罗嫄 陈霞 袁涛
（成都市食品药品检验研究院 四川 成都 610045）
【摘要】 目的：建立HPLC法测定馒头类食品中柠檬黄和日落黄的含量。方法：以Waters Xterra C18 色谱柱（4.6×250mm，5?m）为固定相，以0.02mol/L乙酸铵为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱。流速1ml/min，检测波长254nm。结果：柠檬黄、日落黄浓度在1～20?g/ml的范围内线性关系良好。回收率符合要求。结论：该方法检测馒头类食品中添加色素准确，重复性好。
【关键词】 柠檬黄；日落黄；馒头；高效液相色谱
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）09-0395-03
HPLC determination of lemon yellow and sunset yellow in steamed buns Luo Yuan,Chen Xia,Yuan Tao.
Chengdu Food and Drug Control，Chengdu，610045,China
【Abstract】Objective To develop a HPLC method for the determination of lemon yellow and sunset yellow in steamed buns. Method A Waters Xterra C18 column （4.6×250mm，5?m）was used. The mobile phase A consisted of 0.02mol/L ammonium acetate，methanol as mobile phase B. Gradient elute at a flow rate of 1ml/min. The wavelength of detector was 254nm. Result The calibration curves of lemon yellow and sunset yellow showed good linearity in the range of 1~20 ?g/ml. The recoveries meet the requirement. Conclusion This method is accurate and reproducible, suitable for the determination of lemon yellow and sunset yellow in steamed buns.
【Key words】Lemon yellow;Sunset yellow;Steamed bun;HPLC
在我们日常生活中，食品色素的使用很广泛。它们可以使食物颜色鲜艳提高食欲。《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）中规定：柠檬黄与日落黄可用于风味发酵乳、调制炼乳、配制酒、果冻、糕点、饮料类等食品中，且用量受到严格限制[1]。在馒头类食品中柠檬黄和日落黄是不允许添加的。目前对于食品中柠檬黄等的测定方法主要有分光光度法[2-3]、液相色谱法[4]和薄层色谱法[5]。其中分光光度法对于饮料中色素的检测比较方便和常用，而薄层扫描法的准确度和灵敏度均不高。在现有的国家标准中没有馒头等面食类食品中柠檬黄等的检测方法。所以本文旨在建立和验证适用于馒头类食品中柠檬黄与日落黄含量的液相色谱法。
1.仪器与试药
Waters 2695-2998 高效液相色谱仪：四元泵，在线脱气，柱温箱，自动进样器，二极管阵列检测器；Millipore超纯水发生器；瑞士B?CHI旋转蒸发仪；电子天平：5200H超声仪；柠檬黄标准溶液（0.50mg/mL，中国计量科学研究院 GBW（E）100001a 12001），日落黄标准溶液（0.50mg/mL，中国计量科学研究院 GBW（E）100003a 12001），甲醇为色谱纯，水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 对照溶液的制备
精密量取柠檬黄对照溶液和日落黄对照溶液各1ml，置同一10ml量瓶中，加pH6水（柠檬酸调节pH）稀释至刻度，摇匀，制成各50?g/ml的混合对照溶液，即得。
2.2 供试品溶液的制备
称取样品碎末约10g，精密称定，置锥形瓶中，加解析液[乙醇-氨水-水（7∶2∶1）]60ml，超声提取5分钟，抽滤，滤渣用解析液再提取，抽滤，合并滤液，旋蒸至干，加pH6水适量溶解，加聚酰胺粉约1g，于60℃水浴搅拌15分钟，抽滤，用pH4水冲洗，再用甲醇-甲酸溶液（6∶4）适量冲洗，再用水洗至滤液呈中性，滤液弃去，加解析液洗脱聚酰胺粉三次，每次30ml，收集滤液，于60℃水浴挥干，精密加水10ml，溶解后过0.45?m滤膜，即得。
2.3 色谱条件
色谱柱：Waters Xterra C18（4.6×250mm，5?m）；流动相A：0.02mol/L乙酸铵（冰醋酸调节pH4.0），流动相B：甲醇，梯度洗脱条件如下；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样量：10?l。
2.4 线性关系考察
精密量取2.1项下混合对照溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml，加pH6水配制成浓度分别为0.5?g/ml、1.0?g/ml、2.0?g/ml、4.0?g/ml、5.0?g/ml、10?g/ml、20?g/ml的系列浓度对照溶液，按2.3项下的色谱条件进样测定峰高。以峰高Y对进样量X（ng）绘制标准曲线，得柠檬黄回归方程为：Y=7.80×103X–1.85×103,r=0.9999；日落黄回归方程为：Y=2.74×103X-3.16×103，R2=0.9999。结果表明，柠檬黄和日落黄进样浓度在0.5 ?g/ml～20.0?g/ml范围内，线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取2.5项下1.0?g/ml的对照溶液10?l，在2.3项下的色谱条件下连续进样5次，分别测定柠檬黄和日落黄的峰面积。结果柠檬黄峰面积的RSD为0.7%，日落黄峰面积的RSD为0.6%，精密度良好。
2.6 回收率试验
精密称取白面馒头碎末9份，每份约10g，按高中低三个浓度每个浓度三份样品精密加入2.1项下对照溶液0.4ml、0.8ml、1.2ml，同2.2项下处理方法制备回收率试验溶液，在2.3项下的色谱条件下测定，计算回收率，结果如下：
3.讨论
3.1 供试品溶液制备方法的确定
在碱性乙醇中色素的溶解性较好，故用来提取供试品中的色素；聚酰胺在弱酸性条件下对色素有吸附能力，故用来吸附提取液中的色素，减小供试品中油类成分对仪器的损耗；因天然色素与人工色素的结构差异，酸性甲醇能洗脱聚酰胺粉中的天然色素成分而对人工色素影响较小，故可以提纯供试品溶液。
另外，对于真正加入玉米粉制作的玉米馒头，为考察玉米中的色素对检测的干扰，将玉米粒粉碎后的干粉约5g，照2.2项下处理方法制备得玉米对照溶液。在相同色谱条件下进样，由结果可见（图3）玉米对供试品中人工色素的检测无干扰。
4.结论
由实验结果可见，本方法分离度好，准确度高，可以用于馒头类食品中柠檬黄与日落黄组分的检测。
【参考文献】
[1]中华人民共和国卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准.GB 2760-2014[S].北京:中国标准出版社，2014.
[2]刘冷，李建晴.紫外分光光度法同时测定柠檬黄和日落黄[J].光谱实验室，2007，24（3）：423-425.
[3]陈海春.双波长K系数分光光度法同时测定柠檬黄和日落黄[J].化学试剂，2003，25（2）：98-99.
[4]程小会，邓敬颂.液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄方法优化[J].化学分析计量，2010，19（2）：70-71.
[5]夏立娅，韩媛媛等.薄层色谱扫描法同时检测豆制品中碱性橙、皂黄、柠檬黄和日落黄以及辣椒粉中酸性橙Ⅱ、丽春红2R和罗丹明B[J].分析实验室，2010，29（6）：15-17.
论文作者:罗嫄,陈霞,袁涛
论文发表刊物:《医药前沿》2016年3月第9期
论文发表时间:2016/5/18
标签：柠檬黄论文; 溶液论文; 色谱论文; 色素论文; 日落黄论文; 精密论文; 馒头论文; 《医药前沿》2016年3月第9期论文;