马志跃（通讯作者）李彬 冯勇 余晓旭 樊建刚 何刚
（四川省人民医学科学院·四川省人民医院耳鼻咽喉头颈外科 四川 成都 610072）
【摘要】目的：考察防风多糖对过敏性鼻炎（AR）大鼠细胞因子的影响。方法：32只健康SD大鼠随机分空白组（A）、模型组（B）、防风多糖低剂量组（C）、防风多糖高剂量组（D），除A组外其余3组建立大鼠AR模型。每组于致敏第15d后开始给药，C、D组分别灌胃300、600 mg/kg防风多糖治疗，A、B组灌胃等量0.9 %生理盐水，连续14 d，处死，采样待检。ELISA检测血清IgE、IL-4、INF-γ及鼻腔灌洗液IgE、IL-4、HA含量。结果：C、D组较B组显著降低血清及鼻腔灌洗液IgE、IL-4含量、显著升高血清IFN-γ含量，降低鼻腔灌洗液HA含量（P<0.05）；D组较C组可显著改善血清及鼻腔灌洗液各指标含量（P<0.01）。结论：防风多糖可调节AR细胞因子的生成和释放，对AR有治疗作用。
【关键词】过敏性鼻炎；防风多糖；免疫因子；大鼠
【中图分类号】R765.21 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）08-0041-03
Effect of Saposhnikovia Divaricata Polysaccharide on Cytokines in Serum and Nasal Lavage Fluid of Rats with Allergic Rhinitis
Ma Zhiyue, Li Bin , Feng Yong, Yu Xiaoxu, Fan Jiangang, He Gang.
Sichuan Academy of Medical Sciences,Sichuan People's Hospital Chengdu 610072, China
【Abstract】Objective To investigate the effect of Saposhnikovia Divaricata polysaccharide on cytokines in rats with allergic rhinitis (AR). Methods Thirty-two healthy SD rats were randomly divided into blank group (A), model group (B), low-dose polysaccharide group (C), and high-dose polysaccharide group (D), rat AR models were established in the remaining 3 groups except group A. Each group was started after the 15th day of sensitization. Groups C and D were treated with 300, 600 mg/kg of saposhnikovia divaricata polysaccharide, respectively. Groups A and B were intragastrically administered with 0.9% normal saline for 14 days and the rats were sacrificed and samples were taken for examination. The levels of serum IgE, IL-4, INF-γ and nasal lavage fluid IgE, IL-4 and HA were detected by ELISA. Results The levels of IgE, IL-4 in serum and nasal lavage fluid were significantly lower in group C and D than in group B, the content of serum IFN-γ was significantly increased and HA in nasal lavage fluid was decreased (P<0.05). The content of serum and nasal lavage fluid in group D was significantly improved compared with group C (P<0.01). Conclusions The saposhnikovia divaricata polysaccharide can regulate the production and release of AR cytokines and has a therapeutic effect on AR.
【Key words】Allergic rhinitis;Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk polysaccharide;Immune factor;rats
过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）属于鼻炎慢性病，发病过程复杂，难治愈，发病率呈现逐年上升趋势，严重者可影响学习、工作、睡眠、发声等[1]。防风多糖具有较好的抗过敏、降低外界刺激干扰的作用，对抗过敏抑制率达到55.51%，且没有肌肤刺激作用[2]。为进一步探讨防风多糖对AR的作用效果和机制，本研究建立大鼠AR模型，探讨防风多糖对AR模型大鼠的症状改善及其免疫作用机制。
1.材料与方法
1.1实验动物与分组
健康SD大鼠32只，雌雄各半，体质量（200±10）g，购于成都达硕实验动物有限公司，使用许可证号：SYXK（川）2014-189。试验动物随机分为空白组（A）、模型组（B）、防风多糖低剂量组（C）、防风多糖高剂量组（D）。每组8只，清洁级实验室饲养。
1.2 过敏性鼻炎大鼠模型复制
参照常用卵清蛋白（OVA）复制AR模型方法[3]：将OVA 0.4mg、铝佐剂40mg及生理盐水1mL混匀，B、C、D组大鼠腹腔注射1mL，隔日1次注射致敏，连续7次，A组注射等体积生理盐水。第15～17天、第18～20天、第21～28天分别以0.25%、2%、5%的OVA溶液双侧滴鼻激发，每次100μL/鼻孔，A组大鼠以等体积生理盐水滴鼻激发，1次/d。
1.3 药物干预
每组动物于致敏第15d后开始灌胃给药，防风多糖高剂量组（600mg/kg）、低剂量组（300mg/kg），空白组与模型组给予等量0.9%生理盐水，1次/d，连续14d。
1.4 样本采集
末次给药1h后，戊巴比妥钠（60mg/kg）腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，离心取血清；剥离双侧鼻中隔黏膜，4%多聚甲醛固定；鼻腔灌洗液采集参考Kim[4]文献方法。
1.5 检测项目
将固定的鼻黏膜组织按常规方法制备石蜡切片，HE染色，镜检观察病理组织学变化；ELISA试剂盒（上海茁彩）检测血清IgE、IL-4、INF-γ及鼻腔灌洗液中IgE、IL-4、组胺（HA）含量。
1.6 统计学方法
数据采用SPSS20.0统计软件进行分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（x-±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 病理组织观察
空白组鼻黏膜无炎症反应，模型组黏膜上皮坏死，鼻黏膜水肿、充血，炎症细胞浸润，防风多糖低剂量组鼻黏膜有少量炎症细胞浸润，防风多糖高剂量组可见轻度水肿，炎症细胞显著减少，图。
图1大鼠鼻黏膜病理组织学变化
2.2血清IgE、IL-4、INF-γ含量
造模成功后，血清IgE、IL-4含量较空白组显著升高，INF-γ含量显著降低（P<0.01）。防风多糖低、高剂量组较模型组均可显著降低IgE、IL-4含量，升高INF-γ含量（P<0.05），高剂量组较低剂量组IgE、IL-4含量降低显著，INF-γ含量升高显著（P<0.01），表1。
表1各组大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量
组别例数IgE（mg/L）IL-4（μg/L）INF-γ（μg/L）
空白组84.37±0.88Aa35.83±3.11Aa0.79±0.04Dd
模型组835.65±2.08Dd55.33±4.51Bc0.30±0.03Aa
防风多糖低剂量组822.86±2.80Cc45.79±3.68ABb0.41±0.03Bb
防风多糖高剂量组815.11±1.33Bb36.93±2.42Aa0.67±0.05Cc
P-0.0000.0000.000
F-141.5720.03125.46
注：同列上标不同大写字母表示P＜0.01，不同小写字母表示P＜0.05。
2.2 鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量
造模成功后，模型组鼻腔灌洗液IgE、IL-4、HA含量较空白组显著升高（P<0.01）。防风多糖低、高剂量组较模型组可显著降低IgE、IL-4、HA含量（P<0.01），高剂量组较低剂量组降低更显著，表2。
表2 各组大鼠鼻腔灌洗液中IgE、组胺、IL-4含量
组别例数IgE（mg/L）HA（ng/mL）IL-4（μg/L）
空白组83.63±0.25Aa46.31±3.96Aa24.85±1.84Aa
模型组833.94±2.39Dd99.23±12.95Cc44.56±2.84Cd
防风多糖低剂量组822.58±2.97Cc75.61±5.06Bb35.04±2.64Bc
防风多糖高剂量组812.12±1.47Bb59.28±2.61ABa30.31±2.38ABb
P-0.0000.0000.000
F-122.8528.9634.78
注：同列上标不同大写字母表示P＜0.01，不同小写字母表示P＜0.05。
3.讨论
AR是变应原再次刺激使机体产生一系列生化反应，导致鼻黏膜水肿、喷嚏、鼻痒等症状[1]。本试验采用防风多糖治疗大鼠AR，病理组织考察结果表明，模型组黏膜上皮坏死、鼻黏膜水肿、充血，防风多糖高剂量组轻度水肿，炎症细胞显著减少，显著减轻AR病理组织损伤。
免疫球蛋白（IgE）是引起AR的主要抗体，变应原刺激后机体产生IgE抗体可联合细胞表面的IgE受体使机体致敏，再次接触相同变应原时会诱发炎性介质释放从而引起过敏反应[5]。本实验结果显示模型组较空白组血清IgE含量显著升高，防风多糖高、低剂量均可显著降低血清IgE含量（P＜0.01）。INF-γ、IL-4分别是Th1、Th2的重要细胞因子，在鼻炎发病中起核心作用，当Th1反应偏向Th2反应，IL-4分泌增加，INF-γ分泌减少[6]。本实验结果显示模型组较空白组血清IL-4含量显著増加，INF-γ显著降低（P<0.01），防风多糖高剂量组较模型组显著降低IL-4含量，增加INF-γ含量（P<0.01），说明防风多糖促进Th1/Th2细胞平衡。
鼻腔分泌物是由鼻腔中腺体分泌物、泪腺分泌物及血浆外渗液组成。而AR鼻腔局部细胞因子的变化具有特异性[7]。组胺（HA）是鼻过敏速发相的最重要的介质，可导致鼻黏膜水肿，鼻呼吸阻力増加，分泌物增多。本实验结果显示防风多糖高剂量组可显著降低HA含量（P<0.01），说明防风多糖有抗HA效应。本试验鼻腔灌洗液IgE、IL-4含量变化与血清中结果趋势一致，说明防风多糖可有效地抑制AR大鼠外周血及鼻腔局部炎性介质，进而控制AR发展。
综上所述，防风多糖可通过有效抑制炎性介质，平衡细胞因子，缓解炎症来治疗过敏性鼻炎。
【参考文献】
[1] 陈盼碧,宣锦,史林威,等.热敏灸对过敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影响[J].中国现代医学杂志,2017,27(4):17-21.
[2] 防风多糖对过敏性鼻炎大鼠免疫因子的影响[J].中国药师,2017,20(7):1188-1191.
[3] Kashiwabara M,Asano K,Mizuyoshi T,et al.Suppression of neuropeptide production by quercetin in allergic rhinitis model rats[J].BMC complementary and alternative medicine,2016,16(1):132.
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[6]刘书宇,王树鹏.麻黄细辛附子汤对变应性鼻炎大鼠INF-γ与IL-13含量的影响[J].河南中医,2017(8):1370-1372.
[7]刘永平,陈蕴光,郑俊斌,等.变应性鼻炎鼻激发后鼻腔分泌物嗜酸性粒细胞增加与血清特异性IgE水平正相关[J].细胞与分子免疫学杂志,2017,33(1):85-88.
基金项目：四川省成都市科技局课题（2015-HM01-00172-SF）
论文作者:马志跃（通讯作者）李彬,冯勇,余晓旭,樊建刚,何刚
论文发表刊物:《医药前沿》2019年8期
论文发表时间:2019/5/10
标签：多糖论文; 含量论文; 鼻腔论文; 血清论文; 剂量论文; 大鼠论文; 模型论文; 《医药前沿》2019年8期论文;