（1.第四军医大学唐都医院药剂科 陕西 西安 710038）
（2.第四军医大学唐都医院儿科 陕西 西安 710038）
【摘 要】目的：探讨地牯牛外用对烫伤大鼠模型血清VEGF表达的影响。方法：大鼠背部皮肤用100℃ 水蒸气持续10s造成烫伤模型；观察地牯牛外敷对烫伤大鼠创伤部位修复情况及相应时间内血清血管内皮生长因子（VEGF）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达。结果：模型建立成功，伤后21天，地牯牛组创面愈合明显优于其他组，HE染色结果显示地牯牛组组织形态学变化显著，可提高SOD活性，降低MDA水平；血清VEGF的表达符合其他相同时间内创面愈合状态。结论：地牯牛外用对大鼠烫伤模型有显著的治疗效果。
【关键词】地牯牛；烫伤；VEGF；SOD；MDA；大鼠
【中图分类号】R644 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0849-02
Effect of antlion on rat scald model
Guo shuyun1 Zhang wei2 Zhang wenjuan1 Qi zhihua1
( 1.Department of pharmaceutics, 2.Department of pediatrics ,Tangdu hospital, Fourth Military Medical Unversity of PLA,Xi’an ,Shanxi, china 710038)
【Abstract】Objective: To investigate the effect of antlion on rat scald model. Methods By keeping the dorsum skin of rat in 100℃ water vapor for 10 seconds to establish the rat scald model. Observing the effect of antlion on scald area and pathological changes. Results: The scald model of rat were totally successfully established; antlion can increase serum SOD activity in rat, while decrease MDA in rat with scald model. Conclusion The antlion in external application has positive effect on curing the local skin of rat scald model.
【KEY WORDS】antlion; scald; VEGF; IL; TNF; rat
血管生成是创伤愈合过程中的重要一环，新生血管的形成可为创面的修复提供充足的氧分。血管内皮生长因子 (VEGF )是血管生成的重要介质，它能够促进微血管通透性，促进血管内皮细胞的分裂与增殖和新血管生成。临床应用资料显示，地牯牛对创伤性皮肤修复有很好的疗效。地牯牛入药在我国由来已久，民间使用普遍。有资料显示其具有清热解毒、消肿散结等功效[1]。临床应用资料中，地牯牛对褥疮有明显疗效，以肉芽组织完全生长，创面完全愈合为指标，愈合率达90%，愈合时间也明显缩短[2]。地牯牛醇提物对实验动物有明显的镇痛作用，延长痛域及减少扭体次数。减少鸡蛋清诱发的足肿胀[3]。本实验通过建立大鼠烫伤模型，以麻油为阴性对照、表皮生长因子为阳性对照药，观察大鼠血中血管内皮生长因子（VEGF）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达，烫伤创面变化、组织形态学改变，研究地牯牛促进大鼠创面皮肤修复的作用机制，为其临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1主要试剂与仪器
地牯牛（经我院中医科郭瑞林教授鉴定），金因肽（20131206），麻油（上海太太乐食品有限公司），血管内皮生长因子（VEGF）试剂盒（欣博盛生物科技有限公司）；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成）；MK3型酶标仪（芬兰 Thermo公司）。
1.2 模型制备与分组 SD大鼠由第四军医大学动物实验中心提供（许可证号：SCXK-（军）2012-0007）共60只，雌雄不限，体质量200±10 g，适应环境饲养一周，背部用电动脱毛器脱毛，取约2厘米厚度泡沫板一块，上挖面积2*2cm2 洞两个，置于装有沸水的烧杯上方，烧杯下方置电加热套持续加热。抓住大鼠头尾部，背部紧贴泡沫板挖洞处10秒，造成大鼠背部III度烫伤创面（ 经组织病理学切片证实），伤后即刻腹腔注射生理盐水抗休克。
2 方法
2.1 分组及造模
观察创面大体情况。将上述烫伤大鼠随机分组，分为地牯牛治疗组，阳性药物治疗组（金因肽），基质对照组（麻油），烫伤组，空白组每组12只，分别涂抹治疗药物。于造模后24h，48h、1wk、2wk、3wk分别取血，并取皮肤组织标本，用4%甲醛固定，石蜡包埋做病理学切片。
2.2 给药
造模后，各治疗组大鼠立即连续涂敷相应药物，治疗组（地牯牛药粉加麻油调糊状1日/1次），阳性药物对照组（金因肽1日/1次），基质对照组（麻油涂抹1日/1次），烫伤组（不给药物治疗），空白组（正常无烫伤大鼠）。
检测指标及方法
2.2.1 创面大体观察：伤后24h，48h、1wk、2wk、3wk观察创面大体变化，记录创面愈合时间。观察不同组间大鼠造模后24h，48h、1wk、2wk、3wk创面愈合时间，感染及创面结痂情况。
2.2.2 造模后24h，48h、1wk、2wk、3wk ，于不同时间点取动物血清检测VEGF、SOD、MDA观察结果。
2.2.3 创面组织形态学观察造模后于不同时间点24h，48h、1wk、2wk、3wk，取创伤面皮肤标本置于10%甲醛中固定24h，蒸馏水漂洗，梯度乙醇脱水后常规石蜡包埋切片行HE染色后进行组织形态学观察。
2.2.4 统计学处理：数据以 ±S表示，采用SPSS 13.0 统计软件进行单因素方差分析，P<0.05 为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 创面大体观察：烫伤后，各组大鼠创面红肿突出，与周围正常皮肤区别明显，无渗出。伤后一周，烫伤部位开始结痂。地牯牛组与阳性对照药组在烫伤后3天左右开始结痂，21天左右伤口基本愈合，创面处留轻微愈合伤。
3.2 形态学及病理学观察
伤后随着时间推移，地牯牛组大鼠的创面愈合明显。烫伤后24h，48hVEGF水平明显高于阳性对照药组（P<0.05）, 对照组和治疗组的MD A含量及 SOD活性差异显著，有统计学意义( P< 0.05) ；同时期病理组织切片显示与其他检测结果相符。
4 讨论
实验中对烫伤大鼠血清中VEGF的表达进行了观察。 VEGF是烫伤愈合过程中的关键。是一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可促进新生血管生成，增加血管通透性和促进单核细胞游走等功能[4][5]。本次实验中VEGF的表达在地牯牛组与阳性药物对照组各时间点差异显著，地牯牛组VEGF血清水平均高于阳性对照药物组。两组间随时间变化趋势走向大体相同，随着愈合时间的增加VEGF的表达呈下降趋势，变化规律明显与大鼠创伤愈合的进程呈高度一致关系。
本研究表明，地牯牛对烫伤大鼠血清VEGF表达以及血清MDA、SOD含量等均有不同程度的影响，可提高SOD活性，降低MDA含量。MDA是脂质过氧化反应的产物，可间接表明烫伤大鼠体内抗氧化系统异常，由于过量烫伤诱导氧化应激反应，氧化系统和抗氧化系统失衡，机体不能及时清除过量自由基，而自由基生成过程中产生过多脂质过氧化产物，又会引起生物大分子结构和功能的改变[6]。提示地牯牛对烫伤的治疗作用可能与清除大鼠体内自由基有关，并能促进血管内皮生长，从而起到修复创伤的作用。本次实验为地牯牛治疗烫伤提供了新的实验依据，为进一步加深对地牯牛的临床研究提供理论支持。
参考文献：
[1]中国药用动物志协作组 中国药用动物志。天津：天津科技出版社
[2]彭汶铎 唐孝礼 许实波 蚁狮提取物的药理作用 中药材1998 21（3）149-150
[3]杨志芬 植秋蝉 关素芳 余培南 复方地牯牛散治疗褥疮的临床护理研究 中国实用医药 2008 27（3）175-176
[4]贾美美 李玉桑 裴兰洁 刘敏 李小军 唐和斌 三黄生肤油对兔III度烫伤创面的作用 中华烧伤杂志2013 29（1）50-54
[5]Carvalho JF, Blank M, Shoenfeld Y. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in autoimmune diseases [J]. J Clin Immunol, 2007,27(3): 246-256
[6]斯琴 布日额 苦瓜提取物影响II型糖尿病 时珍国医国药 2010 21（8）：小鼠血清SOD、MDA的Meta分析 中医药信息 2015 1:17-20
基金项目：
国家自然科学基金（81102836）
作者简介：
郭淑云（1977-），女，硕士，研究方向：临床药学。
论文作者:郭淑云1,张薇2,张文娟1,戚志华1
论文发表刊物:《河南中医》2015年8月供稿
论文发表时间:2015/11/23
标签：牯牛论文; 烫伤论文; 创面论文; 大鼠论文; 血管论文; 血清论文; 内皮论文; 《河南中医》2015年8月供稿论文;