韩永俊[1]2007年在《鸭肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗原、抗体方法的建立》文中认为鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis，DVH)是6周龄以下雏鸭的一种急性、接触性、高度致死性的烈性传染病，病原为鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus，DHV)。该病在国内雏鸭群中频频发生，给养禽业生产造成了极大的损失。本实验从一群发病鸭的病料中分离到一株鸭肝炎病毒，并建立了检测鸭肝炎病毒抗原和血清抗体的ELISA快速检测方法，取得了如下结果：1．鸭病毒性肝炎病毒株的分离鉴定及部分理化特性的研究对湖北省内某疑似鸭病毒性肝炎感染鸭病料的收集，通过细菌分离、病毒分离、中和试验、动物回归试验、雏鸭保护试验以及病毒的电镜观察，分离到一株鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒株，对分离毒株的部分生物学特性进行了初步研究。2．鸭病毒性肝炎血清抗体ELISA快速检测方法的建立和初步应用将通过鸭胚传代的病毒经过纯化后，作为包被抗原，建立了一种检测血清中DHV抗体的间接ELISA方法。通过对ELISA反应条件的系列测定，确定了各组分的最适工作条件：抗原包被浓度为3.75μg，血清稀释约1∶160时，阳性血清OD450值(P)接近1.0，阴性血清值(N)为0.125，P／N值最大．阴性和阳性分界明显；通过对40份阴性鸭血清的检测结果，确定阴阳性临界点为0.2。根据建立的ELISA方法及最佳反应条件，检测了一批雏鸭携带母源抗体及其消长情况以及一批免疫雏鸭的抗体消长情况。结果表明，本试验建立的间接-ELISA法可用于鸭血清中鸭肝炎病毒抗体水平的检测以及未免疫鸭群鸭病毒性肝炎感染情况的检测。3．鸭病毒性肝炎病毒双抗体夹心ELISA快速检测方法的建立和初步应用以纯化的鸭抗DHV IgG为包被抗体，兔抗DHV IgG为第二抗体，通过ELISA反应条件的优化选择，建立了检测DHV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸭抗DHV IgG的最佳包被浓度为约2μg／ml，兔抗DHV IgG的最适工作浓度约为3.4μg／ml；与已知鸭病毒性肝炎标准病毒呈强阳性反应，与已知的阴性样品及其它禽类病毒(NDV、IBV、DP、MDPV、IBDV、MDV)无交叉反应；用建立的ELISA方法对97份疑为鸭肝炎的病料进行了检测，结果有73份呈阳性。经过比较测定，夹心ELISA法要比琼脂免疫扩散方法要敏感64倍，说明本方法在检测鸭病毒性肝炎病毒抗原方面具有特异性强、敏感性高的特点。
陈海军[2]2007年在《鸭肝炎病毒人工感染雏鸭病理发展规律及免疫组化与免疫荧光检测病原侵染规律的研究》文中研究表明本文围绕鸭肝炎病毒分离鉴定、人工感染疾病模型病理学、抗原定位的免疫组化(荧光)方法及其病毒侵染感染鸭组织规律等开展系列研究：①爆发流行鸭病毒性肝炎病毒分离鉴定；②鸭病毒性肝炎病毒人工感染鸭病理学发展规律研究；③检测石蜡切片中鸭病毒性肝炎病毒的免疫组化、免疫荧光方法建立及其病毒侵染感染鸭组织在抗原定位的应用。获得如下结果：1．爆发流行鸭病毒性肝炎病毒分离鉴定：2006年四川成都、西昌等地爆发流行具有鸭病毒性肝炎(DVH)典型临床症状和病变的传染病，从间接免疫荧光检测呈阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒，电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜，直径30-40nm，对氯仿、pH3.0、50℃60min的处理不敏感，分离毒连续传代3次，全部鸭胚在24-60h死亡，胚体呈弥散性充血、出血，其致死鸭胚的能力能够被Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV)高免血清中和。分离毒人工感染1日龄雏鸭后出现与自然病例相同的临床症状和病理变化，并能重新分离到相同病毒。间接免疫组化检测自然病例和人工感染雏鸭的肝、脾、肾等均出现阳性结果。结果表明分离到的3株病毒均为Ⅰ型DHV，为DVH有效预防提供了有用的实验数据。2．鸭病毒性肝炎病毒人工感染鸭病理学发展规律研究：本研究采用肌注、口服和滴鼻3种途径感染1日龄雏鸭DHV-XC，成功复制了鸭病毒性肝炎的病理模型。3种感染途经的雏鸭均出现以下病变：肝脏在早期发生出血性坏死性肝炎，后期呈现胆管增生性病变；肾小管上皮细胞坏死及异假嗜伊红白细胞浸润；脾脏组织充血出血及淋巴细胞坏死；胰组织也出现胰腺细胞的局灶性坏死及嗜酸性染色，并且出现炎性细胞浸润；心脏心肌细胞的空泡变性及弥散出血；胸腺和法氏囊的淋巴细胞的坏死；接种后各时期脑组织呈现毛细血管充血；肠道和哈氏腺毛细血管充血和部分粘膜上皮的脱落。3．检测石蜡切片中鸭病毒性肝炎病毒的免疫组化、免疫荧光方法建立及其病毒侵染感染鸭组织在抗原定位的应用①检测石蜡切片中鸭病毒性肝炎病毒的免疫组化方法建立及其病毒侵染感染鸭组织在抗原定位的应用：以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)免疫兔制备兔抗DHV-Ⅰ抗体，建立了间接免疫酶染色(ⅡS)检测石蜡组织切片中的DHV-Ⅰ抗原的方法。结果表明建立的HS与DHV-Ⅰ感染死亡或濒死雏鸭的肝脏等出现阳性反应，与鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌感染发病和死亡雏鸭的肝脏以及健康雏鸭的肝脏出现阴性反应。感染雏鸭机体内病毒抗原的动态分布结果，间接免疫过氧化物酶染色检测DHV结果表明：接种12h后不同时间，在肝脏、脾脏、肾脏、胰脏、胸腺、肠道、肌肉和法氏囊组织中3个攻毒组均可检测到鸭肝炎病毒抗原，而部分死亡或濒临死亡的雏鸭肺脏、心脏、脑组织中检测到病毒抗原。病毒抗原均位于阳性细胞的细胞质中。经ⅡS检出的时间顺序，肌注组：肝脏、脾脏＞肾脏、十二指肠＞胰腺、肌肉、空肠＞心脏、胸腺、法氏囊、哈氏腺、回肠、盲肠、直肠＞肺、脑；口服组：肝脏＞脾脏、肾脏＞胰腺、胸腺、哈氏腺、法氏囊、肌肉、十二指肠、空肠、回肠、直肠＞盲肠＞心脏、肺脏＞脑；滴鼻组：肝脏＞脾脏、肾脏、肺脏＞胰腺、法氏囊、十二指肠、空肠＞胸腺、哈氏腺、肌肉、回肠、盲肠、直肠＞心脏、脑。②检测石蜡切片中鸭病毒性肝炎病毒的免疫荧光方法建立及其病毒侵染感染鸭组织在抗原定位的应用：间接免疫荧光检测DHV的结果与间接免疫过氧化物酶染色检测DHV结果相似，只是存在个体上的差异。
刘建[3]2004年在《鸭肝炎病毒的分离与检测》文中提出本实验通过鸭胚尿囊腔接种，对我国几个省市采集的12份死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，获得12个病毒分离株。这些分离株对10日龄鸭胚的致死率为100％，人工感染6日龄雏鸭的致死率为0-100％不等。死亡鸭呈角弓反张姿势，剖检可见肝脏肿大，有出血点或出血斑。将12株分离株经鸭胚传至第5代，收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD_(50)为10~(-7.32)／0.2ml-10~(-3.5)／0.2ml不等。用鸡抗1型DHV及新型DHV的血清和12株分离株进行中和试验，结果表明：有7株为新型DHV，有2株为1型DHV，还有3株无法确定其血清型。 通过对新型弱毒株(B株)进行鸭胚传代致弱后，稀释成不同倍数对1日龄雏鸭进行免疫，并于10日龄时用新型鸭肝炎强毒攻毒，观察雏鸭的死亡情况。由结果可知，B_(20)株在20倍稀释时，保护率达100％，而稀释到100倍时则完全失去保护作用。同时对免疫的雏鸭采血，中和试验测定血清的效价。免疫雏鸭在第10天时抗体水平达到高峰，然后呈逐渐下降趋势。结果表明，B株经过鸭胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留一定的免疫原性，可以作为疫苗的候选株。 此外，本实验用鸭胚肝细胞(DEL)培养了新型鸭肝炎病毒，并详细观察了鸭肝炎病毒引起的细胞病变，发现该病毒适于鸭胚肝细胞上培养。通过细胞免疫荧光染色，发现肝细胞本身自发荧光，不适于免疫荧光检测；采用感染新型鸭肝炎强毒后死亡鸭的肾细胞做滴片进行荧光染色，可检测到病毒抗原存在，为临床上快速诊断新型鸭病毒性肝炎提供一种检测方法。
施旭梅[4]2013年在《I型鸭肝炎病毒的分离鉴定及其全基因组序列分析》文中进行了进一步梳理鸭病毒性肝炎(Duck Virus Hepatitis, DHV)是一种以肝炎为主要特征的急性、烈性、高传染性及高致死性的病毒性传染病,简称鸭肝炎,主要引起3周龄以下的雏鸭发病。引起鸭肝炎的病原主要有3个血清型,Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型。这叁个血清型相互独立,无交叉免疫性。目前Ⅰ型鸭肝炎病毒在世界范围内发生和流行。近年来,随着不断有Ⅰ型鸭肝炎病毒变异株出现的报道,该病在临床症状和病理变化上与Ⅰ型鸭肝炎几乎无法区分,且不能用Ⅰ型鸭肝炎病毒的疫苗和高免抗体制剂进行预防和控制,严重危害了我国乃至世界各地养鸭业的健康发展,给养鸭业造成了巨大的经济损失。本研究对吉林省前郭县某野鸭场送检的雏鸭进行临床症状检查,具有Ⅰ型鸭病毒性肝炎的典型症状。制备肝脏等脏器病料滤液,进行电镜观察,观察到无囊膜病毒样粒子。通过鸡胚尿囊腔接种,将送检具有典型病变的病死雏鸭的肝脏组织进行病毒分离,获得病毒株。为研究其对鸭的致病性,开展动物回归试验,将获得的病毒株对6日龄的雏鸭进行攻毒,结果显示该毒株对雏鸭的致死率为90%。攻毒1d后雏鸭开始死亡,死亡时呈角弓反张姿势,病死雏鸭剖检变化具有典型的Ⅰ型鸭病毒性肝炎症状。中和试验结果表明,分离病毒株能与Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清发生中和反应,鉴定分离毒株为Ⅰ型鸭肝炎病毒。根据GenBank中已登录的Ⅰ型鸭肝炎病毒保守序列VPl基因设计了一对引物,采用RT-PCR试验方法成功扩增出目的片段,进一步确定其为Ⅰ型鸭肝炎病毒,命名为JL11株,为有效地开展Ⅰ型鸭病毒性肝炎的诊断和预防研究奠定了基础。根据GenBank中已发表的Ⅰ型鸭肝炎病毒03D株全基因序列(登入号为DQ249299.1),采用Primer Premier5.0软件设计并合成了覆盖整个全基因组的7对特异性引物。利用RT-PCR方法扩增出Ⅰ型鸭肝炎病毒JL11株全基因组的各个片段,将扩增产物进行纯化回收,送至上海生工生物有限公司进行测序,利用DNAStar等生物软件对序列进行剪切与拼接,获得全基因序列。结果表明,JL11株基因组全长为7638个核苷酸残基,不含poly(A)尾巴。用MEGA5和NCBI上的BLAST等功能与下载的其他Ⅰ型鸭肝炎病毒参考毒株的全基因序列进行同源性比较。结果表明,JL11株全基因组的核苷酸序列与其他参考毒株的核苷酸序列同源性为95%-99%；ORF核苷酸序列与其他参考毒株的核苷酸序列同源性在94.6%-99.5%(变异毒株除外),氨基酸序列与其他参考毒株的氨基酸序列同源性在97.7%-99.2%(变异毒株除外)。结果表明,Ⅰ型鸭肝炎病毒基因组的一级结构高度保守。根据各参考毒株和JL11株的全基因序列建立系统进化树,JL11株与其他Ⅰ型鸭肝炎病毒参考毒株大致可分为两大基因群,一群包括JL11株及中国、美国、韩国和英国等11株Ⅰ型鸭肝炎病毒,进化树显示,JL11株与ZJ株亲缘关系最近。二群只包含变异90D株。因此可知,分离到的JL11株应归类于传统的Ⅰ型鸭肝炎病毒。本研究通过对JL11株的全基因序列测定和分析,从基因水平上分析病毒的进化情况,了解其基因遗传演化特征,分析其基因型,为该病在预防控制和流行病学的研究奠定基础。
张丽[5]2008年在《河北省鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定及弱毒株培育》文中研究表明鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(DHV)引起雏鸭的一种传染病,具有发病急、传播迅速、病程短、病死率高等特点。本病在全国各地都有发生,是严重危害养鸭业的主要疾病之一,并常和其他病毒、细菌混合感染,严重影响了养鸭业,造成了巨大的经济损失。临床上主要表现为食欲减退、神经症状、突然死亡和肝脏肿大出血。病原有3种,其中Ⅰ型鸭肝炎病毒在世界范围内流行,Ⅱ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒分别局限于英国和美国。不同血清型毒株具有不同的理化和生物学特性,且无免疫交叉反应。近年来国内外报道了Ⅰ型鸭肝炎病毒的变异株,且已完成了病毒基因组的测序工作,并随之出现RT-PCR诊断技术,对雏鸭病毒性肝炎的诊断和防控具有重要意义。本研究通过鸡胚尿囊腔接种,对河北省保定地区采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得1个病毒分离株,命名为BD-Ⅰ株。该分离株经病理学检查、理化特性实验、中和试验、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV)。证实引起该鸭场雏鸭发病和死亡的主要原因为DVH所致。根据GenBank中已发表的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计了1对引物,建立了检测DHV-Ⅰ的RT-PCR方法,该法能从DHV-Ⅰ中扩增到506bp的条带。经敏感性、特异性检测,证实为DHV-Ⅰ的特异性条带,而新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸭瘟病毒(DPV)、番鸭细小病毒(MPV)、鸭病毒性肿头出血症病毒(DSHDV)、鹅细小病毒(GPV)均为阴性。最低检测浓度到128倍稀释的鸭肝毒(相当于500ELD_(50))。RT-PCR对河北保定地区的发病鸭群的13份鸭病毒性肝炎病料进行检测,其检出率为76.92%(10/13)。因此,所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速诊断。作者对实验室分离的鸭肝炎病毒经过鸡胚传代致弱后,收集鸡胚尿囊液毒不同含毒量对1日龄雏鸭进行免疫,并于14日龄时用新型鸭肝炎强毒进行攻毒保护试验,结果BD-Ⅰ-40株在500ELD_(50)时,保护率达100%。采集免疫的雏鸭血清,中和试验测定血清的效价,雏鸭在免疫后可检测到中和抗体,第14天时抗体水平达到高峰,然后呈逐渐下降趋势。结果表明,BD-Ⅰ株经过鸡胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留免疫原性,可以作为疫苗的候选株。
张继玲[6]2017年在《Ⅰ型鸭肝炎病毒的研究进展》文中研究表明在家禽疾病中,鸭肝炎病毒是比较棘手的一种疾病,这是由鸭型肝炎的发病特点决定的。鸭型肝炎的特点是发病急、传播速度快,一旦传播开来,患病的病死率很高,对于动物的生产和人们收入带来重大的影响。所以,鸭型肝炎病毒又列为鸭病的五大传染病之一。在鸭型肝炎病毒的传播过程中,其很高的变异性又阻碍了该病的治疗,对于鸭的养殖造成了极其大的危害,对于鸭的养殖业构成了严重的威胁。在养鸭集中区,这种病毒的危害非常明显;所以,针对鸭型肝炎的治疗研究有着十分重大的意义。随着基因技术的不断发展,病毒基因组的测序完成,鸭型肝炎的研究也有了进展,运用分子生物学对Ⅰ型鸭肝炎病毒进行分离和鉴定也是对Ⅰ型鸭肝炎病毒研究的方向与趋势。笔者通过对鸭型肝炎病毒病程的研究进行介绍,为鸭病毒性肝炎的实际临床与防治垫定理论基础。
冯广鹏[7]2009年在《鸭病毒性肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗体方法的建立》文中研究说明鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)是6周龄以下雏鸭的一种传播迅速、高度致死、肝肿大出血为主要特征的病毒性疾病,病原为鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)。该病在国内雏鸭群中频频发生,给养禽业生产造成了极大的损失。本实验从一群发病鸭的病料中分离到一株鸭肝炎病毒,并建立了检测鸭肝炎病毒抗体的ELISA快速检测方法,取得了如下结果:1.鸭病毒性肝炎病毒株的分离鉴定对河南省内疑似鸭病毒性肝炎感染鸭病料的收集,通过细菌分离、病毒分离、中和试验、动物回归试验、雏鸭保护试验以及病毒对红细胞的凝集试验,分离到一株鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒株,并对病毒进行了初步鉴定,该病毒的鸡胚半数致死量(ELD50)为0.2ml 10-7. 659稀释的病毒液,中和试验结果表明将血清作1:75倍稀释可保护50%的鸡胚免于死亡。2.鸭抗DHV血清的制备及鸭传染性肝炎血清抗体ELISA快速检测方法的建立通过对鸭病毒性肝炎病毒种毒的处理和鸭的多次免疫,制备了鸭抗DHV血清。将通过鸭胚传代的病毒经过纯化后,作为包被抗原,建立了一种检测血清中DHV抗体的间接ELISA方法。通过对方法学的研究,确定了ELISA反应的各组分的最适工作条件,确定抗原最佳包被浓度为7.5μg,血清最佳稀释度约为1:320,阳性血清OD450值(P)接近1.0,阴性血清值(N)为0.125,P/N值最大。阴性和阳性分界明显;通过对40份阴性鸭血清的检测结果,确定阴阳性临界点为0.2。根据建立的ELISA方法及最佳反应条件,确定力方法的敏感性和特异性。结果表明,本试验建立的间接-ELISA法可用于鸭血清中鸭肝炎病毒抗体水平的检测。
朱俊平[8]2006年在《山东潍坊地区鸭病毒性肝炎的流行病学调查及防控措施的应用》文中研究说明从山东省潍坊市的昌邑、寿光、昌乐、临朐、安丘、潍城、寒亭、奎文、青州、高密、诸城等11个市县区发病严重的鸭场采用鸡胚尿囊腔接种法分离到42株病毒，经鸡胚中和试验和雏鸭血清保护试验，39株确定为鸭肝炎病毒。其鸡胚半数致死量(ELD_(50)／0.2ml)均在10~(-5.9)-10~(-5.3)之间，平均为10~(-5.6)；上述39株分离的鸭肝炎病毒接种1日龄无鸭病毒性肝炎抗体鸭(10只/株)，其发病率为100％(10／10)，死亡率为70％-100％(7／10-10／10)。调查统计结果表明：鸭病毒性肝炎在潍坊市的昌邑、寿光、昌乐等11个市县区时常发生，是危害潍坊肉鸭养殖业最重要的疫病之一，一年四季均有发生，其中春季和冬季出现的频率略高。多个日龄的鸭均可感染发生鸭病毒性肝炎，但发病日龄相对集中在4-21日龄，且日龄越小，发病率和死亡率越高，4-7日龄的发病率和死亡率分别达74.6％(20600／27600)和75％(15450／20600)。通过分析39个鸭场发生鸭病毒性肝炎的可能原因，制定了改造老场、加强卫生管理、改进免疫方案等综合性防控措施，并在20个曾发生过鸭病毒性肝炎的鸭场(1113000只)推广应用。应用结果表明：试验鸭场在应用综合性防控对策后，发生鸭病毒性肝炎的次数显着减少，下降了73.3％(22／30)，同时还提高了成活率，降低了药品等费用。所以对鸭病毒性肝炎的控制，采取综合防控措施是有效的。
王蕾[9]2015年在《Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离鉴定及高免卵黄抗体的研制》文中进行了进一步梳理鸭病毒性肝炎(Duckviral hepatitis, DVH)是雏鸭的一种高度致死性的、传播迅速的病毒性传染病。临床上以神经症状和肝脏肿大,表面有出血为特点。主要侵害6周龄以内雏鸭,特别是2日到3周龄的雏鸭最为易感,成年鸭有抵抗力。不同日龄的雏鸭发病后,死亡率各不相同,有的高达95%,有的低于15%。耐过的鸭成为僵鸭,生长和发育受到障碍。该病是危害养鸭业最为严重的传染病之一。虽然鸭肝炎鸡胚化弱毒苗和灭活苗已在全国范围内大面积推广,但是在实际生产中,鸭肝炎仍时有暴发,给养鸭业带来严重危害。而在鸭肝炎的预防和治疗上,目前养殖户主要依靠注射高免卵黄抗体,但是由于卵黄抗体生产不规范,致使卵黄抗体的质量参差不齐,效果得不到保证。本试验从临床发病雏鸭群中分离出的一株疑似鸭肝炎病毒进行了生物学鉴定和毒力的测定。利用Ⅰ型鸭肝炎病毒鉴定引物对提取的病毒RNA进行了巢式RT-PCR扩增。根据测定的病毒ELD50,将分离的毒株与Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清进行中和试验。进行了雏鸭攻毒试验并用病变肝脏制作了超薄切片,观察其病毒颗粒的形态特征。用该毒株接种易感雏鸭,取病死鸭肝脏,制备组织灭活苗,并加以不同的疫苗佐剂,设置蜂胶组、黄芪组及不加佐剂的对照组叁组。按照免疫程序免疫高产蛋鸡,收集高免蛋。对叁组卵黄抗体的制备条件进行了摸索确定,通过中和试验对叁组卵黄抗体的效价进行了测定,选择效价较高的卵黄抗体将其应用于临床发病雏鸭的治疗。试验结果表明,电镜下可观察到内质网中30nm左右圆形无囊膜的病毒颗粒。该毒株的ELD5o为10-5.659/0.2mL,分离出的病毒能够被Ⅰ型鸭肝炎病毒标准阳性血清中和,中和效价是1：79。巢式RT-PCR扩增的条带与预期相符,同源性分析与四株山东株的同源性较低。免疫后将收集叁组卵黄通过中和试验进行抗体效价的测定,依次为黄芪组210.8,蜂胶组29,对照组27.82,对照组的抗体效价明显低于其他两组。卵黄抗体制备的最适pH为6.1,最适稀释度为1：10,此条件下卵黄抗体中的蛋白含量相对较高,同时发现叁组卵黄抗体中的蛋白含量在在最适条件下黄芪组最高,蜂胶组次之,对照组最低。将抗体效价较高的黄芪组卵黄抗体进行大量生产并应用于临床中,发现该高免卵黄抗体对Ⅰ型鸭病毒性肝炎的治愈率很高,对发病雏鸭有很好的保护作用。本实验从临床上常发雏鸭病毒性肝炎病例出发,为高效的组织灭活苗和卵黄抗体的研制奠定了基础,为有效地预防和控制鸭病毒性肝炎的流行提供了一些技术手段和理论依据。
张臣伟[10]2012年在《山东部分地区鸭病毒性肝炎流行病学调查》文中认为鸭病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis，DVH)是由鸭肝炎病毒引起的雏鸭的一种高度致死性、传播迅速的疾病，临床特征为病鸭肝脏出血、坏死、水肿，在死时常呈“角弓反张”的特异姿势，俗称“背脖病”。该病主要侵害3周龄以内的雏鸭，是严重危害养鸭业的重大疾病之一，可由叁种不同类型的病毒引起，分别是Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒。为更好的了解山东地区鸭病毒性肝炎的流行情况，自2010年8月以来，搜集由山东部分地区送检的31份疑似鸭病毒性肝炎病例，进行了发病情况调查、病理学观察、病毒分离鉴定、相关基因的克隆测序分析等研究工作。通过对山东不同地区送检的疑似鸭病毒性肝炎病例的发病情况调查发现，近年来，山东养鸭业迅猛发展，各养鸭地区均有较高比例的鸭病毒性肝炎的病例发生，主要发生在4周龄以下雏鸭，较大日龄鸭也见发病，发病无明显的季节性，一年四季均可发生，但秋冬季节较多发生，与以往在春季发病率较高的现象有所不同。鸭群间发病率及死亡率差异较大。该病的发病情况与患病鸭日龄、鸭场饲养管理和环境卫生条件关系密切，尤其是近几年鸭坦布苏病毒病的发生流行，极大地推动了鸭病毒性肝炎的发生流行。临床主要表现为精神沉郁、不合群，头震颤、瘫痪、翻跟头等神经症状，瘫痪病鸭最后多因衰竭死亡，且死时呈角弓反张姿势；与以往鸭肝炎病例不同的是，许多发病鸭群排灰白色或灰绿色稀粪，神经症状的病鸭比例较高，呼吸道症状明显，这可能主要与黄病毒混合感染有关。疑似病例剖检主要见肝脏肿胀、色淡或呈土黄色、质脆，发病雏鸭的肝脏常见斑点状出血；脾脏常见灰白色小坏死灶，有的呈暗红色或呈斑驳状出血性坏死；脑膜充血、出血。与以往鸭肝炎病变不同的是，许多病例病鸭的回肠中部淋巴组织集中处黏膜发生局灶性灰白色卵圆形肿胀，心外膜常见斑点状出血，心内膜条纹状出血，心肌色淡，质度较软，该病变可能主要与黄病毒感染有关，多为两者混合感染。病理组织学观察发现肝脏普遍表现变性坏死及淋巴细胞浸润性病变，轻者肝细胞以颗粒变性及水泡变性为主，重者主要表现脂肪变性和坏死，发病雏鸭肝脏常见严重的出血性坏死，慢性病例表现为肝脏胆管广泛性增生，有不同程度的炎性细胞浸润及出血；脾脏表现不同程度的坏死病变；部分病例回肠中部淋巴组织集中处黏膜固有层及肌层有大量淋巴细胞浸润增生，心肌出血；大部分病鸭表现轻度病毒性脑炎病变。选取出现肝脏病变的31份鸭病料同时进行DHV-Ⅰ、星状病毒、DHV-Ⅲ、DHBV（鸭乙肝病毒）的PCR检测。结果显示：在31份疑似病例中有11例确诊为鸭肝炎病毒感染，其中有10例为DHV-Ⅰ，阳性率35.48%；1例为DHV-Ⅲ，阳性率3.23%；17份DHBV阳性，阳性率54.84%；其中，有4例病料呈DHV-Ⅰ和DHBV双阳性，双重感染率为12.90%。取7株DHV分离株经鸡胚传至第五代，收集尿囊液，测定这些毒株的ELD50/0.2ml在10~(-6.34)～10~(-7.56)之间，平均为10~(-6.894)。经基因测序比对发现，DHV的基因较少突变，因而目前流行的病毒的致病性与之前发现公布的病毒差别不大。DHBV调查结果显示31例病料中有17例感染DHBV，虽然鸭本身常见非致病性携带乙肝病毒的现象，但是如此高的检出率还是较为少见的，尽管人对鸭乙肝病毒不感染，但其发生原因及由此引起的公共卫生问题应引起人们的高度重视。随着养鸭业的迅猛发展，鸭传染性疾病的流行也日趋严重，新病不断出现,老病仍在流行，新型鸭病的出现势必要打破原有鸭病的平衡，使鸭病的发生复杂化。因而在养鸭的过程中应加强饲养管理，注意研究鸭病间的相互影响，严格执行免疫计划，增强鸭群的集体免疫力，减少疾病的发生，减少经济损失。
参考文献：
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[3]. 鸭肝炎病毒的分离与检测[D]. 刘建. 中国农业大学. 2004
[4]. I型鸭肝炎病毒的分离鉴定及其全基因组序列分析[D]. 施旭梅. 吉林农业大学. 2013
[5]. 河北省鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定及弱毒株培育[D]. 张丽. 河北农业大学. 2008
[6]. Ⅰ型鸭肝炎病毒的研究进展[J]. 张继玲. 当代畜牧. 2017
[7]. 鸭病毒性肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗体方法的建立[D]. 冯广鹏. 河南农业大学. 2009
[8]. 山东潍坊地区鸭病毒性肝炎的流行病学调查及防控措施的应用[D]. 朱俊平. 南京农业大学. 2006
[9]. Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离鉴定及高免卵黄抗体的研制[D]. 王蕾. 山东农业大学. 2015
[10]. 山东部分地区鸭病毒性肝炎流行病学调查[D]. 张臣伟. 山东农业大学. 2012
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