益阳市南县茅草街镇中心卫生院 药剂科 湖南益阳 413201
【摘 要】目的：建立桑白皮、蜜桑白皮醋酸乙酯提取物的 HPLC 指纹图谱，研究桑白皮蜜炙前后醋酸乙酯提取物的HPLC 指纹图谱的变化，以宏观的角度探究桑白皮蜜炙前后化学成分的变化。方法：采用 Waters 2965 高效液相色谱仪进行检测，色谱柱 Thermo ODS－2HY-PERSIL（250 mm ×4.6 mm，5μm），色谱条件：乙腈－0.3%磷酸水溶液梯度洗脱；柱温 30 ℃；流速 1 ml•min－1；检测波长为 340 nm；进样量 10μL。结果：桑白皮酸乙酯提取物与蜜桑白皮醋酸乙酯提取物指纹图谱相似度为 0.922 ～0.995。结论：桑白皮蜜炙前后差异较小，蜜炙对于桑白皮化学成分改变影响较小。为桑白皮的炮制方法及质量控制提供了客观和可靠的依据。
【关键词】桑白皮；醋酸乙酯提取物；指纹图谱
桑白皮为桑科植物桑 Morus albaL.的干燥根皮。又名桑皮、白桑皮。主产于安徽、河南、江苏、四川等地，以亳桑皮（产于安徽亳州）质量最佳。具有泻肺平喘、利尿消肿之功效，用于肺热咳喘、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿［1］。近年来，桑白皮在化学成分和药理药效方面的研究多有报道，而对桑白皮蜜炙前后化学成分研究较少。桑白皮化学成分主要有黄酮类成分如桑素（Mul-berrin），桑色烯（Mulberrochromene），桑根皮素（Morusin），桑黄酮（Kuwanon），桑白皮素（moracenin）C、D，桑根酮（Sanggenone）[2］等.桑白皮蜜炙后缓和其寒凉之性，加强其止咳平喘作用，发挥止咳平喘作用的药效成分是东莨菪内酯［3］。本文旨在建立桑白皮、蜜桑白皮醋酸乙酯提取物的 HPLC 指纹图谱，分析桑白皮炮制过程中化学成分变化，为桑白皮提取物的质量控制指标提供方法依据。
1仪器与材料
高效液相色谱仪（美国 Agilent，HP1200）；光二极管阵列检测器（美国 Agilent）；色谱柱色谱柱为 Zorbax SB C18（250 mm×4.6mm，5 μm）；RE-52 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器）；东莨菪内酯对照品（中国药品生物制品检定所，110768 －200504）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，110753- 200413）；东莨菪内酯对照品（110768- 200504）；桑根酮C对照品（上海金穗生物有限公司，80651-76-9）；乙腈（色谱纯，美国 Fisher 公司），其他溶剂均为分析纯。原药材购于河北神威大药房连锁有限公司，产地安徽亳州，经本院陈宇研究员鉴定为桑科植物桑 Morus albaL．的干燥根皮。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 色谱柱为Zorbax SB C18（250 mm×4.6mm，5μm）；动相：乙腈-0.3%磷酸水，梯度洗脱，洗脱条件见表1。柱温 30 ℃；检测波长（0～ 20 min，327 nm；20～60min，345nm；60～100 min，270 nm）；进样体积 10μL。
2.2样品的制备
桑白皮：取原药材，洗净，稍润，切丝，干燥。蜜桑白皮：取桑白皮丝适量，加入适量的沸水稀释后得炼蜜，拌匀，闷润，置预热适度的炒制容器内，用文火加热，炒至深黄色、不粘手时，取出放凉。每100 kg桑白皮用炼蜜 25 kg。样品溶液制备 取样品粗粉5.0g，精密称定，置于索氏提取器中，加醋酸乙酯 200ml，索氏提取 1.5h，趁热抽滤，舍弃滤渣，用旋转蒸发仪减压浓缩至干。用甲醇溶解，定容至 5ml，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 溶液的配制与制备
2.3.1 对照品溶液的制备
对照品溶液 分别精密称取东莨菪内酯5.6mg、桑根酮C 4.8mg、绿原酸5.9mg于25mL 容量瓶中，摇匀，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，用甲醇稀释并定容至 10mL，摇匀，即得浓度分别为22.4μg•ml－1、19．2μg•ml－1、23.6μg•ml－1的东莨菪内酯、桑根酮C、绿原酸对照品溶液[4-8]。
2.4 指纹图谱的建立与分析
取供桑白皮醋酸乙酯提取物、蜜桑白皮醋酸乙酯提取物试品溶液各6份，各进样10μL记录色谱图。将各样品指纹图谱导入国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A 版），生成对照指纹图谱。对桑白皮、蜜桑白皮醋酸乙酯提取物供试品进行相似度计算。结果见表 2。
2.5 方法学考察
2.5.1 标定特征峰
记录并比较对照品溶液及样品溶液色谱图，标定样品溶液中三个成分的特征峰[9-10]。
2.5.2精密度试验
取对照品溶液，连续进样 6 次，每次进样 10μL，按照“2.1”项下色谱条件进行分析，记录色谱图中保留时间与峰面积。结果东莨菪内酯、桑根酮C及绿原酸峰面积的 RSD分别为1.32%、1.52%、1.21%；均小于3.0%，保留时间的RSD 分别为0.86%、0.922%、0.67%小于1.0%，结果表明仪器精密度良好。
2.5.3 稳定性试验
取同一提取物样品溶液，分别在 0、2、4、8、12、24 h 进样 10μL，记录色谱图中色谱峰保留时间与峰面积。结果色谱峰保留时间与峰面积RSD分别为1.7%、2.3%，结果表明样品溶液在 24 h 内稳定。
2.5.4重复性试验
精密称取同一批次桑白皮原药材6 份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样10μL，记录色谱图中色谱峰保留时间与峰面积。，结果色谱峰保留时间和峰面积的RSD均小于 3%，表明方法重复性良好。
3 讨论
本研究运用中药色谱指纹图谱相似的评价软件对指纹分别对桑白皮、蜜桑白皮醋酸乙酯提取物各六份进行了分析，分析结果表明，桑白皮蜜炙前后其指纹图谱在保留时间峰面积RS大于 3%，峰面积小于3% 蜜炙后，说明桑白皮的化学成分种类变化不大，某些化学成分含量存在改变，具体成分变化情况需进一步，探究桑白皮酸乙酯提取物与蜜桑白皮醋酸乙酯提取物指纹图谱相似度为 0.922 ～0.995。桑白皮蜜炙前后差异较小，蜜炙对于桑白皮化学成分改变影响较小。从宏观的角度探究蜜炙前后桑白皮化学成分变化以及其在含量方面的变化，为桑白皮的炮制方法及质量控制提供了客观和可靠的依据，为研究桑白皮蜜炙改变药效提供了研究前提与依据。
参考文献：
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论文作者:汤小兵
论文发表刊物:《航空军医》2016年第6期
论文发表时间:2016/6/14
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