徐强[1]2001年在《外源性超氧化物歧化酶拮抗6-OHDA诱导大鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的实验研究》文中认为帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种与年龄相关的神经变性疾病，中老年人多见，主要是黑质纹状体区的多巴胺（DA）能神经元的进行性变性和死亡。其主要的发病机制是氧化应激，线粒体功能不全，内源性毒素，神经营养因子保护作用下降，最终引起多巴胺神经元的变性和死亡。由于多巴胺的氧化代谢产物H_2O_2和别的氧反应性物质（ROS）在帕金森病发病过程中所起的重要作用，氧化应激备受关注。6-OHDA诱导的偏侧帕金森病模型鼠是研究帕金森病的常用动物模型，明确注入6-OHDA脑区内的氧化应激状态与神经元凋亡的关系，以及抗氧化物酶的活性是应用抗氧化物酶基因转导治疗帕金森病实验研究的基础和前提。 本实验用健康成年雄性SD大鼠144只，随机分九组，分别为正常组、对照组、损伤组、实验对照组和实验A、B、C、D、E组。损伤组是在大鼠右侧黑质区立体定向注射6-OHDA（10μg/6μl）；对照组是采用相同方法，以同等量的生理盐水代替6-OHDA向同一靶点注射；实验组则是采用相同方法，在注入6-OHDA的前1小时、同时、后1小时、7小时和12小时注入外源性SOD蛋白90IU/6μl于大鼠右侧黑质区，分别为A、B、C、D、E组。实验对照组是生理盐水（6μl）与6-OHDA（10μg/6μl）同时注入大鼠右侧黑质区。术后10天用阿扑吗啡腹腔注射诱导大鼠的旋转行为。应用试剂盒检测动物双侧中脑组织的总抗氧化能力、活性氧、T-SOD和CuZn-SOD活性，以明确中脑内的氧化应激状况。应用抗TH免疫组化染色法和TUNEL法观察中脑黑质部位多巴胺能神经元和凋亡细胞，明确6-OHDA致多巴胺能神经元凋亡和外源性SOD的拮抗作用。 实验结果： 1．年为学改变：术后10天用0.5mg/kg阿扑吗啡腹腔注射检测各组大鼠的旋转行为。实验对照组、损伤大鼠旋转圈数最多，平均转速分别为187.9±19圈/30min，166.7±31圈/30min；实验各组旋转圈数有所减少，转速下降，旋转的周径增大，以实验B组圈数减少最为显着，C、A、D、E组依次递减。正常组、对照组无定向旋转行为。 2.检测各组动物双侧中脑组织的总抗氧化能力变化：正常组左、右中脑组织的总抗氧化能力与其它各组均有显着差异（p＜0.05），右侧以实 验B组最为显着。其余各组间左、右中脑组织的总抗氧化能力和各组自 身左、右侧中脑组织的总抗氧化能力均无明显差异。 3．检测各组动物双侧中脑组织的活性氧变化：实验对照组活性氧升 高最为明显，对照组、损伤组、实验对照组、实验D组和实验E组与正 常组、实验 A组、实验 B组、实验 C组之间有显着性差异h的刃5人其 中实验B组的活性氧下降最为明显。各组自身左、右侧中脑组织的活性 氧以对照组、实验对照组、实验D组差别较为明显（P（．05），其中实验 D组尤甚。 4．检测各组动物双侧中脑组织的总 SOD和 Ct1ZnSOD活性表明，实验 A、B、C组右侧中脑组织的总SOD与对照组相比下降最为明显（P＜0．05）， 以实验B组尤甚。而实验D组、E组中脑组织的总SOD升高，并且，右 侧较左侧高，其它各组均为左侧高于右侧。对照组、实验对照组、实验 A、B、C组右侧中脑组织的CuZnSOD与正常组、实验D组、E组有显着性 差异…”．05人自身左侧中脑组织的 CuZnSOD较右侧高最为明显的是对 照组、损伤组和实验对照组。右侧高于对侧较为明显的是实验D、E组。 5．免疫组化检测表明损伤组、实验对照组右侧黑质区TH样免疫反应 阳性细胞大部分消失，阳性细胞数较其它各组显着减少…州．05人减少 到98．2土7．9％。而实验各组右侧黑质区TH样免疫反应阳性细胞减少程 度下降，减少幅度从大到小依次是B组、C组、A组、D组、E组。对照 组和正常组黑质区可见成簇的TH样兔疫反应阳性细胞。 6．TUNEL法显示模型组大鼠中脑黑质致密部（SNC）有大量染色阳性 细胞，呈棕黑色，不规则形，可见细胞裂解的凋亡小体。而处理组右侧 黑质区染色阳性细胞数有所减少，减少幅度依次是I3组、C组、A组。D 组、E组。对照组和正常组未见明显的染色阳性细胞。 通过本实验，明确了60｝JDA损毁的偏侧SD大鼠中脑区的总抗氧化 能力、活性氧、SOD的活性变化情况、以及外源性SOD对氧化能力的影 响和抬抗细胞凋亡作用，以及外源性SOD桔抗作用的时相性关系。研究 发现6－OI们A注入黑质区后，抗氧化能力、活性氧和 SOD活性都有所升高， 应用外源性SOD后提高了注药区的SOD活力。说明在6－0llDA致偏侧旋转 大鼠多巴胺能神经元凋亡的过程中，氧化应激起着一定的作用，证实了 神经毒素致多巴胺能神经元的损伤机理与帕金森病病人的发病机制之 3间，有一致的氧化应激，而外源性SOD的介入，增强了对活性氧的灭活能力，一定程度地桔抗6－OHDA引起的氧化应激，削弱了个OHDA的神经毒作用，提高了多巴胺能神经元的存活率，改善了大鼠的旋转行为。本实验为进一步以氧化应激为突破点治疗帕金森病提
张丹[2]2006年在《长苞凹舌兰有效成分Dactylorhin B和合成的新型化合物FLZ抗神经退行性病变（阿尔茨海默氏病，帕金森氏病）的作用及作用机制研究》文中研究说明阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease，AD)是老年人常见的一种慢性进行性神经退化疾病，是以进行性痴呆为特征的大脑退行性变性疾病，严重影响患者的认知功能、记忆功能、生活能力和情感人格等，由于发病人数多，涉及范围广，故老年痴呆成为老年医学中急需解决、也是最棘手的问题之一，引起人们越来越多的重视。积极研究老年性痴呆的发病机制，开发防治老年性痴呆的药物是当今药理学领域的重要课题之一。目前已有一些针对老年性痴呆治疗的药物在国内外上市，对轻度痴呆患者，这些药物能在一定程度上改善痴呆症状或延缓痴呆进展；但是对于中重度患者来说，这些药物的效果并不明显。由于老年性痴呆病因迄今不明，所以开发具有真正意义上的有效预防和治疗药物任重而道远。 帕金森氏病(Parkinson’s disease，PD)又称震颤麻痹，是由锥体外系功能障碍引起的一种慢性神经进行性神经系统疾病。其主要临床症状是肌肉震颤、僵直、运动困难、身体姿势和运动平衡失调等。PD的病理特征是患者黑质致密体部位的多巴胺神经元变性，纹状体内多巴胺能神经中递质含量显着减少，导致黑质纹状体多巴胺神经功能低下而胆碱能神经功能相对占优势，从而产生运动障碍。目前已有的抗PD药物只起到了改善症状的作用，不能延缓疾病的进程，且长期应用常有副作用，因而临床急需疗效好的治疗PD的新药。最近一些学者提出用神经元保护剂治疗PD的新概念，国外一些实验室已经开始研发这类药物。 长苞凹舌兰是一种传统藏药，具有补益气血、安神增智等功效，CE是从其块茎中提取得到的有效部位，Dactylorhin B是CE中的一个活性单体化合物。本室以前的试验结果表明，CE和Dactylorhin B对东莨菪碱、环己酰亚胺、酒精等造成的动物痴呆都有很好的拮抗作用。本研究的一部分内容是在多种痴呆动物模型上进一步评价CE和Dactylorhin B的药理作用并对其作用机制进行探讨。 FLZ是对从番荔枝叶中分离到的活性成分进行化学修饰而成的酰胺类新化合物，含有多个酚羟基。本实验室以前的研究证实，它具有很强的抗氧化作用和
谭佳慧[3]2014年在《音乐电针头穴透刺对帕金森模型大鼠脑内黑质Ca~(2+)_Mg~(2+)-ATPase活性及多巴胺神经元凋亡影响的实验研究》文中研究表明目的:通过研究音乐电针头穴透刺对PD模型大鼠脑内黑质Ca2+-Mg2+-ATPase活性及多巴胺神经元凋亡的影响，探讨针刺在治疗PD的过程中保护受损神经元的作用机制。方法:1.以6-羟基多巴胺（6-OHDA）右侧纹状体双靶点注射法制作帕金森大鼠旋转模型。2.将SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、美多芭组、音乐电针组，共5组。音乐电针组沿皮百会穴透刺太阳穴后连接电针。美多芭组用多巴丝肼片灌胃。3.28天后将各组大鼠麻醉后各样本取材，采用4%多聚甲醛（PA）脑组织灌流固定法，将其分离并保存黑质。①采用考马斯亮兰法测定组织蛋白量。②采用分光光度法测定大鼠脑内黑质Ca2+-Mg2+-ATPase活性。③采用流式细胞术检测大鼠脑内黑质多巴胺神经元凋亡率。④采用原位末端标记法检测细胞凋亡水平。研究所得数据使用SPSS18.0软件进行统计分析。结果:音乐电针组及美多芭组大鼠脑内黑质Ca2+-Mg2+-ATPase的活性均较模型组增高，差异非常显着(P<0.01)；音乐电针组及美多芭组大鼠脑内黑质多巴胺能神经元凋亡水平均较模型组降低，有差异(P<0.05)；模型组较空白组显着增高(P<0.01)；美多芭组与音乐电针组比较无显着性差异(P>0.05)；空白组与假手术组比较无显着性差异（P>0.05）；假手术组与美多芭组、音乐电针组比较无显着性差异（P>0.05）。结论:1.音乐电针与美多芭对帕金森模型大鼠均有治疗作用，且音乐电针疗效接近于美多芭；2.音乐电针针刺治疗时可使异常下降的Ca2+-Mg2+-ATPase活性上调；3.音乐电针对帕金森模型大鼠黑质多巴胺能神经元具有保护作用。
李晓梅[4]2007年在《帕金森病防治方药的文献研究和定颤饮对帕金森病防治机理的探讨》文中指出帕金森病(Parkinson's diseaise)是影响中老年人身体健康的主要神经退行性疾病，其病因及发病机制仍不清楚。祖国医学对该病认识较为久远，大量防治经验散在于颤振、振掉、震颤、肝风等相关文献中．因左旋多巴治疗存在严重的副作用，人们普遍看重PD的神经保护性治疗。纵观多年的临床实践证明中药治疗PD的效果是确切的，不仅能有效拮抗和治疗西药所引起的毒副反应，并具有治疗原发病和并发症的双重作用。但目前对中药治疗PD的机理研究则相对较少，中药复方“定颤饮”在前期临床治疗中取得了较好的疗效，本课题欲从动物实验角度探讨“定颤饮”对原发性PD的保护与治疗机理，以期更好地服务于临床。本研究采用除草剂“百草枯”(PQ)腹腔注射C57BL／6J小鼠制作PD模型，利用行为学检测、生化检测、免疫组化等方法，在抗氧化、抗凋亡等方面对“定颤饮”防治PD的机理进行了系统研究。旨在为中药复方“定颤饮”防冶PD提供实验数据，为PD治疗提供新思路。研究分为如下几部分：第一部分帕金森病防治方药的中医文献研究运用文献研究和统计学分析相结合的方法，对古代中医防治颤证的相关文献进行系统研究，同时对1990年以来十几年间中医药防治颤证的现代文献进行系统研究，从古代文献相关病名、病因病机、防治方药几方面探寻颤证辨证论治的发展规律及其脉络。古今文献进行对比分析研究，以明辨其异同。分别建立古今颤证防治方药数据库，运用统计学方法，从方药角度出发，分析研究古代及现代两个时期的用药特色，并对古今防治颤证之高频药物进行分析研究和整理，分别析出了古今防治颤证的高频药物，从中组合出防治颤证的基本方药。通过上述系统分析方药统计结果，结合文献研究和相关中医药理论，提出了防治颤证的基本思路：益气养血、培补脾肾、清热熄风、涤痰化瘀是防治颤证的基本方法；权衡标本，治分先后是防治颤证的基本原则；固源培本，缓图其功是防治颤证的主导思想。第二部分动物实验研究实验动物：本实验采用健康雄性C57BL／6J小鼠，7～9周龄，体质量18～22g，a级。购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号为SCXX(沪)2003-0003。实验动物在本校清洁级安静动物饲养室喂养，每天保持12小时明暗环境，自由饮水取食5天，以保持体内单胺类神经递质的稳定。实验室温度18℃-21℃，相对湿度45％-55％。动物分组：阴性对照组(NS组)：每天上午给予C57BL／6J小鼠生理盐水0.5ml／20g体重灌胃，连续14天，于第15天小鼠灌胃后1小时给予生理盐水腹腔注射，剂量10mg／Kg，隔天一次，共4次。模型组(M)：每天上午给予C57BL／6J小鼠生理盐水0.5ml／20g体重灌胃，连续14天，第15天小鼠灌胃后1小时给予PQ腹腔注射，剂量10mg／Kg，隔天一次，共4次。定颤饮预防给药组：每天上午8：00给予C57BL／6J小鼠不同浓度的定颤饮0.5ml／20g体重灌胃，连续两周，第15天小鼠灌胃后1小时给予PQ腹腔注射，剂量10mg／Kg，隔天一次，共4次。实验方法：本实验中，对造模成功的PD小鼠首先行自主活动能力和平衡功能检测。部分小鼠分离血清、双侧黑质进行GSH、MDA、SOD检测。其余部分小鼠用4％多聚甲醛进行全身灌注，观察黑质致密部TH、caspase-3阳性神经元的表达。结论：①中药复方定颤饮可减轻PD小鼠注射PQ后的症状，改善小鼠的自主活动能力和平衡协调功能。②小鼠黑质GSH浓度有所升高，而SOD、MDA浓度下降；而血清GSH、SOD、MDA水平却无特异性改变。③中药复方定颤饮可有效增加PD小鼠黑质TH免疫反应阳性神经元面积及平均密度，有效抑制caspase-3阳性神经元的表达。研究总结帕金森病是临床常见病，古今中医文献积累了较多关于本病成因证治的论述，但一直缺少系统的研究和整理。本次研究从历史发展和现代医学动物实验的角度，运用文献学和统计学等相关方法进行了较为系统的整理和研究，综合起来，本次研究的主要成果及结论如下。1．运用文献学方法，系统收集整理了大略相当于现今帕金森病的相关文献资料，分析研究了本病的病名沿革、病因病机、防治方药，从整体上把握了该病的证治发展规律，为今后的研究奠定了理论和文献学基础。2．运用统计学方法，系统整理研究古代、现代两个时期临床医家遣方用药的总体规律及其特点，通过分析统计结果，结合文献研究，基本理清了帕金森病防治方药的发展脉络及其演变规律并．分别建立了古今防治颤证方药数据库，分析古今防治颤证的高频药物，从中得出了防治本病的基本药物组合。3．通过对古今防治颤证文献的系统分析研究，提出了防治帕金森病的基本思路，即：益气养血、培补脾肾、清热熄风、涤痰化瘀是PD基本方法；权衡标本，治分先后是防治PD的基本原则；固源培本，缓图其功是防治PD的主导思想。4．借鉴现代医学研究手段，从动物实验的角度探讨临床行之有效的中药复方定颤饮防治PD的机理。认为定颤饮能改善PD模型小鼠的行为能力和平衡功能，有效增加PD模型小鼠黑质致密部TH阳性神经元的表达，升高GSH浓度，降低MDA浓度和SOD活力。进一步证明PQ导致的PD发病过程中，抗自由基酶活力下降，脂质过氧化反应增强。提示定颤饮可明显调节PD黑质部位抗氧化应激的酶系统，增加抵抗自由基损伤的能力，有效减少MDA的生成。5．黑质多巴胺能神经元凋亡的细胞内部调控是一个极其复杂的过程，caspase-3充当了重要角色，中药复方定颤饮可有效抑制帕金森病模型小鼠黑质神经元细胞的caspase-3表达，从根本上阻止黑质多巴胺能神经元的细胞凋亡。6．本实验中我们选择给予C57BL／6J小鼠腹腔注射PQ(10 mg／kg体重)隔天一次模拟临床PD患者，证明该模型是成功的。该模型的可能作用机理是：在PD模型中，脑组织中因PQ的作用而导致抗氧化能力降低，自由基积累，攻击生物膜中多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化反应，产生高水平的脂质过氧化物，参与PD的发病。
参考文献：
[1]. 外源性超氧化物歧化酶拮抗6-OHDA诱导大鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的实验研究[D]. 徐强. 第一军医大学. 2001
[2]. 长苞凹舌兰有效成分Dactylorhin B和合成的新型化合物FLZ抗神经退行性病变（阿尔茨海默氏病，帕金森氏病）的作用及作用机制研究[D]. 张丹. 中国协和医科大学. 2006
[3]. 音乐电针头穴透刺对帕金森模型大鼠脑内黑质Ca~(2+)_Mg~(2+)-ATPase活性及多巴胺神经元凋亡影响的实验研究[D]. 谭佳慧. 黑龙江省中医药科学院. 2014
[4]. 帕金森病防治方药的文献研究和定颤饮对帕金森病防治机理的探讨[D]. 李晓梅. 南京中医药大学. 2007