石峰 王亚东 梁廷明 阜宁县人民医院妇产科 江苏 阜宁 ２２４４００【中图分类号】R６【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０１０２－０１
结肠癌位居消化恶性肿瘤发病率第３位[１],好发于直肠和乙状结肠交界处,男性多发,其病因尚未定论,但是肿瘤相关因子表达水平的异常可能与结肠癌的发生、发展关系密切[２].其中Bmi－１是多疏基因家族的成员之一,其在白血病、肝癌等组织中发现表达水平异常[３].而p２１和p２７均为周期素依赖激酶抑制因子(Cyclin－dependentkinasesinhibitor,CDKI)成员,其功能抑制周期素依赖性激酶(Cyclin－dependentkinases,CDK)的活性,抑制细胞的增殖[４,５].本研究通过联合检测结肠癌中Bmi－１、p２１和p２７表达水平并检测其相关性,探讨上述３种基因在结肠癌的发生和发展中的作用.
１ 资料和方法
１．１ 病例资料２０１０年１月至２０１４年１２月,在我院进行结肠癌手术治疗的患者８０例,其中男５６例,女２４例,均经病理检查确诊,并均在术中留取瘤旁(距肿瘤２cm 以上)结肠上皮组织作为对照.
１．２ 免疫组化方法 均采用４％多聚甲醛固定,常规脱水包埋,切片厚度为５mm,常规脱蜡水化,３％过氧化氢孵育去除内源性过氧化物酶,微波修复抗原,一抗孵育过夜(一抗分别为鼠抗人Bmi－１单克隆抗体、鼠抗人p２１单克隆抗体和鼠抗人p２７单克隆抗体购自美国Abcam 公司),PBS清洗后使用二抗(二抗均为羊抗兔抗体,均购自美国SantaCurz公司)孵育１h,PBS清洗后使用Elite－ABC(英国Vector公司生产)孵育３０min,清洗后使用DAB染色,清洗后苏木素复染３０sec,常规脱水、透明,中性树胶封片. １．３ 结果判断 光镜下观察标本的着色程度.Bmi－１、p２１和p２７蛋白阳性表现均为细胞核和胞浆内出现棕黄色颗粒.随机选择５个高倍视野(４００× ) 计数肿瘤细胞总数和阳性细胞数,先按按阳性细胞百分比将０％、１－２５％、２６－５０％、５１－７５％、７６－１００％ 分别计为０、１、２、３、４分;然后同时根据染色程度的不同进行打分,０分为无色,,１分为浅黄色.２分为棕黄色,３分为棕褐色. 将上述两种计分方法得分相乘,≤４分为－,５－８分为＋ ;９－１２分为＋＋,１３－１６分为＋＋＋.以＋＋和＋＋＋计为阳性表达.
１．４ 统计学分析 采用SPSS１８．０统计学软件进行统计分析处理,率的比较采用c２检验,相关性采用Spearman相关分析,P＜０．０５为差异有统计学意义.
２ 结果
２．１ Bmi－１、p２１和p２７在结肠癌组织和正常组织中的表达水平比较 在结肠癌组织中,Bmi－１阳性率为８１．２５％,明显高于正常组织,差异具有统计学意义(c２＝４４．５５,P＜０．０５);p２１阳性表达率为２８．７５％,明显低于正常组织(c２＝３０．６３,P＜０．０５);p２３ 讨论肿瘤发生、发展时,与恶性肿瘤相关细胞因子的表达水平较正常组织发生明显改变,导致其相关的细胞周期发生明显的异常,引起细胞增殖的异常,导致肿瘤的发生[６].本次研究结果发现,Bmi－１在结肠癌组织中的阳性表达率明显升高,而p２１和p２７蛋白在结肠癌组织的阳性表达率明显降低,Bmi－１在Ducks分期较晚的C、D期和临床分期为III期的患者的阳性表达率明显的高于Ducks分期为A,B期和临床分期为I,II期的患者.而p２１和p２７的阳性表达率情况则正好和Bmi－１相反.研究结果表明,Bmi－１、p２１ 和p２７ 蛋白的阳性表达水平可以作为判断结肠癌预后的重要标志. 我们的研究结果还发现,Bmi－１在结肠癌的阳性表达和p２１以及p２７呈负相关.动物实验表明,Bmi－１敲除小鼠的p２１、p２７在皮肤、骨骼等多个器官中的蛋白表达水平均明显上调[１１－１３],表明Bmi－１基因对p２１、p２７的蛋白表达水平具有一定的调控作用,和我们的研究结构基本一致. 我们的研究结果表明,Bmi－１蛋白在结肠癌组织的阳性表达水平明显增加,p２１和p２７蛋白在结肠癌组织的阳性表达水平明显降低,并且Bmi－１的表达水平和p２１以及p２７呈负相关,表明Bmi－１ 蛋白在结肠癌组织过度表达, 其可能对p２１以及p２７蛋白的负向调控在结肠癌的发生及发展中发挥重要作用,可以作为结肠癌预后判断的参考.
参考文献[１] 于绍珍,尤奎成．结肠癌的诊治进展[J]．医学综述,２００６,１２(１３):７９８－７９９． [２] 黄慧峰,杜芳腾．早期结肠癌诊断的进展[J]．实用临床医学,２００８,９(３):１３４－１３５,１３８． [３] 黄开红,刘建化,李学先,等．Bmi－１基因过度表达与胃癌分化、转移及预后的关系[J]．南方医科大学学报,２００７,２７(７):９７３－９７５,９７９． [４] 李向荣,林星余,肖忠秀,等．p２１ 结构功能与研究新进展[J]．医学综述,２００８,１４(１４):２０９４－２０９７． [５] 李作生,李保庆．p２１和p２７基因多态性与肿瘤的相关性[J]．国际遗传学杂志,２００６,２９(４):３１７－３２０． [６] 梁素美,文欣轩,方细堂．结直肠癌中survivin、caspase－３、_______p２１WAF１的蛋白表达及其意义[J]．肿瘤防治研究,２００７,３４(８):５９６－５９９,６４４． [７] 魏东,邹浩,王琳,等．靶向miRNA 干扰Bmi－１表达对人胆囊癌细胞增殖效应的影响[J]．实用医学杂志,２０１４,(５):６９７－７０２． [８] 王泉,胡卫,陈涛,等．Bmi１在肿瘤干细胞中的研究进展[J]．广东医学, ２０１２,３３(２３):３６６６－３６６８． [９] 张凤艳,张金子,邹树彪,等．胃癌组织中p２１、p２７、p５３和Rb的表达及临床意义[J]．临床与实验病理学杂志,２０１１,２７(６):５８６－５８９． [１０] 陆丽华,冉志华．氧化苦参碱对人结肠癌细胞P２１,P２７,CyclinE１ 及[１１] CDK２表达的影响[J]．世界华人消化杂志,２００７,１５(１２):１３５３－１３５７． 金曙蕾,苗登顺,韩群颖．Bmi－１ 基因敲除导致小鼠皮肤老化[J]．南京医科大学学报(自然科学版),２００９,２８(０３):３１２－３１６． [１２] 王刚,苗登顺．Bmi－１缺失导致小鼠牙和下颌骨发育障碍[J]．口腔生物医学,２０１０,１(０１):１６－２１． [１３] ZhangHW,DingJ,JinJL,etal．Defectsinmesenchymalstemcellself －renewalandcellfatedeterminationleadtoanosteopenicphenotypeinBmi－１nullmice[J]．JBoneMinerRes,２０１０,２５(３):６４０－５２．
论文作者:石峰 王亚东 梁廷明
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/1
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