1.大连大学附属新华医院药剂科 辽宁大连 116021；2.大连大学附属新华医院普通外科 辽宁大连 116021
摘要：目的 研究五味子乙素对裸鼠结肠癌肝转移模型的影响。方法 将20只结肠癌肝转移模型裸鼠随机分为4组，分别为模型对照组（MC）组、高浓度Sch B（40mg/kg，HSB）组、低浓度Sch B（10mg/kg，LSB）组、紫杉醇（PTX）组。测定各组肝转移评分和腹腔内淋巴结肿大情况，并病理学方法明确有无癌细胞。结果 裸鼠结肠癌肝转移模型制作后注药过程观察，发现各组裸鼠状态良好。HSB组和LSB组肝转移评分明显低于MC组，差异有统计学意义（P<0.05）。HSB组无腹腔内淋巴结肿大，但MC组腹腔内有淋巴结肿大，病理证实淋巴结转移，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 五味子乙素有良好的抗肿瘤活性，实验证实对肝转移有明显的抑制作用。
关键词：五味子乙素；裸鼠；结肠癌肝转移
五味子乙素（Sch B）是从中药五味子中提取的一种活性物质，属木脂素类化合物。近年来，对Sch B药理活性的研究显示，Sch B具有抗肿瘤作用[1]，但对其作用机制的研究却甚少。本课题以动物实验的方式，研究Sch B对肝转移抑制作用的影响。
1 材料和方法
1.1 材料 Sch B购于中国药品生物制品检定所；人结肠癌细胞株LoVo由大连大学分子生物学教研室传代捐助；BALb/c品系裸鼠20只，7周龄雌性，体重18～20 g，从大连医科大学实验动物研究中心购买。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养及悬液制备 人结肠癌细胞株LoVo在37 ℃、5% CO2，含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中传代培养，每2～3天换1次培养液。培养至80%～-90%融合时，用0.25%胰酶消化液消化后，1000 rpm离心3 min，弃上清液，加无血清RPMI 1640培养液洗细胞2次，显微镜下计数。制备好的细胞悬液防冰浴保存，于30 min内进行接种。
1.2.2 结肠癌肝转移模型的建立[2]选取 5%水合氯醛 5 mg/kg 行腹腔内麻醉。常规消毒皮肤，取上腹正中切口约0.5 cm，入腹后小心显露脾脏，使脾中、下极拉出切口外，将31号针头从脾脏中央进针约5 mm 缓慢注入肿瘤细胞悬液至脾被膜下，注入2×106 LoVo细胞悬液50 μL。可见注射部位脾被膜发白肿胀，拔出针头同时即用止血小纱布轻按20 s。10 min后夹闭、切断脾脏两侧血管，完整切除脾脏，送回网膜等附件后，关腹。
1.2.3 实验分组 模型建立后第3天，裸鼠随机分4组，分别为模型对照组（MC）组、高浓度Sch B（50mg/kg，HSB）组、低浓度Sch B（10mg/kg，LSB）组、紫杉醇（PTX）组。注药方式为腹腔内注射，隔日1次，注射体积为200 μL，连续注射4周。
1.2.4 结肠癌肝转移评分标准 0为无肝转移；1为最低限度浸及肝脏，浸润范围＜0.5 cm2；2为轻度浸及肝脏，浸润范围0.5～1.0 cm2；3为中度浸及肝脏，浸润范围 1.0～2.0 cm2；4为重度浸及肝脏，浸润范围＞2.0 cm2。
1.2.5实验观察指标：每天常规观察记录裸鼠状态，模型建立后30天各组裸鼠给予脱颈处死。出现频死前症状或观察期满3周或6周时予以处死。首先解剖观察腹腔内肝转移情况，其次观察有无腹腔内淋巴结肿大，同时观察胸腔内、颅内转移瘤情况。所有肉眼可疑部位照相并取材，行病理学检查。
1.3统计学处理 所有数据以均数±标准差表示，组间比较用t检验。
2 结果
2.1 裸鼠结肠癌肝转移模型制作安全性和可靠性
裸鼠结肠癌肝转移模型制作后注药过程观察，发现各组裸鼠状态良好。特别是腹壁注射部位无血肿、瘀斑、周围感染等不良反应。
2.2 Sch B对裸鼠结肠癌肝转移模型的影响
HSB组和LSB组肝转移评分明显低于MC组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。HSB组无腹腔内淋巴结肿大，但MC组腹腔内有淋巴结肿大，病理证实淋巴结转移，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。HSB组与PTX组肝转移评分比较，发现无显著差异（P>0.05）。
3 讨论
Sch B属木脂素类，是五味子的主要活性成分之一。五味子抗肿瘤作用主要集中在木脂素和多糖部位[3]。Sch B除了具有抗氧化和抗衰老的作用外，还可以通过诱导肿瘤细胞分化及凋亡、逆转肿瘤细胞多耐药性、增加其他抗肿瘤作用的敏感性、抑制肿瘤血管生成等机制来抑制肿瘤的生长和转移[4]。由于对Sch B的抗转移研究的报道仍稀少，因此我们对Sch B抗转移作用进行研究，发现其与抗癌药PTX无显著差异。我们的研究证实，Sch B具有较好的抗肿瘤、抗转移作用，但其作用机制有待进一步评价和证实。
目前对五味子粗提物药理作用的研究较多，但对Sch B的抗肿瘤机制研究还不够系统、深入。为了开发和寻找疗效好，毒副作用小的抗肿瘤药物，诸多学者应对Sch B越来越重视，对其作用机制、合理剂量以及毒副作用等研究也要更加完善，为其抗癌制剂的研发奠定良好的基础。
总之，Sch B可能通过不同的途径发挥其抗肿瘤的作用。本研究在动物转移模型中，分析了Sch B对抗肿瘤、抗转移的影响，进一步肯定了Sch B的价值。
参考文献：
[1]任佳丽，李林.五味子抗肿瘤活性成分及作用机制研究进展.中国药理学通报[J]，2012，28（1）：140-142.
[2]刘福全，王建，赵雪峰.裸鼠人异位移植胃癌肝转移和腹膜转移模型的实验研究[J]，大连医科大学学报.2014，36（5）：435-439.
[3]郑占虎，董泽宏，余靖.中药现代研究与临床应用：第一卷[M]，北京：学苑出版社，1997：148-156.
[4]吴海星，候晓节，齐玲，等.五味子乙素抗肿瘤的多种作用机制[J]，吉林医药学院学报，2012，33（2）：107-110.
论文作者:赵美兰,宋良权,张岩,赵雪峰
论文发表刊物:《健康世界》2014年22期供稿
论文发表时间:2016/4/7
标签：作用论文; 模型论文; 结肠癌论文; 抗肿瘤论文; 大连论文; 脾脏论文; 统计学论文; 《健康世界》2014年22期供稿论文;