宋自阆1 张洪为(通讯作者)2
（1自贡市第四人民医院检验科 四川 自贡 643000）
（2泸州医学院附属医院 四川 自贡 646000）
【摘要】 目的：研究血小板低渗休克反应与血小板体外保存时间的相关性。方法：来源于10名自愿健康献血者的按血站标准采集的10袋单采血小板，置于22℃血小板保存箱保存7天，分别在保存的当天、第3天、第5天和第7天测定血小板低渗休克反应。结果：在5天之内，随着保存时间的延长，血小板低渗休克反应没有明显变化（P>0.05）。但是第7天发生了明显变化（P<0.05）结论：在正常的5天保存期内，血小板活力未明显受损，不影响输注。
【关键词】单采血小板；低渗休克反应；保存时间；血小板活力
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）08-0087-02
Relationship between storage time and hypotonic shock response of apheresis platelets
Song Zilang1, Zhang Hongwei(Corresponding author)2
1, the department of clinical laboratory in ZiGong NO.4 people，s hospital, Sichuan，643000
2, the department of blood transfusion in the Affiliated Hospital Of LuZhou Medical College,Sichuan,646000
【Abstract】 Objective:To explore the relationship between storage time and hypotonic shockresponse of apheresis platelets. Methods: Ten bags of apheresis platelets were collected from voluntary blood donor by blood station standard and stored in storage tank for 7 days at 22℃.HSR(Hypotonic shock response) was detected at d0,d3,d5,d7.Results:HSR had no significant change with storage time prolonged within five days(P>0.05),but it waswas gradually decreased at the seventh day(P<0.05).Conclusion Platelet activity had no significant change within five days.
【Key Words】 Apheresis platelets;Hypotonic shock response;Storage time;Platelet activity
血小板是人体内唯一具有止凝血功能的血细胞，目前为止还未发现功能与之比拟的替代品。因此，血小板输注是一种临床上不可替代的治疗手段，是成分输血的重要部分[1]。目前，常用的血小板制品分为两种，一种是手工制备的浓缩血小板，保存时间为24小时；另一种是通过血细胞分离机制备的单采血小板，22℃下保存5天。单采血小板因为其浓度和纯度较好，保存时间较长，临床应用效果好[2]。低渗休克反应(hypotonic shock response,HSR)实验是检测血小板在低渗环境中发生肿胀后而最终又可恢复其原有形状的能力，是反映血小板活力的重要指标[3]。本研究拟检测单采血小板在保存期间的血小板低渗休克反应，评估保存期间的血小板活力。
1. 材料与方法
1.1 材料
CS3000血小板常温保存袋（Baxter公司，美国），CS-3000 plus血细胞分离仪(Baxter公司，美国)，CHRONO-LOG560CA血小板凝集仪（美国），HELMER血小板恒温振荡保存箱（美国）。
1.2 方法
1.2.1单采血小板的采集与保存
招募10位健康自愿献血者（1周内未服用影响血小板功能的相关药物，外周血血小板计数>1.5×1011/L），签订自愿献血知情同意书，按照血站标准操作规程采用CS-3000plus血细胞分离机采集浓缩血小板悬液10袋，每袋血小板含量为（2.5～3）×1011，200～250mL/袋，进口血小板常温保存袋保存，置于22℃血小板保存箱，水平振摇，保存7d。分别在d0（采血的当天）、d3、d5、d7留取样品检测HSR。
1.2.2 HSR的测定
1.2.2.1每例标本分别取适量放置于2只专用塑料试管内，一管经3000 rpm离心10分钟后的上清液即为乏血小板血浆（PPP）；
1.2.2.2调整另一管血小板浓度至3.0×1011/L，即为富血小板血浆（PRP），并用HEPES缓冲液调节PRP的pH为7.0；
1.2.2.3将等渗PBS缓冲液和低渗去离子水置于37℃水浴预温；
1.2.2.4血小板凝集仪开机预温后，在一测试杯中加入200 μl PPP，置于测试孔中调零；
1.2.2.5在另一测试杯中加入200 μl PRP，放入搅拌棒后插入测试孔中，取200 μl等渗PBS缓冲液迅速注入此测试杯中，立即启动检测，并记录凝集仪在1 min内的透光率变化；
1.2.2.6用低渗去离子水代替等渗PBS缓冲液重复以上操作， 并记录凝集仪在5 min内的透光率变化。
1.2.2.7将等渗PBS缓冲液透光率变化图中第1 min的透光率值标记为TPBS，将低渗去离子水透光率变化图中的最大透光率值和第5 min的透光率值分别标记为Tmax和T5min，则HSR的计算
图1 HSR与血小板保存时间的关系图
3.讨论
血小板在低渗环境中依靠ATP产生一系列信息传导和生化反应，通过膜的被动运输，降低血小板内部离子的浓度来维持血小板的形态和体积。因此，HSR是一系列复杂的细胞内活动、膜离子通道和外部刺激反应[4]。血小板在低渗溶液渗透吸水肿胀，使血小板溶液的折光率减少，透光率增加。根据血小板在低渗溶液中的透光率变化，就可检测出其HSR的恢复率，从而判断血小板活力。HSR的恢复率越高，血小板的形态和体积就越接近正常，血小板功能就越好。血小板的低渗休克反应与保存血小板的恢复率密切相关，通过测定HSR可以预测血小板在体内的存活力[5]。因此，HSR是一项既实用而又必要的检测血小板体外功能指标。
限于技术和条件的不足，目前血站供应的血小板制品，往往仅仅以血小板数量≥2.5×1011/袋、红细胞混入量≤8.0×109/袋及白细胞混入量≤5.0×108/袋为质量标准，对其功能没有任何检测[6]。本文通过检测单采血小板保存期的第0、1、3、5、7 d的HSR，发现随着保存时间的延长，血小板的HSR有所下降，但第0、3、5 d的HSR并无显著性差异（P>0.05），第7 d的HSR显著下降（P<0.05）。因此，单采血小板在保存5天之内HSR基本稳定，血小板活力正常。但是保存超过5天，则HSR显著下降，血小板活力发生明显变化，可能影响血小板输注效果。基于本研究，笔者认为有必要建立保存期各阶段的血小板HSR值的参考范围，为血小板功能的质量评估提供参考标准。同时建议，单采血小板在保存期间越早输注越好。
【参考文献】
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[6]胡丽华.临床输血学检验[M].北京：人民卫生出版社，2012：146-150.
论文作者:宋自阆1,张洪为
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第8期供稿
论文发表时间:2015/7/1
标签：血小板论文; 休克论文; 缓冲液论文; 小板论文; 透光率论文; 活力论文; 血细胞论文; 《医药前沿》2015年第8期供稿论文;