trx-1阳性表达率最低，其次为NAC组，而HGC组NOX-2及Trx-1阳性表达率最高，三组间比较，差异存在统计学意义（P<0.05）。
表1 NOX-2及Trx-1阳性表达率比较[n(%)]
三组间比较，*P<0.05，差异存在统计学意义；
对照组与HGC组比较，△P<0.05，差异存在统计学意义；
对照组与NAC组比较，▲P<0.05，差异存在统计学意义；
HGC组与NAC组比较，☆P<0.05，差异存在统计学意义。
3.讨论
目前研究显示，腹透所引起的腹膜组织氧化应激是腹膜纤维化的重要机制[4]。而NOX2及Trx-1均为氧化应激损伤的标志物，其中NOX2属还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶家族。NADPH存在于吞噬细胞质膜，可生成活性氧[5]。NOX2为分布最广泛的NADPH，在动脉硬化、肝肾纤维化中均有报道，但尚无研究对其在腹膜纤维化中的表达与作用进行分析[6]。而Trx-1作为维持细胞内蛋白质还原状态的主要的二硫键还原酶，在对抗细胞的氧化应激，在维持细胞的正常生理功能中同样有着重要的作用[1]。NAC是一种含巯基化合物，在细胞内去乙酰化后生成半胱氨酸，提供合成细胞内重要的非酶类抗氧化物质谷胱甘肽的底物，维持细胞内非酶类抗氧化物质谷胱甘肽水平，稳定细胞膜，保护细胞活性。
故本研究将NOX-2及Trx-1作为观察指标对高糖大鼠腹膜组织进行观察，结果显示：对照组NOX-2及Trx-1少量阳性表达，而HGC与NAC组NOX-2及Trx-1阳性表达明显上调，但HGC组显著高于NAC组。可见腹膜纤维化状态下的大鼠，其腹膜间皮细胞内NOX-2及Trx-1的阳性表达明显上调，而NAC能显著下调高糖致大鼠腹膜间皮细胞NOX-2及Trx-1的表达。
综上所述：N-乙酰半胱氨酸可通过抑制NOX-2及Trx-1的表达，抗氧化应激损伤，从而保护腹膜间皮细胞，保护腹膜结构和功能，进一步能抗腹膜纤维化。
【参考文献】
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[6] 冯静，何艳，吴立荣，等.银杏黄酮苷元对兔颈动脉粥样硬化及NOX-2、NOX-4表达的影响[J].中药新药与临床药理，2012，23（3）：274-278.
论文作者:王昱1,甘平(通讯作者)2
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第9期供稿
论文发表时间:2015/7/21
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