二氯乙酸钠诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞株凋亡的实验研究论文_黄海舸 陈瑜 秦玉洁 王妍韵 尹全

(广西壮族自治区右江民族医学院附属医院;广西百色533000)

【摘要】目的 探讨二氯乙酸钠(DCA-Na)诱导人胃癌SGC-7901和MGC803细胞株凋亡的影响。方法 MGC-803细胞与SGC-7901接种于含有浓度为10%胎牛血清的RPMI1640培养液当中,待持续培养24h之后,加入二氯乙酸钠(10、40与80?mol/L),继续培养,时间为12、24h与48h。待药用24h后,运用流式细胞术对细胞凋亡率进行检测。结果 二氯乙酸钠对人胃癌SGC-7901与MGC803细胞株凋亡具有依赖性诱导作用。结论 二氯乙酸钠对胃癌SGC-7901与MGC803细胞增殖具有抑制作用,并能诱导其凋亡。

【关键词】二氯乙酸钠;胃癌;SGC-7901;MGC803;凋亡

胃癌为临床中一种较常见型消化系统肿瘤,在各类恶性肿瘤死因中,其位居第二位。当前,胃癌治疗方法有生物免疫、放化疗及手术切除治疗等。近年,二氯乙酸钠(DCA-Na)在胃癌治疗中较多应用。有实验证实[1],用作治疗线粒体遗传性疾病与乳酸酸中毒的小分子药物二氯乙酸盐(DCA),能杀死乳腺、肺、胃、脑等肿瘤细胞,此外,DCA对肿瘤细胞内线粒体相应功能具有激活作用,因而对细胞内源性凋亡通路,同样具有激活效能,最终可实现杀死癌细胞的效果。本次实验用DCA-Na,观察其对人胃癌SGC-7901与MGC803细胞株凋亡的影响,为DCA-Na临床应用丰富实验依据。

1.资料与方法

1.1材料

选用河北奥发医药科技有限公司生产的DCA-Na,小鼠抗人β-actin多克隆抗体/苯甲磺酰氟(PMSF)、抑肽酶、碘化丙啶(PI)与DMSO均购自Sigma公司;选用购买于Gibcol BRL公司生产的胎牛血清与RPMI1640培养液;胰蛋白酶与MTT(Amresco公司);人胃癌细胞株MGC803与SGC-7901(中科院上海细胞所)。选用购自北京宝塞生物公司的膜联蛋白V(AnnexinV)-异硫氰酸荧光素(FITC)试剂盒。

1.2方法

(1)细胞培养。MGC803与SGC-7901细胞均进行常规传代,分别培养于含有100mg/L链霉素、100kU/L青霉素与浓度为10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,然后放置于浓度为5%CO2、饱和湿度及温度为37℃的培养箱中进行培养。(2)检测细胞凋亡率。运用流式细胞仪,MGC803与SGC-7901单细胞悬液,接种于6个孔板,均依据1.5×104个/孔行此操作。待药物持续作用达24h后,对各孔细胞进行收集,以1000r/min转速实施离心操作,时间为5min,然后用磷酸盐缓冲液(PBS)连续洗涤(3次),取结合缓冲液200?l,将之重混悬其中,外加PI 5?l与之混匀,于室温状态下实施避光反应,持续10min,最后运用流式细胞术,对细胞凋亡率进行检测。

1.3统计学方法

SPSS22.0处理数据,t检验计量资料,X2检验计数资料,P<0.05表示差异有统计学意义。

2.结果

运用AnnexinV-FITC/PI双染色,能够对正常细胞(PI双标阴性染色与AnnexinV)、坏死细胞(PI双标阳性染色与AnnexinV)、早期凋亡细胞(AnnexinV 单标阳性染色)。对于左下象限细胞簇而言,其所表示的是正常细胞,而对于左上象限细胞簇来讲,即为坏死细胞,另外,右上象限细胞簇所表示的是晚期凋亡细胞,而右下象限细胞簇即为凋亡细胞。DCA-Na诱导人胃癌MGC803与SGC-7901细胞株凋亡。如图1。

较DCA-Na0?mol/L,aP<0.05,b P<0.05。

图1 DCA-Na对SGC-7901与MGC803细胞株凋亡的影响

3.讨论

在胃癌的发生、发展进程中,环氧化酶2挥着举足轻重的作用,而选择性COX-2抑制剂对胃癌细胞增殖、转移具有抑制作用。有报道指出[2],选择性COX-2抑制剂能使心 血 管 不 良 事 件发生几率增加,还会增加胃肠道出血风险,因而限制了其临床应用。由本次研究可知,二氯乙酸钠(DCA-Na)对于高表达COX-2的SGC-7901细胞以及并不表达的MGC803细胞,均呈现出剂量与时间依赖性增殖抑制作用,DCA-Na对SGC-7901细胞的IC50值的干预,相比MGC803细胞,高于后者,表明DCA-Na在抗肿瘤效应方面,能通过多种途径发挥作用[3]。由本次研究得知,DCA-Na剂量对PCNA表达具有依赖性抑制作用,PCNA实为一种酸性核蛋白,分子量为36kD,在对DNA合成调节及控制细胞周期等方面,均发挥着重要作用。相关研究指出,香烟诱导白鼬胃黏膜癌变的机制,及其在抑制Caspase-3活性及促进PCNA合成中所起到的作用,相关于对细胞凋亡的抑制。因此,二氯乙酸钠对人胃癌SGC-7901与MGC803细胞株凋亡具有依赖性诱导作用。

参考文献:

[1]刘小军, 刘敏, 段玲,等. 二氯乙酸钠联合顺铂对胃癌细胞的抑制作用[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2016, 23(1):30-35.

[2]王志新, 邹玺, 胡守友. 润生方对人胃癌细胞SGC-7901生物学活性的影响及诱导凋亡研究[J]. 吉林中医药, 2016, 36(5):499-503.

[3]李笃军, 阚氏海, 唐菁. 阿司匹林和吲哚美辛抑制胃癌细胞株MGC803细胞增殖实验研究[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2016, 23(20):1351-1354.

项目级别:广西教育厅高校科研(科研成果课题)

项目名称:二氯乙酸钠诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞株凋亡的实验研究

项目编号:(YB2014293)

论文作者:黄海舸 陈瑜 秦玉洁 王妍韵 尹全

论文发表刊物:《医师在线》2017年12月下第24期

论文发表时间:2018/3/19

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二氯乙酸钠诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞株凋亡的实验研究论文_黄海舸 陈瑜 秦玉洁 王妍韵 尹全
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