（1徐州医科大学麻醉学院 江苏徐州 221000）
（2徐州医科大学江苏省麻醉学重点实验室 江苏徐州 221000）
【摘要】目的：观察小剂量纳洛酮(naloxone，NL)对氯胺酮(ketamine，KT)抗抑郁作用的影响，为临床合理联合用药提供依据。方法：60只小鼠随机分为5组：空白组（KB组）、模型组（MX组）、30mg?kg-1氯胺酮组（K组）、100ng?kg-1纳洛酮组（N组）、氯胺酮与低剂量纳洛酮合用组(K+N组)。药物处理前1天除KB组外其余组小鼠强迫游泳(forced swimming test,FST)15min造模；24小时后各组分别腹腔注射给药，30min后，强迫游泳实验并记录其5min内不动的时间，测定后处死，采用高效液相色谱法分析海马谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量，计算Glu/GABA比值。结果：与KB组相比，MX组强迫游泳实验不动的时间延长（P<0.01），海马组织Glu/GABA比值降低（P<0.01）；与MX组相比，K组、N组和K+N组强迫游泳实验不动的时间减少(P<0.05、P<0.05、P<0.01)，海马组织Glu/GABA比值升高（P<0.05、P<0.05、P<0.01）；与K组相比,K+N组强迫游泳实验不动的时间减少(P<0.05)，海马组织Glu/GABA比值升高（P<0.05）。结论：小剂量纳洛酮(100ng?kg-1)能够增强氯胺酮(30mg?kg-1)的抗抑郁作用，且其机制与Glu/GABA升高有关。
【关键词】氯胺酮；纳洛酮；抑郁；强迫游泳；Glu；GABA
【中图分类号】R749.05 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）22-0089-03
抑郁症是一种常见的精神疾病，以出现普遍、持续的情绪低落以及对周围环境失去兴趣等主要症状为临床特征，并伴随睡眠、食欲、能量水平、精神运动功能和认知水平等方面的交替症状[1]。有研究表明抑郁症的发生与Glu和GABA的变化有关[2]。常用的一线抗抑郁药物起效慢且有较大的治疗抵抗性[3]。新近的许多基础及临床研究均表明氯胺酮（ketamine，K）作为N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid，NMDA）受体拮抗剂具有抗抑郁作用，即使小剂量使用，起效时间也远快于常规抗抑郁药物，对难治性抑郁症也能发挥抗抑郁作用[4]。既往实验发现小剂量纳洛酮可改变Glu的浓度[4]和GABA能神经元的活动[6]，但是对于小剂量纳洛酮对氯胺酮抗抑郁作用的影响未见报道。本实验通过强迫游泳试验阐明小剂量纳洛酮对氯胺酮抗抑郁作用的影响，并通过高效液相色谱法检测海马组织谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量，计算Glu/GABA比值，从而为临床合理联合用药提供实验依据。
1.材料与方法
1.1 药物
盐酸纳洛酮注射液(北京凯因科技股份有限公司，批号H20053602，规格：0.4mg/ml)；氯胺酮(江苏省恒瑞医药股份有限公司，批号KH090701，规格：0.1g/2ml）；Glu、GABA氨基酸标准品、领苯二甲醛（OPA）和β-巯基乙醇（美国sigma公司）
1.2实验动物
昆明种小鼠60只由徐州医科大学实验动物中心提供，雌雄并用，体重18～25g。
1.3 实验分组
将60只小鼠随机分为5组：空白组（KB组）、模型组（MX组）、30mg?kg-1氯胺酮组（K组）、100 ng?kg-1纳洛酮组（N组）、氯胺酮与低剂量纳洛酮合用组（K+N组）。
1.4实验方法
1.4.1抑郁小鼠模型建立 实验第一天将小鼠置于高40cm，直径18cm，盛有25℃自来水的玻璃缸中，水深可调整，以小鼠后足刚可触及缸底却不足以支撑身体为宜，游泳15min。
1.4.2药物干预 24小时后5组小鼠分别腹腔注射生理盐水、生理盐水、氯胺酮30mg?kg-1、纳洛酮100ng?kg-1、氯胺酮30mg?kg-1+纳洛酮100ng?kg-1，注射容积均为10ml?kg-1。注射后30min再次行强迫游泳实验5min，观察并记录其不动时间。
1.4.3海马区Glu、GABA的测定 断头取脑，分离海马区，并将海马组织置于-20℃冰箱保存备用。参考王炜等[7]改良的高效液相色谱法检测Glu、GABA含量。
1.5 统计学处理
采用SPSS 19.0进行数据处理和分析。实验数据以x-±s表示，组间比较用单因素方差分析，多组间两两比较采用LSD法。P＜0.05认为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 FST不动时间检测结果
与KB组相比，MX组强迫游泳实验不动的时间延长（P＜0.01）；与MX组相比，K组、N组和K+N组强迫游泳实验不动的时间减少（P＜0.05、P＜0.05、P＜0.01）；与K组相比，K+N组强迫游泳实验不动的时间减少（P＜0.05）。见表1。
2.2 高效液相色谱法检测结果
与KB组相比，MX组海马组织Glu/GABA比值降低（P＜0.01）；与MX组相比，K组、N组和K+N组海马组织Glu/GABA比值升高（P ＜0.05、P＜0.05、P＜0.01）；与K组相比，K+N组海马组织Glu/GABA比值升高（P＜0.05）。见表1。
图1 各组小鼠海马组织Glu/GABA比值
与KB组比较，**P<0.01；与MX组比较，#P<0.05，##P<0.01；与K组比较，$P<0.05
3.讨论
强迫游泳所致抑郁模型属于行为绝望模型，当小鼠被迫在局限的空间游泳，它们首先拼命地泳动试图逃跑，随后处于一种漂浮的不动状态，仅露出鼻孔维持呼吸，四肢偶尔划动以保持身体不至于沉下去，这种状态即不动状态，属于“行为绝望”。该模型具有简单、快速、敏感等特点，目前国内外关于探讨氯胺酮抗抑郁机制的研究绝大多数采用此模型[8-9]，因此在本实验中也选用此模型。本实验也证实了抑郁模型小鼠的FST不动时间明显增加。
张广芬等[10-11]观察到氯胺酮抗抑郁作用与前额皮层以及海马中GABA下调及Glu上调有关。GABA是抑制性神经递质的主要类型，GABA增多能够抑制兴奋性神经元，导致兴奋性神经递质谷氨酸合成减少，从而减弱突触再生相关信号，促进抑郁症的发生[12]。刘向六等[13]进一步研究发现，氯胺酮可能通过抑制大鼠前额皮层GABA生成，从而减弱对兴奋性神经元的抑制作用，导致Glu水平升高，进一步激活突触再生相关信号，促进突触再生，从而产生抗抑郁作用。本实验通过强迫游泳试验证实了氯胺酮具有改善抑郁症状的作用，且通过高效液相色谱法检测海马组织Glu以及GABA的含量变化时，也证实了氯胺酮抗抑郁作用与海马组织Glu/GABA的升高有关。
纳洛酮是非选择性阿片受体阻断药，常规用量纳洛酮可阻止中枢神经细胞释放兴奋性递质Glu，降低兴奋性氨基酸对神经元的毒性作用；亦可以拮抗GABA受体降低抑制性神经元兴奋性，增加神经传导[14-15]。涂明义[16]等观察到纳洛酮对急性分离的额叶皮质及海马区神经元具有直接兴奋作用，提示纳洛酮可通过非阿片受体对额叶皮质及海马区神经元产生兴奋作用。本实验证实了小剂量100ng?kg-1纳洛酮具有抗抑郁作用，且在海马组织中Glu/GABA的比值升高。
本实验研究发现，小剂量纳洛酮与氯胺酮合用时，强迫游泳试验小鼠的不动时间明显减少，提示小剂量纳洛酮能够增强氯胺酮的抗抑郁作用，且其机制与海马组织内Glu/GABA升高有关。
综上所述，氯胺酮（30mg?kg-1）和小剂量纳洛酮（100ng?kg-1）均具有抗抑郁作用，当两者合用时，小剂量纳洛酮能够明显增加氯胺酮的抗抑郁作用，且与海马组织内Glu/GABA升高有关。本实验为临床联合用药提供一定的实验依据和理论依据。
【参考文献】
[1] karg K，Burmeister M，Shedden K，et al.The serotonin transporter promoter variant(5-HTTLPR)，stress，and depression meta-analysis revisited:evidence of genetic moderation[J]. Arch Gen Psychiatry，2011，68:444-454.
[2] Krestal JH，Sanacora G，Blumberg H，et al.Glutamate GABA systems as targets for novel antidepressant mood-stabilizing treatments[J]. Mol Psychiatry，2002，7:71-80.
[3] Li N，Lee B，Liu RJ，et al.mTOR-dependent synapse formation underlies therapid antidepressant effects of NMDA antagonists[J]. Science，2010，329(5994):959-964.
[4] Rush AJ，Trivedi MH，Stewart JW，et al.Combining medications to enhance depression outcomes(CO-MED): acute and long-term outcomes of a single-blind randomized study[J]. Am J Psychiatry，2011，168(7):689-701.
[5]涂明义，李朝武，张苏明，等.纳洛酮对大鼠额叶皮质神经元兴奋性的影响.中国临床康复，2005，9(1):216-217.
[6]陈健，王冰舒.纳洛酮药理研究及临床应用进展[J].医学综述，2008，14(7):1095-1096.
[7]王炜，刘朝，江卫国，等.HPLC测定脑组织和脑脊液中4种氨基酸类神经递质含量的方法改良研究[J].同济医科大学学报，1999，28(2):92-93.
[8] Detke MJ，Rickels M，Lucki I.Active behaviors in the rat forced swimming test differentially produced by serotonergic and noradrenergic antidepressants[J]. Psychopharmacol(Berl)，1995，121(1):66-72.
[9] Porsoltr D，Lepindnon M，Jalfre M. Depression:a new animal model sensitive to antidepressant treatment[J]. Nature，1977，266(5604):730-732.
[10]张广芬，石金云，李晓敏，等.氯胺酮对强迫游泳大鼠前额皮层谷氨酸及γ-氨基丁酸的影响[J].实用医学杂志， 2014，29(6):877-879.
[11] Liebenberg N，Joca S，Wegener G.Nitric oxide involvement in the antidepressant-like effect of ketamine in the Flinders sensitive line rat model of depression[J]. Acta Neuropsychiatr，2015，27(2):90-6.
[12] Li N，Liu RJ，Dwyer JM，et al. George Aghajanian， and Ronald S.Duman Glutamate N-methyl-D-aspartate receptor antagonists rapidly reverse behavioral and synaptic deficits caused by chronic stress exposure[J]. Biol Psychiatry，2011，69(8):754-761.
[13]刘向六，刘文学，邱丽丽，等.γ-氨基丁酸在氯胺酮抗抑郁中的作用[J]. 医学研究生学报，2015，28(1):4-6.
[14]贺晓雅，凌宗秀.纳洛酮的药理作用和临床应用[J].现代医药卫生，2004，20(24):2665-2666.
[15] Sbrenna S，Marti M，Morari M.L-glutamate and gamma-aminobutyric acid efflux from rat cerebrocortical synaptosomes: modulation by kappa- and mu- but not delta- and opioid receptor like-1 receptors[J]. J Pharmacol Exp Ther. 1999，291(3):1365-71.
[16] 涂明义，李朝武，张苏明，等.纳洛酮对大鼠额叶皮质神经元兴奋性的影响[J]. 中国临床康复，2005，9(1):216-217.
基金项目：国家自然科学基金（81273489）、国家级大学生创新创业训练计划项目（201510313004）、江苏省大学生创新创业训练计划重点项目（201510313004Z）
论文作者:马龙飞,黄铭洁,王秀丽,邹澜,张悦,李若溪,夏莉
论文发表刊物:《心理医生》2016年22期
论文发表时间:2016/11/29
标签：氯胺酮论文; 小鼠论文; 不动论文; 作用论文; 比值论文; 游泳论文; 神经元论文; 《心理医生》2016年22期论文;