（1.辽宁中医药大学 辽宁沈阳 110032；2.辽宁省肿瘤医院 110042）
摘要：目的 探讨榄香烯联合奥沙利铂诱导人肺腺癌A549细胞生长抑制和凋亡的作用。方法 将人肺腺癌A549细胞株进行传代培养，将不同浓度榄香烯以及奥沙利铂作用于细胞株上，MTT法检测A549细胞的增殖抑制率。结果 榄香烯作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是54.8μg/ml、27.2μg/ml，奥沙利铂作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是12.2μg/ml、3.8μg/ml。联合组抑制率明显高于单药组。结论 两者联合在一定浓度范围内呈现出协同的抗肿瘤作用。
关键词：榄香烯；奥沙利铂；肺腺癌；增殖抑制
榄香烯是近年来从温郁金中提取的一种有效成分。它具有广谱抗肿瘤、免疫保护等作用。从中提取的β－榄香烯对多种细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用[1]。本实验研究旨在研究不同浓度的榄香烯联合奥沙利铂作用于处理的 A549 细胞株上，检测细胞的增殖抑制率，以更好的指导临床用药。
1.材料与方法
1.1材料与试剂
肺腺癌细胞株A549由中国医科大学提供；榄香烯乳注射液由大连金港制药有限公司提供；奥沙利铂购自江苏恒瑞制药有限公司；1640 培养基、小牛血清由上海实生细胞生物技术有限公司提供；四甲基偶氮唑盐、二甲基亚砜由美国Sigma公司提供。上述药品均按说明书保存，现用现配。
1.2实验方法
1.2.1细胞培养
将人肺腺癌 A549 细胞放置于1640 培养基（含10%小牛血清、青霉素100 ug/L，庆大霉素100 ug/L），在 37℃、5%CO 2、饱和湿度培养箱中培养，待其生长良好、铺满瓶壁的70%-80%，用胰蛋白酶消化传代培养。
1.2.2细胞增殖抑制实验
取对数生长期的肺癌A549细胞株按5*104个/孔分别接种于96孔板上，每孔加入150 μL的1640培养液。待A549腺癌细胞充分贴壁后，倒出培养液，分别加入不同质量浓度奥沙利铂（1、7、14、28、56、112μg/ml）和榄香烯（1、5、10、40、80、160μg/ml），每个浓度设6个平行孔，继续培养24，48 h。培养结束后每孔加入MTT溶液（5mg/ml）25ul，继续孵育4小时，小心吸弃孔内上清液。加入二甲亚砜200ul/孔，振荡至结晶物充分溶解，在酶联免疫测定仪上选择570nm波长。按下式可计算出各浓度组的抑制率。以上实验各重复3次，求平均值。
细胞抑制率=[对照组吸光值（A）—实验组吸光值（A-）]/对照组吸光值（A）*100%
按以下公式计算Q值并判断两药的联合效应：Q=E（A+B）/[EA+（1—EA）*EB]，其中，E（A+B）为两药合用的抑制率，EA、EB为两药单用的抑制率。Q为0.85—1.15表示两药作用相加，Q〉1.15表示两药作用协同，Q〈0.85表示两药作用相互拮抗。
1.2.3形态学观察
在收集 A549细胞前，将培养瓶放置在倒置显微镜下进行观察；比较各组在经过不同浓度药物处理后细胞形态、大小及贴壁情况。
1.2.4统计学分析
所得数据均用SPSS 22.0软件进行数据处理。以上所有实验均重复3次。所有数据用± s表示、多个样本比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验，检验水准 α = 0.05。P < 0.05表示差异有统计学意义。
2.结果
2.1 榄香烯、奥沙利铂对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用
MTT法检测结果表明，榄香烯及奥沙利铂对A549细胞均有明显的增殖抑制作用，且有一定的浓度和剂量依赖性。在一定范围内，随着药物浓度及作用时间的增加，其抑制率也增加。榄香烯作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是54.8μg/ml、27.2μg/ml。奥沙利铂作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是12.2μg/ml、3.8μg/ml。
2.2榄香烯联合奥沙利铂对A549细胞的增殖抑制作用
将20μg/ml及40μg/ml的榄香烯联合7μg/ml的奥沙利铂作用于A549细胞24h，结果显示联合组抑制率明显高于单药组。但榄香烯和奥沙利铂两单药之间比较无统计学意义。见下表
3.讨论
肺癌是近年来常见的恶性肿瘤，更是位居癌症死因首位，并且其发病率仍在不断上升[2]。肺癌的预后不仅取决于早期发现，更与早期诊断、早期治疗密不可分。I和II期的NSCLC病人有望通过手术切除达到治愈。多数肺癌患者初次确诊时已经为局部晚期，临床治疗很困难[3]。目前，肺癌治疗多以化疗为主。但是大多数常用的化疗药物对肿瘤细胞缺乏特异性，并且受到化疗药物副作用、毒性和抗药性的限制，所以化疗药物在杀死癌细胞的同时，也影响正常组织细胞。其中顺铂在临床应用以来其有着无可比拟的抗癌作用，但其毒副作用也在一定程度上限制了它的使用，因此找到一种疗效高、毒性作用小的治疗方案已成为共识。而奥沙利铂的研制成功就可克服顺铂的不足之处[4]。榄香烯乳注射液也是新研制的抗肿瘤药物，其作用主要表现为激活氧化还原系统、逆转化疗耐药、诱导细胞凋亡等 [5]。部分研究指出其在阻滞细胞生长周期、诱导细胞凋亡、调节抗体免疫功能、对放、化疗的增效减毒方面具有确切的疗效。所以该实验通过两药联合应用，不仅可以提高化疗药物的治疗潜力，还可以减少全身副作用及耐药性。为肺癌的药物治疗提供基础相关依据。
参考文献
[1]高红军，秦海峰.榄香烯治疗非小细胞肺癌的作用机制研究进展[J].现代生物医学进展，2010，10（21）：4149-4151.
[2]周兴芹，仇晓军，赵洪瑜，王燕，季斌. 榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响[J]. 交通医学，2010，24（03）：233-235.
[3]李刚，任宏，王健生，张云锋，张靖，杜宁，孙欣，秦思达. 重组金属蛋白酶组织抑制因子-3与顺铂联合应用对肺癌细胞A549生长抑制与凋亡的影响[J]. 西安交通大学学报（医学版），2017，（03）：422-426
[4]张帆. 奥沙利铂联合榄香烯对人肺癌细胞生长抑制和凋亡的体外研究[D].中国医科大学，2010.
[5]Chengcai Yao，Jie Jiang，Yuanrong Tu，Shefang Ye，Haoxin Du，Yi Zhang.β-elemene reverses the drug resistance of A549/DDP lung cancer cells by activating intracellular redox system，decreasing mitochondrial membrane potential and P-glycoprotein expression，and inducing apoptosis. Thorac Cancer. 2014 Jul；5（4）：304–312.
论文作者:董超1,白静慧2通讯作者
论文发表刊物:《航空军医》2017年28期
论文发表时间:2018/2/6
标签：细胞株论文; 腺癌论文; 细胞论文; 抑制论文; 作用论文; 肺癌论文; 浓度论文; 《航空军医》2017年28期论文;