（宿迁市食品药品检验所 223800）
【摘要】 目的：建立了复方依那普利非洛地平缓释片中非洛地平和依那普利的含量，为复方非洛地平缓释片的质量控制提供一定的参考。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为kromasil 100-5 C8(4.6*250mm，5um);检测波长：215nm；柱温：40℃；进样量：20ul；流速：1.0ml/min。流动相：A相(3.0g 磷酸二氢钠和2.0g 二烷基硫酸钠溶于800ml 水中，用稀磷酸调pH 值至2.2，再加水稀释至1000ml，摇匀)-B相(乙腈)=40:60。结果：辅料和空白溶剂不干扰主峰的含量测定，非洛地平和依那普利的线性范围分别为5.11~51.05μg/ml和5.16~ 50.55 μg/ml，进样精密度和重复性良好，回收率从97.43%~101.67%，RSD均小于5.0%。结论：本方法简单、准确、灵敏，适合同时检测复方依那普利非洛地平缓释片中非洛地平和依那普利的含量。
【中图分类号】 R2 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-7165(2015)18-0191-02
非洛地平(felodipine) 是双氢吡啶类钙通道阻滞剂，可抑制小动脉平滑肌细胞外钙的内流，选择性扩张小动脉[1]。依那普利(enalapril) 是第2 代血管紧张素转换酶抑制剂，可以发挥血管紧张素转换酶抑制作用[2]。两药降压作用互补，联合使用时，可增强疗效、明显减少不良反应[3,4]。复方非洛地平缓释片是由依那普利和非洛地平组成，每片含非洛地平和马来酸依那普利各5 mg，其中非洛地平为缓释成分，马来酸依那普利为常规释放成分[4]。由本文建立了方向高效液相色谱方法，可同时测定非洛地平和马来酸依那普利含量，该法操作简便、灵敏、分离度好，适合同时检测复方依那普利非洛地平缓释片中非洛地平和依那普利的含量。
1 仪器与试剂
Waters e2695高效液相色谱仪(沃特世公司，美国)，配置四元泵、自动进样器和柱温箱，UV检测器；XS205十万分之一电子天平(Mettler-Toledo公司，瑞士)；纯水仪：Milli-Q纯水系统(Millipore公司，美国)；MP220型酸度计(Mettler-Toledo公司，瑞士)；WH-866型旋涡混匀器(江苏太仓华利达实验室设备公司)；UV2450紫外分光光度计(岛津公司，日本)。
复方非洛地平双层缓释片，江苏联环药业股份有限公司；马来酸依那普利和非洛地平对照品，中国食品药品检定研究院；甲醇和乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠和磷酸均为分析纯。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱：kromasil 100-5 C8(4.6*250mm，5um);检测波长：215nm；柱温：40℃；进样量：20ul；流速：1.0ml/min。流动相：A相(3.0g 磷酸二氢钠和2.0g 二烷基硫酸钠溶于800ml 水中，用稀磷酸调pH 值至2.2，再加水稀释至1000ml，摇匀)-B相(乙腈)=45:55，0.45um微孔滤膜过滤。
2.2 溶液配制
2.2.1 对照溶液配制
分别精密称取马来酸依那普利和非洛地平对照品各10mg置同一100ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液。
2.2.2 样品溶液配制取本品20 片，研磨均匀，精密称取细粉适量(约相当于马来酸依那普利和非洛地平各5mg)，置50ml 量瓶中，加甲醇适量，超声5min，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml 置50ml 量瓶中，加0.5%的十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.2.3 空白溶剂及空白辅料溶液配制空白溶剂为流动相。精密称取相同的处方比例辅料，同法制得空白辅料溶液。
2 .3 标准曲线的制备
分别精密吸取对照品储备液, 用0.5%的十二烷基硫酸钠溶液配制成含非洛地平和依那普利约为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、50μg/mL 的系列标准对照溶液。2.4 进样精密度
以浓度约为0.1 mg/mL 的混合对照品母液进行进样精密度试验，连续进样6针，记录峰面积，计算峰面积RSD值。
2.5 重复性试验
精密称取同批号样品6 份，按“2.2.2”项下方法操作，制得6 份供试品溶液，各吸取20 μl 进样，注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算含量。
2.6 加样回收试验
精密称取复方非洛地平缓释片细粉适量(约相当于1 .0 mg 非洛地平和1.0mg依那普利)9份，置不同的100 mL 棕量瓶中，加入甲醇适量，再精密加入浓度约为0.1 mg/mL 的混合对照溶液5 mL、10 mL、20mL，各三份，超声5min后，放冷，用0.5%的十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得加样回收样品溶液。
2.7 稳定性试验
将供试品溶液室温放置 分别在0、1、2、4、6、8、12h 进样20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积RSD值。
2.8 样品测定
同时进样供试品溶液和同浓度对照品溶液各20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，外标法样品中非洛地平和依那普利的含量。
3 结果
3.1 专属性
通过进样空白溶剂、空白辅料和样品，我们发现辅料和空白溶剂不干扰主峰的含量测定，且两个组分之间分离度良好，各峰塔板数较高，峰型较对称。
3.2 线性和范围
将逐级稀释的系列对照溶液分别进样20 μL，测定峰面积，以浓度(ug/L)为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并进行线性回归，得到回归方程和相关系数。同时逐倍稀释，以各峰信噪比(S/N)≈3时的浓度作为检测限。结果发现非洛地平回归方程为：y=186.79x-61.81；依那普利回归方程为：y=524.63x+251.75。相关系数均大于0.9990，线性范围分别非洛地平5.11~51.05μg/ml，依那普利5.16~50.55μg/ml。依那普利的检测限为0.02μg/ml，非洛地平为0.08μg/ml，检测灵敏度高。
3.3 进样精密度
各对照品峰面积RSD值均小于5%，表明方法进样精密度良好。
3.4 重复性
对六个样品进行含量测定，非洛地平含量范围为9 8 . 2 5 % ~ 1 0 1 . 2 5 % ，R S D 为1 . 0 5 % ；依那普利含量范围为98.11%~100.96%，RSD为1.10%。表明方法重复性良好。
3.5 回收率
各对照品回收率从97.43%~101.67%，RSD均小于5.0%，表明方法准确度良好，详见表1和表2。
3.6 稳定性
样品室温放置0、1、2、4、6、8、12h，各时间点峰面积变化不大，RSD值分别为1.31%和1.50%，表明样品溶液在12h内比较稳定。
3.7 样品测定
采用拟定方法对连续三批样品进行测定。结果发现各批含量均符合要求，各批差异较小，批间重复性较好，详见表3。
表3 复方非洛地平缓释片含量测定结果
添加剂种类 葡萄酒1 葡萄酒2 葡萄酒3
非洛地平 99.87% 99.25% 1 100.24%
依那普利 99.26% 100.51% 99.58%
4 讨论
4.1 检测波长的选择
通过对非洛地平和依那普利在200～400 nm 波长范围内进行紫外扫描后发现，非洛地平在210nm、238 nm、361 nm 波长处均有最大吸收，依那普利在结果显示马来酸依那普利只在205 nm 处有一末端吸收, 且吸收峰的下降段延续到250 nm 处。考虑到方法的灵敏度和乙腈的截止波长，我们最终选择对两者都有较大吸收的215nm作为本方法的检测波长。
4.2 样品制备方法
本品中马来酸依那普利溶于水，易溶于甲醇；非洛地平不溶于水，易溶于乙腈、甲醇和乙醇[5]。本品的剂型特点是双层片，由速释部分马来酸依那普利层和缓释部分非洛地平层组成。其中，组成缓释部分的辅料遇水后溶胀，黏度极大，不易过滤，且缓释部分的组分非洛地平不溶于水。因此，配制样品时，不宜先用水或含水的溶剂(流动相)溶解样品，避免造成非洛地平溶解不完全和样品粘度大，不易过滤的现象。
4.3 流动相的选择
由于马来酸依那普利和非洛地平两者极性相差较大，流动相中加入十二烷基硫酸钠， 起到离子对色谱的作用，使马来酸依那普利和非洛地平能够与辅料、溶剂峰达到较好分离， 从而能够同时测定非洛地平和马来酸依那普利的含量。
4.4 溶液温度性
非洛地平见光不稳定，所有操作均需在避光条件下进行[6]。供试液在室温条件下放置12 h(避光)，含量未见变化，可以满足测定要求。综上所述，本方法简单、准确、灵敏，适合同时检测复方依那普利非洛地平缓释片中非洛地平和依那普利的含量。
参考文献
[1] 杜丽娜.非洛地平[J]. 临床药物治疗杂志，2004，2(1) : 46-50.
[2] 张优佳. 血管紧张素转换酶抑制剂在治疗非ST段抬高急性冠脉综合征中的作用[J].中国医学工程，2013,1:234-235.
[3] 王顺，燕妮，袁祖贻.复方非洛地平缓释片治疗轻中度原发性高血压患者的有效性及安全性随机双盲临床试验[J].中华高血压杂志，2012, 20( 2) ：146-151.
[4] 刘善军，周文佳，黄艳，等. 复方依那普利非洛地平缓释片在健康中国人体内的药动学特征[J]. 药学进展，2013, 37( 1) ：31-38.
[5] 杨光，李志平，刘燕，等. 高效液相色谱法测定复方非洛地平缓释片的含量及有关物质[J]. 中国药学杂志,2015,50(6):536-541.
[6] 李杰. 反相高效液相色谱法测定非洛地平缓释片的含量[J]. 长治医学院学报, 2008，20(1):27-28.
论文作者:葛须娴
论文发表刊物:《医师在线》2015年18期
论文发表时间:2015/11/6
标签：非洛地平论文; 依那普利论文; 马来论文; 溶液论文; 含量论文; 复方论文; 色谱论文; 《医师在线》2015年18期论文;