湖南省湘潭市中心医院（南院区）检验科 411101
【摘 要】目的：分析多重耐药铜绿假胞菌抗药基因检测及对常用消毒剂的抗药水平。方法：选取我院2013年1月～2015年12月提取的145株多重耐药铜绿假胞菌作为研究对象，采用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）对其抗药基因进行检测，随后进行悬液定量杀菌试验，分析多重耐药铜绿假胞菌对常用消毒剂的抗药水平。结果：145株多重耐药铜绿假胞菌中消毒剂-磺胺复合基因阳性130株，阳性率89.7%；三氯异氰尿酸、聚维酮碘、戊二醛中高浓度下杀菌率均位于较高水平。结论：多重耐药铜绿假胞菌抗药基因以消毒剂-磺胺复合基因为主，规范使用消毒剂能够显著提高多重耐药铜绿假胞菌杀灭率，应引起临床高度关注。
【关键词】多重耐药铜绿假胞菌；消毒剂-磺胺复合基因；消毒剂；抗药水平
铜绿假胞菌（P.Aeruginosa）在自然界之中分布范围十分广泛，并且在人体皮肤、呼吸道以及肠道中均可被检出[1]。近些年来，随着临床中抗菌药物的滥用，铜绿假胞菌耐药菌株不断涌现，并且呈现出了多种耐药性特征。此外，由于卫生医疗机构中消毒剂的广泛使用，使得多重耐药铜绿假胞菌同样对其产生了一定的抗药性，一旦消毒失败，则需要面对较高的医院感染风险系数。鉴于此，本次研究围绕多重耐药铜绿假胞菌抗药基因检测及对常用消毒剂的抗药水平展开深入分析，现将结果报道如下：
1 资料与方法
1.1一般资料
选取我院2013年1月～2015年12月提取的145株多重耐药铜绿假胞菌作为研究对象，其中男性88例、女性57例；年龄35岁～55岁，平均年龄（40.5±1.0）岁。纳入标准：①经临床检验均为铜绿假胞菌；②对临床中左氟沙星、头孢哌酮、哌拉西林、头孢他啶、庆大霉素、美洛培南等药物均具有不同程度耐药性。排除标准：①同一患者、同一部位菌株；②非多重耐药铜绿假胞菌。
1.2方法
1.2.1多重耐药铜绿假胞菌抗药基因检测方法
采用聚合酶链式反应对多重耐药铜绿假胞菌抗药基因进行检测，仪器为德国耶拿公司生产的EasyCycler 96PCR仪，引物为5′-TAG CGA GGG CTT TAC TAA GC-3′，上游引物（5μmmol/L）5μL、下游引物（5μmmol/L）5μL，向其中加入无菌蒸馏水混匀后将混合液剂量调整至50μL。随后在95℃下变性300s，55℃变性25s、退火20s，72℃下延伸30s，一共进行35个循环。将生成的产物在2%凝胶糖凝胶下电泳，溴化乙锭（Ethidium bromide，EB）染色，紫外线灯下观察检测结果[2]。
1.2.2悬液定量杀菌试验
选取目前临床较为常用的三氯异氰尿酸、聚维酮碘、戊二醛作为消毒液代表，三氯异氰尿酸为广州碧毅水处理设备有限公司生产，聚维酮碘为重庆同心制药有限公司生产，二醛为山东科宇水处理有限公司生产，中和剂购自百博生物技术有限责任公司。将预先培育24h的纯菌落采用磷酸缓冲液进行制备，浓度为1×108cfu后备用。依据三氯异氰尿酸、聚维酮碘、戊二醛有效浓度分别采用无菌硬水将其按照各自浓度配比。杀菌试验严格按照《消毒与灭菌效果的评价方法与标准（GB 15981-1995）》要求进行[3]。
2 结果
2.1多重耐药铜绿假胞菌抗药基因检测结果
145株多重耐药铜绿假胞菌中消毒剂-磺胺复合基因阳性130株，阳性率89.7%，阴性15株，阴性率10.3%。
2.2多重耐药铜绿假胞菌对常用消毒剂的抗药水平
三氯异氰尿酸、聚维酮碘、戊二醛中高浓度下杀菌率均位于较高水平，详见表1所示。
3 讨论
多重耐药铜绿假胞菌是目前临床中最为常见的一种条件致病菌，属于非发酵革兰氏阴性杆菌（Non fermenting gram negative bacilli），并且为专性需氧菌，其生长温度范围一般在25℃～42℃之间，最适宜生长、增殖的温度为25℃～30℃，但是在4℃环境中不再生长[4]。因该病菌存活温度区间与人类生活环境较为类似，目前已经成为院内感染的重要病原菌之一。当多重耐药铜绿假胞菌侵入到代谢性疾病、血液病、恶性肿瘤患者体内后将会诱发一系列并发症，诸如创口感染、褥疮、脓肿等，同时由其所引发的感染病灶能够随着患者血液循环而血行散播，发生菌血症和败血症，致使患者死亡[5]。因而降低多重耐药铜绿假胞菌在医院内的感染爆发率成为当前临床工作内容的重中之重。
本次研究通过聚合酶链式反应对多重耐药铜绿假胞菌抗药基因进行检测后发现，145株多重耐药铜绿假胞菌中消毒剂-磺胺复合基因阳性130株，阳性率89.7%，阴性15株，阴性率10.3%。由该结果可知，消毒剂-磺胺复合基因在医院感染中占有举足轻重的地位，并且随着抗菌类药物的滥用，多重耐药铜绿假胞菌抗药基因已经家族已经有10中表达类型，并且仍然呈现出增多的态势。此外通过本次研究同样证实，多重耐药铜绿假胞菌抗药基因对于磺胺类药物具有较高的耐药性，因而在临床中采取磺胺类药物并不能够取得理想的杀菌效果。在多重耐药铜绿假胞菌对常用消毒剂的抗药水平的研究中则证实，三氯异氰尿酸250mg/L、500mg/L作用1min时杀菌率在99.80%以上，而125mg/L仅为99.65%～100%。聚维酮碘250mg/L、500mg/L作用1min时杀菌率均为100%，而在125mg/L浓度下则为99.90%～100%。戊二醛在500mg/L作用1min时杀菌率为100%，而250mg/L则仅为65.50%～99.70%。由上述研究结果提示，多重耐药铜绿假胞菌对于当前医院常用的三种消毒剂低浓度均具有较高的抗药水平，其杀菌效果并不是很理想，提示应警惕多重耐药铜绿假胞菌院内感染几率的爆发。而中高浓度时则具有较为理想的杀菌效果。因而通过此次研究一方面丰富了当前关于该课题的研究体系内容，另一方面则为医院合理选择消毒剂产品提供了科学依据，无论是对于患者还是院内感染控制工作均具有重要意义。
综上所述，多重耐药铜绿假胞菌抗药基因以消毒剂-磺胺复合基因为主，规范使用消毒剂能够显著提高多重耐药铜绿假胞菌杀灭率，应引起临床高度关注。
参考文献：
[1]栾耀芳，李稳，王婧男，等.耐药性鲍曼不动杆菌的抗药基因检测及其对消毒剂的抗性研究[J].中国消毒学杂志，2014，10（05）：456-458.
[2]栾耀芳，王冠，王婧男，等.多耐药铜绿假单胞菌抗药基因检测及对常用消毒剂的抗性分析[J].检验医学与临床，2014，15（16）：2207-2209.
[3]刘晓杰，王艳秋，孙利群，等.鲍曼不动杆菌抗药基因检测与消毒剂抗性研究[J].中国消毒学杂志，2014，10（11）：1167-1168.
[4]陈菁，战榕，李宏，等.多重耐药鲍曼不动杆菌的耐消毒剂状况及qacE△1基因调查[J].中国卫生检验杂志，2015，10（03）：431-434.
[5]曾丽，曾文，邓文喻，等.耐亚胺培南铜绿假胞菌耐药性分析及耐消毒剂基因检测[J].国际检验医学杂志，2012，11（15）：1795-1797.
论文作者:余艺军
论文发表刊物:《航空军医》2016年2期
论文发表时间:2016/5/23
标签：铜绿论文; 抗药论文; 消毒剂论文; 胞菌论文; 基因论文; 磺胺论文; 耐药性论文; 《航空军医》2016年2期论文;