信宜市林业调查规划设计队 广东信宜 525300
摘要：油茶（Camellia oleifera Abel）是我国南方重要的木本食用油料植物，与油棕、油橄榄、椰子并称为世界四大木本食用油料植物。本研究以小果油茶腋芽和油茶瓶苗为试验材料，分别对油茶组织培养的最佳灭菌时间和最适增殖培养基进行探究分析，并对结果进行讨论，得出结论。
关键词：油茶；继代增殖培养；分析；影响
油茶，因其种子可榨油（茶油）供食用，故名。别名茶子树、茶油树、白花茶。油茶属山茶科油茶属的木本油料植物，常绿小乔木，具有较高的经济及药用价值，在我国油茶已有2300多年的栽培历史。茶油因色清味香，营养丰富，耐贮藏，是优质食用油；也可作为润滑油、防锈油用于工业。茶饼既是农药，又是肥料，可提高农田蓄水能力和防治稻田害虫。其果皮是提制栲胶的原料。可见油茶的用途极为广泛。目前，油茶种苗的繁育主要采用扦插育苗、芽苗砧嫁接和低产林高头换接等无性繁殖技术措施。但因受到油茶优良品种无性系繁殖材料资源有限的限制，加上苗木培育时间长、苗木繁殖系数低等因素影响，难以在较短时间内快速培育出大量优良无性系苗木，以满足油茶产业发展的需求，因此，提供一种高繁殖系数的油茶组培苗的繁殖方法就成为一种迫切需求。本文将运用组织培养技术对油茶进行工厂化生产，以期为大力发展油茶产业提供理论依据，推动油茶产业的发展。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料取自某开发有限公司从某引种栽培的小油茶成熟枝条腋芽和腋芽培养的油茶瓶苗。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体最佳灭菌时间的筛选 将取回的腋芽剥去最后几层鳞片，用自来水冲洗数次后，放入洗衣粉溶液中浸泡15～20min，再用自来水冲洗2h后带入接种室，置于超净工作台上用75%的酒精处理8s后取出，迅速转移到0.1%的氯化汞中分别消毒处理4min、8min、12min。消毒时还应适时对油茶腋芽进行搅动，可使植物材料与灭菌剂接触良好。消毒后将腋芽依次通过5杯无菌水进行涮洗，然后将腋芽用无菌滤纸将表面水分吸干，接种在1/2MS培养基中，每种处理接种25瓶，每瓶4个腋芽，每个处理重复3次。最后放到培养架上进行观察，以检测污染情况，15d后观察记录腋芽的污染率、褐化率和成活率。操作中所用的镊子、解剖刀、三角架、烧杯培养皿中的滤纸和培养基均需经过严格的高压灭菌，使用镊子等器具时要随时用酒精灯消毒。培养条件为光照强度2500～3000lx，光照时间每天10h，温度22～26℃。
1.2.2 增殖培养基中不同激素配比对油茶组培苗的影响 配制出3种不同的增殖培养基，分别为：A配方MS+0.4mg/L6-BA+0.3mg/LNAA；B配方MS+0.7mg/L6-BA+0.3mg/LNAA；C配方MS+1mg/L6-BA+0.3mg/LNAA。取油茶瓶苗，将油茶小苗切成1cm高的单芽植入配制好的培养基中，每个处理接种20瓶，每瓶培养基中接入6个单芽，每个处理重复3次。培养条件同上。
2 结果与分析
2.1 不同灭菌时间对灭菌效果的影响
选取小果油茶腋芽作为外植体，用0.1%的氯化汞灭菌处理4min、8min、12min，灭菌效果如附图所示。灭菌12min时的污染率虽然最低，为17%，但其褐化率最高，为45%；灭菌时间为4min时，有68%的外植体被污染，污染率最高，而成活率只有23%，为最低；相比之下，处理时间为8min时，其污染率偏低，为30%，成活率最高，为59%，而褐化率只有7%，为3组处理中最理想的灭菌时间。
附图 不同灭菌时间对灭菌效果的影响
2.2 不同激素配比对油茶增殖培养的影响
通过配制出3组不同配方的培养基对油茶进行继代培养，并在40d后对3组处理进行观察，所得数据如附表所示。通过对单芽增殖倍数和平均苗高进行方差分析，可以得出C组处理的单芽增殖倍数和平均苗高与A组、B组处理相比差异极显著。
附表 不同增殖培养基的增殖培养情况
注：单芽增殖倍数=总增殖芽数/接种芽数。同列不同小写字母表示差异显著。
A组处理增殖时间长、分化芽数少、增殖倍数低，不适宜进行进一步扩繁，延长了扩繁周期；B组处理比A组处理理想，但各方面也不如C组处理；C组处理所培养的芽分化数最高，增殖倍数也最高，且丛苗生长状况最好，是增殖培养中最适培养基。可见，随着6-BA浓度在0.3～1.0mg/L范围内逐渐增大，增殖时间逐渐缩短，芽分化数逐渐增多，丛苗高度逐渐增高，增殖倍数也逐渐增加。通过对照吴正凯等人所作油茶增殖培养基试验发现，6-BA浓度高的培养基为最适培养，增殖倍数最高，与本试验研究结果一致。本试验获得的最适增殖培养基为MS+1mg/L6-BA+0.3mg/LNAA，增殖倍数为4.1。
3 讨论与结论
灭菌试验先用酒精对外植体进行消毒，再配合氯化汞进行灭菌。用酒精浸泡一方面能够起到灭菌作用，另一方面能够使细胞收缩，以防进一步消毒时氯化汞这种剧毒物质通过细胞壁进入细胞内造成外植体毒害。氯化汞灭菌原理是汞离子可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。氯化汞的灭菌效果极佳，但易在植物材料上残留，使外植体细胞死亡，所以灭菌时间不是越长越好，也要有一定的上限。
增殖最适培养基研究中，将油茶瓶苗重新分割植入新的培养基中时，需将分成的单芽所带叶片去除顶端2/3，有利于芽的分化。6-BA为细胞分裂素，能促进细胞分裂与扩大，诱导器官分化，促进侧芽分化与生长，抑制顶端优势，所以在增殖培养中起主要作用。但由于本试验所用6-BA与NAA浓度比低于其他试验，造成芽长高的趋势，而芽的平均高度增高也可增大芽的增殖倍数。关于6-BA与NAA浓度配比，有待今后继续研究。
试验通过运用油茶腋芽和油茶瓶苗，对油茶组织培养中的两个关键因素外植体灭菌和继代培养进行研究，根据不同处理初步得出油茶腋芽用0.1%氯化汞处理的最佳灭菌时间为8min，其成活率为59%，接近60%，污染率和褐化率都比较低；最适增殖培养基配方为MS+1mg/L6-BA+0.3mg/LNAA，该配方所培养的芽分化数最高，丛苗生长状况最好，增殖倍数也最高。随着6-BA浓度在0.3～1.0mg/L的范围内逐渐增大，增殖时间逐渐缩短，芽分化数逐渐增多，丛苗高度逐渐增高，增殖倍数也逐渐增加。
4 结语
综上所述，本发明提供了一种油茶组织培养快速繁殖方法，经试验得出结果并对其进行分析讨论，表明该方法既能在短时间内大量繁殖油茶苗，又能够保持母体植株的优良性状，有利于油茶良种大量繁殖，进而大力发展油茶产业，能带来巨大的经济效益以及能提高人们的健康水平。
参考文献：
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[3]范晓明.油茶组织培养技术研究[J].中南林业科技大学.2011
论文作者:龚亚源
论文发表刊物:《基层建设》2016年9期
论文发表时间:2016/8/1
标签：油茶论文; 培养基论文; 腋芽论文; 氯化汞论文; 倍数论文; 时间论文; 配方论文; 《基层建设》2016年9期论文;