黑龙江中医药大学 黑龙江哈尔滨 150040
摘要：本文主要介绍了微透析技术的取样原理、组成以及在针灸治疗脑梗死作用机制研究中的应用，并以提取大鼠脑脊液为例的详细描述了该技术的操作方法，讨论了微透析技术的优缺点并对微透析技术在脑内神经学领域的发展前景提出展望。
关键词：微透析；针灸；脑梗死
脑梗死，又称为缺血性脑卒中，是指由各种原因引起的脑部血液供应障碍，使局部脑组织发生不可逆性损害，导致脑组织缺血、缺氧性坏死。本病属于中医“中风病”范畴。近几年来其发病率逐年升高，并且复发率高，致残率高、致死率高，使患者生活质量明显下降，也为社会和家庭带来沉重的负担。因此，本病的治疗成为研究热点。针灸治疗脑梗死的有效性已得到世界范围的公认，大量研究证实，针灸对脑梗死有明确的治疗作用，是治疗脑梗死后运动功能障碍的有效方法。近几年来，由于微透析技术可以精确定位到脑内的各个区域被广泛应用于脑内神经递质的研究，本文结合微透析技术原理及方法，对近几年来为透析技术在针灸治疗脑梗死作用机制研究中的应用情况进行综述。
1.微透析简介
微透析（Microdialysis）技术是一种微创并连续获得活体内细胞间液物质的方法。1972年美国耶鲁大学Delgado等[1]通过将顶部固定透析包的导管埋植于10只恒河猴的尾状核和杏状核中研究脑内神经递质的释放，首次发表了关于微透析的文章，随后迅速发展成为神经学领域研究的重要工具之一。近年来微透析技术不断发展，截至2014年与微透析相关的文章高达6000篇之余，近年来，微透析技术主要用于药代动力学研究、毒理学、植物学等方面，在神经递质方面也获得了不小的成就，可对体内神经递质水平进行动态监测，进而研究疾病的进展变化，对于临床治疗疾病具有重要意义[2]。
1.1原理 微透析技术其取样利用透析原理，使用生理盐水、林格氏液或人工脑脊液进行灌注，探针外层由半透膜构成，液体通过半透膜时，由于浓度差，组织中的待检测物质就会顺着浓度梯度渗透进入透析液当中，并被接连不断地带出，通过测定流出液即可获得被检测组织中待检测物的性质及其浓度。
1.2组成 微透析系统由微量泵、微透析探头、动物活动容器、微量冷却收集器、连接管及配套设备组成。其动物活动容器是为了让清醒的实验动物自由活动而不会使管线发生缠结。其中微透析探头尤为重要，微透析探头有直线性探头、环形探头、同心型探头等不同的类型，目前普遍应用的是同心型探头，实际应用需根据具体组织和待测物选择不同的微透析探头。
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1.3操作过程 以脑微透析为例，腹腔注射10%水合氯醛3.5mL/kg麻醉，待大鼠麻醉后俯卧位固定于大鼠脑立体定位仪上，调整门齿高度，保持平面低于两耳间线2.5毫米，去除术野区毛发，在大鼠两耳连线中点后0.5厘米处纵行剪开长约1厘米开口，钝性剥离帽状腱膜，暴露颅骨，保持创面清洁无出血，将微透析探针固定于脑立体定位仪上，定位矢状缝为原点，读取坐标，调整定位仪定位于所需透析位置，用铅笔做标记，移开定位仪，用牙科微型钻在其旁边钻两个孔，与标记点形成三角形，但不要穿透脑膜，将两个孔分别拧上螺丝，起固定作用，再在标记点处垂直钻开直径约为1.0毫米的孔，轻轻挑破硬脑膜，移回定位仪，重新定位坐标，将定位仪向下调整至所需检测位置，埋植微透析管，同时将牙科水泥配置好后固定微透析管套，将创面全部覆盖，以防感染，3-5分钟后，水泥石化后，撤掉立体定位仪，将探针插入套管内与透析仪连接，将大鼠置于碗状容器内，开启冷却收集器，平衡2小时后，开始收集透析液。操作注意事项：①时刻保持术野区创面清洁无出血，防止探针堵塞，影响探针回收率。②大鼠不同品系、体重差异侧脑室定位存在偏差（具体定位参考The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates，6th）。③配置牙科水泥最好时间是与向下调整定位仪同时进行。④透析取样时注射泵内为Rniger液，操作结束后，注射泵内换为超纯水，将探针至于支架上，下面管内放置超纯水与肝素（1：1），冲管30分钟后，将管内置换成超纯水，过夜冲管，防止管道堵塞。⑤为了使测量探针回收率更准确，室温和大鼠的体温应该是一致的，所以一般实验室温度都会控制在37℃左右[3、4]。
2.微透析技术在针灸治疗脑梗死作用机制研究中的应用
大量研究已证实，紊乱的神经递质是导致脑梗死损伤的重要因素之一。徐鸣曙等[5]采用微透析-高效液相-电化学检测法，发现电针脑缺血再灌注模型大鼠风池穴后纹状体内多巴胺含量在15-45min和灌注后0-30min出现两个峰值。郭真真等[6]通过实验研究发现电针预处理对脑缺血再灌注有保护作用，可能与调节缺血区纹状体谷氨酸和γ-氨基丁酸的浓度有关。俞晨[7]等应用微透析技术研究大鼠脊髓损伤后大脑中枢谷氨酸和天门冬氨酸含量水平的变化，结果显示：微透析技术可以较好地检测脊髓损伤后脑内谷氨酸和天门冬氨酸水平的动态变化。王慧[8]等采用微透析结合高效液相检测技术收集大鼠针刺"神门”和"命门”穴前、针刺后中缝背核细胞外液，观测其5-HT、NE、DA 及HVA 含量的变化，结果显示：针刺"神门”和"命门”穴中缝背核组织中5-HT、NE及HVA 的含量明显降低。以上研究表明微透析技术是研究神经递质变化的重要检测手段之一。
3.小结
尽管微透析技术问世30多年以来取得了飞速的发展，特别是对很多难溶性大分子物质也完成了实时和在线监测，但仍旧存在着许多缺点，例如：①微透析探针的置入会对组织形成一定的损伤，并可能引起微生物感染，作为一种有创的检查手段，想要应用于临床，也较难得到病人及家属认可。②微透析仪本身和所需用品，特别是探头的价格相对昂贵，许多实验室无法负担昂贵的研究费用。③探针相对回收率低，每次取样均需测定探针的回收率。④由于采集的样品量少、浓度极低，对检测提出巨大挑战，现只有高效液相色谱仪、毛细管电泳等少数高端分析仪器可以用于检测。近年来，除了对药代动力学和植物的研究，人们越来越重视微透析研究脑神经学领域方面的应用，目前微透析技术在应用于针灸治疗脑梗死机制的研究中主要研究兴奋性、抑制性氨基酸，单胺类神经递质及乙酰胆碱等物质，由于实验指标差异较大，目前仍然没有明确针灸治疗脑梗死的机制。在脑内神经学领域微透析技术已经显现出其强大的生命力，随着该技术的不断完善和发展，相信它在疾病的诊断、药效学、监测及治疗等方面会有更广阔的发展前景。
参考文献：
[1]郑巧玲，张文渊，李焕德.微透析采样技术及其相关分离检测方法研究进展[J].中南药学，2010，10：754-762.
[2]樊官伟，高秀梅.微透析技术及其应用进展[J].时珍国医国药，2006，09：1781-1782.
[3]ChanJK，ManuelMR，CiaravinoG，etal.Safetyandefficacyofthalidomideinrecurrentepithelialovarianandperitonealcarcino-ma[J].GynecolOncol，2006，103（3）：919-923.
[4]DownsLSJr JudsonPL ArgentaPA etal.Aprospectiveran-domizedtrialofthalidomidewithtopotecancomparedwithtopote-canaloneinwomenwithrecurrentepithelialovariancarcinoma[J].Cancer，2008，112（2）：331-339.
[5]徐鸣曙，葛林宝，徐佳.Dynamic Study of the Effect of Electroacupuncture on Dopamine in the Striatum for Rats with Cerebral Ischemia and Reperfusion[J].Journal of Acupuncture and Tuina Science，2008，05：295-297.
[6]郭真真，吴毅，贾杰，吴志远，李明芬.电针预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠谷氨酸和γ-氨基丁酸的影响[J].实用老年医学，2013，03：202-207.
[7]俞晨，徐又佳，张志琳，董启榕，郑祖根，张震东，马勇，高慧.脑微透析法研究大鼠脊髓损伤后脑内兴奋性氨基酸的动态变化[J].苏州大学学报（医学版），2006，06：923-926.
[8]王慧，王旭，唐卉凌，白丽敏.微透析法研究针刺后中缝背核单胺类神经递质含量的动态变化[J].中国中医基础医学杂志，2012，03：301-303.
作者简介：孙艳（1992-），黑龙江中医药大学针灸推拿学硕士研究生。
论文作者:孙艳
论文发表刊物:《健康世界》2015年26期供稿
论文发表时间:2016/4/12
标签：技术论文; 探针论文; 针灸论文; 大鼠论文; 脑梗死论文; 神经论文; 谷氨酸论文; 《健康世界》2015年26期供稿论文;