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【摘要】 目的：分析高效液相色谱（HPLC）法在果蔬多种防腐剂测定中的应用效果。方法：利用HPLC法测定果蔬中防腐剂，0～7.5min波长=275nm，7.5～28.0min时波长=230nm，流动相选择磷酸盐缓冲溶液(A)（pH=6.8）-（B）提取溶剂选择乙醚。结果：8批果蔬中3批水果检出桂醛，没有检出其他防腐剂。结论：HPLC法用于果蔬防腐剂检测中能够保证结果的准确性以及灵敏性，适用性广。
【关键词】HPLC法；果蔬；防腐剂测定
【中图分类号】R155 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）19-0335-02
防腐剂能够有效抑霉，防治果蔬中的青霉病、绿霉病等，虽然防腐剂防腐保鲜效果明显，但是使用量过大，可能对人们生命造成威胁[1]。HPLC法是测定果蔬防腐剂的常用方法，本文具体分析了HPLC法测定果蔬8种防腐剂的方法。
1.材料和方法
1.1 仪器
美国Waters 1525型高效液相色谱仪，配备2996型二极管阵列检测器；湖南凯达TGL-16M型低温高速离心机；江苏康健XH-D型涡旋混匀器；上海东玺RE-52C型旋转蒸发仪。
1.2 试剂与样品
十二烷基磺酸钠、氯化钠、丙酮、磷酸二氢钠、氢氧化钠、乙酸乙酯、磷酸氢二钠、磷酸（分析纯）；选择超纯水作为实验用水；乙醚、甲醇（色谱纯，Fisher Scientific，美国）；来自国家标准物质中心的防腐剂：多菌灵、2,4-二氯苯氧乙酸、联苯、乙萘酚、邻苯基苯酚、抑霉唑、噻苯咪唑、桂醛。随机从市场中选择若干蔬菜和水果作为实验样品。
1.3 方法
1.3.1标准品溶液配制 选择甲醇对联苯、邻苯基苯酚、噻苯咪唑、抑霉唑、多菌灵、桂醛、乙萘酚、2,4二氯苯氧乙酸配置浓度为1000μg/ml标准储备液，放在4℃的冰箱中保存。
1.3.2样品前处理 选择10g果蔬匀浆物，放到容量为50ml的聚四氟乙烯离心管内，分别加入氯化钠10g、水10ml，选择1mol/L NaOH溶液将pH值调到12，接着将25ml乙醚加入其中，进行10分钟的涡旋提取，在每分钟5000r的速度下进行5分钟的离心处理，选择上层有机相放在容积为100ml的磨口圆底烧瓶内。将乙醚20ml加入沉淀物中进行二次提取，将提取液合并，在30℃温度下进行旋转蒸发浓缩，一直到接近干的状态[2]。选择甲醇对残留物进行溶解，同时定容到5ml，过0.45μm有机滤膜依照色谱条件完成测定。
1.3.3色谱条件 Inertsil ODS-SP C18柱作为色谱柱；流动相：A.甲醇，梯度洗脱，流速：0.8mL/min；B.磷酸盐缓冲液（在900mL水中融入1.41g磷酸氢二钠和1.38g磷酸二氢钠，1mol/L氢氧化钠溶液将pH调至6.8，水定容到1000mL），二极管阵列检测器；柱温保持在30℃；进样体积控制为5μL。检测波长：7.5～28.0min时波长是230nm；0～7.5 min时波长是275nm。
2.结果
2.1 选择波长
经DAD检测器于190～400nm水平中实施全波段扫描发现，桂醛、2,4二氯苯氧乙酸、多菌灵、噻苯咪唑、乙萘酚、邻苯基苯酚、抑霉唑、联苯最大吸收波长分别为275nm、285nm、286nm、300nm、230nm、254nm、230nm、254nm。考虑具体出峰次序，设定了以下变化波长：0～7.5min的波长=275nm，能够兼顾较早出峰的噻苯咪唑、桂醛、多菌灵、2,4-二氯苯氧乙酸，这一波长为其较大吸收波长；7.5～28.0min时波长=230nm，这一波长为抑霉唑以及乙萘酚最大的吸收波长，能够兼顾到较小响应值的联苯、邻苯基苯酚，能够提高方法的整体灵敏度[3]。
2.2 选择流动相
实验分别选择甲醇-磷酸盐缓冲液（pH=6.8），甲醇-乙腈-5mmol/L十二烷基磺酸钠溶液（55:10:35，磷酸pH调节至4.5），甲醇-磷酸盐缓冲液（pH=3.0），甲醇-水流动相。结果显示，甲醇-磷酸盐缓冲液、甲醇-水流动相体系中各组分弱保留于色谱柱上，2,4-二氯苯氧乙酸、乙萘酚、桂醛存在较小的分离度，剩下物质锋形拖尾严重[4]。另外分析其他几种流动相，通过综合比较，最终确定流动相选择磷酸盐缓冲溶液(A)（pH=6.8）-（B）。经调节梯度洗脱程序，提前了抑霉唑出峰时间，并分开联苯，能够使锋形改善以及分离效果得到兼顾。从表1发现，22分钟内所有组分均得以分离。
2.3 选择提取液
甲醇、乙醚、乙酸乙酯、丙酮是应用较多的提取溶剂，分别利用四种溶剂完成提取，因为甲醇和丙酮具有亲水性，无法将基质中水溶性成分消除，所以不适用于提取溶剂；而乙酸乙酯在提取期间出现乳化的可能性大[5]；乙醚则有较低的沸点，能够在温度较低的环境下旋转蒸发，防止联苯以及桂醛挥发，所以提取溶剂确定选择乙醚。
2.4 回归方程、线性范围和检出限
将标准品储备液经精密量取适量置入容量瓶中，稀释甲醇到刻度，配制成1、2、5、10、100、1000μg/mL浓度的标准混合溶液系列。进样5μL，纵坐标设计为峰面积，横坐标设置为对照品浓度，对回归方程和相关系数进行计算，按照不同组分于仪器响应的3倍信噪比完成检出限的计算。分析结果发现，这个方法线性良好的范围为1～1000μg/mL，相关系数都在0.999以上；检出限为0.1～0.4μg/mL，符合定量分析标准。
2.5 回收率实验
对空白样品开展加标回收实验，设置0.5、2、10mg/kg为加标水平，按照前文描述方法进行5份平行测定。分析结果发现，加标回收率为88～97.4%，相对标准偏差为0.53～3.9%。证实这个方法准确性和重复性都很好，满足防腐剂残留分析标准。
2.6 分析实际样品
在水果批发市场以及超市随机选择8批果蔬，根据上文描述的方法对每种样品进行3次重复测定，结果显示检出桂醛的水果有3批次，没有检出其他防腐剂。但是从我国卫生部制订的食品添加剂使用标准，桂醛可以依据生产需求选择适量应用，且实践证实桂醛无毒，可以用于果蔬的防腐中。
3.讨论
本研究利用HPLC法对果蔬中8种防腐剂进行了同时测定，通过变化流动相的梯度洗脱及检测波长，使得该方法检测的灵敏度得到明显提高。HPLC法准确性高，操作简便，具有良好精密度，使得测定果蔬防腐剂的效果得到明显提升，分析时间有效减少，能够推广用于果蔬防腐剂的检测中，保证食品安全。
【参考文献】
[1]向露，周启明，王雅等.程序变波长-高效液相色谱法同时测定果蔬中9种防腐剂[J].食品工业科技，2013，34(20):70-74.
[2]李小晶，陈旻实，戴金兰等.固相萃取高效液相色谱-质谱法同时检测啤酒中5种痕量防腐剂[J].分析测试学报，2013，32(8)：973-977.
[3]刘素娟，邵艳秋，崔术新等.高效液相色谱法快速测定化妆品及药品中4种防腐剂[J].湖北农业科学，2015，54(11):2735-2737.
[4]朱会卷，张卫强，杨艳伟等.高效液相色谱分析化妆品中的防腐剂氯苯甘醚[J].色谱，2014，32(1):95-99.
[5]周斌，杨怀燕，张秀梅等.高效液相色谱法同时测定干菊花中五种防腐剂[J].湖北农业科学，2016，55(4):1013-1015.
论文作者:王林,许凌
论文发表刊物:《医药前沿》2017年7月第19期
论文发表时间:2017/7/27
标签：防腐剂论文; 波长论文; 甲醇论文; 果蔬论文; 联苯论文; 色谱论文; 乙醚论文; 《医药前沿》2017年7月第19期论文;