【关键词】中药葛根；酒精；生殖毒性
葛根为豆科植物野葛的根茎，性凉味甘辛，具有疏气养肺、解表退热、生津透疹的功效 [1]。近年来，医学界发现葛根对于酒精性中毒具有明显的治疗效果[2]。葛根内含有丰富的葛根素[5],能加速酒精代谢、分解的目的[6]。据报告显示，酒精性中毒在我国的发生率非常高，每年都有超过200万的患者需要接受住院治疗[7]，而葛根能对酒精性中毒起到治疗效果且疗效较优，故临床中也经常会将基础治疗和葛根治疗相结合[8]。本文针对葛根对酒精毒性具有解毒作用，探讨其对酒精致生殖毒性是否具有一定的保护作用从而改善睾丸的生精水平。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取35只体重相近的健康雄性小鼠，全部采用普通饲料和自来水喂养小鼠，每天同一时间称重、灌胃各1次。随机挑选7只为酒精组，剩余的28只为空白组和治疗组。
1.2实验材料
鼠笼，鼠盒，生理盐水，中药葛根，电子天平，玻璃皿，眼科剪，离心机，10%甲醛，恒温水浴箱，1%伊红染液，精子活力测试盒，饲料，江小白，灌胃针，注射器。
1.3方法
①动物模型的建立及处理
将35只体重相近的健康雄性小鼠分5组实验组，依次分为空白组(A组）7只，白酒（酒精度为45%）模型组（B组）7只，三组治疗组21只（先用葛根再用酒精组（C组）7只，先用酒精再用葛根组(D组）7只，葛根与酒精一同使用组（E组）7只，葛根与酒精一同使用组7只，给药剂量为2ml/d）, 每天同一时间称重、灌胃各1次，持续五周，全部采用普通饲料和自来水喂养小鼠，实验组与对照组培养条件一致。采用灌胃法给药，通过预实验确定较佳的酒精浓度和剂量。
②取材及指标的检测
1.取材
第五周晚上开始禁食，停药24小时后进行实验，乙醚麻醉，颈椎脱臼法处死小鼠，称重，解剖取材，取双侧附睾和睾丸，用PBS(磷酸盐缓冲液)冲洗干净，放入盛有4ml生理盐水的小烧杯中，以眼科剪剪碎组织，混匀。
2.测定指标及方法
主要观察指标：小鼠的形态检测、睾丸、附睾脏系数测定、精子质量的检测、精子细胞畸形率、精子活力检查与评级。
2.1小鼠一般状况观察：观察其毛发、行为、粪便等一般外貌状况，记录是否有异常情况出现.
2.2 睾丸、附睾脏系数测定
取同侧睾丸、附睾，仔细剔除表面的结缔组织，用PBS(磷酸盐缓冲液)冲洗干净滤纸吸干，精密天平称重，计算脏器系数.睾丸脏器系数=（睾丸重量/体重）×100；附睾脏器系数=（附睾重量/体重）×100。
2.3精子悬液的制备
将睾丸和附睾放入盛有1ml37℃生理盐水，预温的玻璃皿中，用眼科剪快速剪碎，移入离心管中，吹打混匀，制成精子悬液。
2.4 精子质量的检测
将悬液置于37℃水浴箱中孵育15min，使精子充分游离，用做精子质量的检测。
2.5精子细胞畸形率
调节加样器吸取40μl精子悬液滴在载玻片上，然后用加样吸头侧向轻轻将悬液推开，让其自然晾干。用10%甲醛固定10min后，再自然晾干。然后将载玻片放入含有1%伊红染液的染色缸中染色，染色1h后将载玻片取出并用自来水冲洗，自然晾干，最后，在化学显微镜下观察精子的形态，每只小鼠观察1000个精子。精子畸变类型包括无钩、香蕉、无定形、胖头、双头、双尾、折尾等。无尾精子、头部重叠或整个精子与另一个重叠的均不计数，判断双头、双尾的精子时，要注意区别两条精子部分重叠在一起，计算精子畸形率（‰）
2.6 精子活力检查与结果判定
取一滴精子悬液充入红细胞计数板内，静止两分钟，用高倍镜（X400）进行观察精子活力，用精子活力试剂盒检测精子凋亡水平，对精子活力进行评级.精子活动能力分级标准如下:a.快速直线运动，为活动良好；b.运动活泼但方向不定，不成直线运动活动为一般；c.精子运动迟缓，原地摆动为活动不良；d.原地静止不动为静止.计算精子活动率：精子活动率（%）=（a+b+c）100/200
3.实验结果统计学分析
实验所得数据用x±s表示，均数的比较采用单因素方差分析，率的比较用T检验。用SPSS21.0软件进行统计处理，P<0.05为差异有显著性意义。
4.结果
4.1酒精对雄性小鼠一般状况的影响
酒精染毒3-8h内，B组雄性大鼠活动减少反应迟钝，步态不稳，进食量减少，并随染毒期延长上述症状逐渐加重；而A、C、D、E组雄性大鼠动作活跃，反应灵敏，毛色有光泽且进食充足。
4.2酒精对雄性小鼠睾丸指数的影响
表1显示，B组小鼠体重明显减轻，差异有统计学意义（p＜0.05），睾丸指数无统计学差异（p＞0.05）。
表1 雄性小鼠体重及睾丸指数测定结果
.png)
5.讨论
近年来，医学界发现葛根对于酒精性中毒具有明显的治疗效果[2]。据报道，男性阳萎、睾丸萎缩常与酒精中毒有关，性功能障碍为8%-58%。 有研究表明，酒精对人体生殖细胞的损伤是导致受孕机会下降和出生缺陷的重要原因之一[11]，母亲孕期过量饮酒会致胎儿酒精综合征, 而男性酗酒导致性功能减退并影响后代发育 [12,13] 。国内文献指出，酒精对雄性大鼠精子数量及质量均有比较明显的毒性作用[14,15]，长期、大量的酒精摄取会导致睾丸萎缩、性腺分泌失常[16],消化道系统紊乱使得某些维生素缺乏, 造成生精上皮发育不良, 因此不能产生精子[17]。
葛根属草本中药，具有三大功效，即降火排毒、生津止渴、解表退热 [2]，对于酒精性中毒具有明显的治疗效果[3]，为常用药物[4]。葛根内含有丰富的葛根素[5],能加速酒精代谢、分解的目的[6]。据报告显示，酒精性中毒在我国的发生率非常高，每年都有超过200万的患者需要接受住院治疗[7]，而葛根能对酒精性中毒起到治疗效果且疗效较优，故临床中也经常会将基础治疗和葛根治疗相结合[8]。有相关研究证实，葛根既可以显著改善患者的中毒症状，还可以减轻患者的经济负担，提高患者生存质量及临床疗效[9]。此外，中药葛根治疗方式价格低廉，效果突出，开发研究空间很大，值得在临床上推广使用[10]。
本实验发现，酒精可使雄性小鼠进食量减少，体重减少明显。酒精组精子计数、活动率与其他组比较均显著减少，畸形率增加。以上结果表明酒精对雄性小鼠精子数量及质量均有明显的毒性作用，与国内外相关研究报道基本一致[1,6]。综上所述，中药葛根对酒精生殖毒性有一定的保护作用。
5.参考文献
[1]傅鹏.H98遗传毒性及生殖毒性实验研究[D].天津医科大学，2004.
[2]曾敏.中药葛根治疗酒精性中毒的药效及药理研究[J].环球中医药，2013，6（Z2）：57-58.
[3]田维毅，王文佳，韩洁，等.葛根散等首解酒方对急性酒精中毒小鼠Caspase3/8 活性的影响[J].中成药，2012，34（11）：2233-2236.
[4]毛英群.葛根素注射液治疗重度急性酒精中毒30例[J] ．中医研究，2011,24(06)：41－43．
[5]谷长秀 , 刘涛 . 中药葛根治疗酒精性中毒的药效及药理分析 [J]. 中外女性健康研究 ,2016,10(6):180-180.
[6]谢明亮，王位萍.葛根的药理作用和临床应用进展[J].中外妇儿健康，2011，19（6）：329.
[7]孙霞 ． 葛根素治疗慢性酒精中毒68例疗效观察[J] .临沂医学专科学校学报,2005,04(02)： 76－77．
[8] 刘南，等葛根注射液治疗急性酒精中毒82例[J].实用中医药杂志,2000 ，12(01)：101－102．
[9]高学清，汪何雅，钱和，等 . 葛根和葛花对急性酒精中毒小鼠的解酒作用〔J〕. 食品与生物技术学报，2012，5(02):68-69.
[10]苏慕霞，叶冰，邓青，李霓冰，谭苑芬.中药葛根治疗酒精性中毒的药效及药理分析[J].中医中药.2012.1（16）：156.
[11]刘长云, 卢映, 杨利丽,等 .酒精致雄性大鼠生殖细胞损伤的实验研究[ J] .中国计划生育学, 2004,(4):217.
[12] Villalta J, Ballesca J L, Nicolas J M , et al.Testicularfunction in asymptomatic chronic alcoholics:rela-tion to ethanol intake[ J] .Alcohol Clin Exp Res,1997, 21(1):128-134.
[13]Ledig M , Misslin R, Vogel E, et al.Pateral alcoholexposure:developmental and behavioral effects onthe offspring of rats[ J] .Neuropharmacology , 1998,37(1):57-66.
[14] Villalta J, Ballesca J L, Nicolas J M , et al.Testicularfunction in asymptomatic chronic alcoholics:rela-tion to ethanol intake[ J] .Alcohol Clin Exp Res,1997, 21(1):128-134.
[15]马明月.乙醇对雄性小鼠精子生成的影响[ J] .工业卫生与职业病, 2000, 26(4):209-212.
[16]Villalta J,Ballesca J L,Nicolas J W,et al.Testicular function in asymptomatic
chronicAlcoholics:relation to ethanol intake [J].Alcohol Clin Exp
Res,1997,21(1):128-134.
[17]马明月，乙醇对雄性小鼠精子生成的影响[J].工业卫生与职业病，2000,26（4）:209-212.
论文作者:石朝阳
论文发表刊物:《医师在线》2019年22期
论文发表时间:2020/1/9
标签：葛根论文; 精子论文; 酒精论文; 小鼠论文; 睾丸论文; 雄性论文; 毒性论文; 《医师在线》2019年22期论文;