胡国森 赵康乐 徐文中（通讯作者） 郭建桥
（河南科技大学第二附属医院泌尿外科 河南 洛阳 471000）
【摘要】 目的：分析肾细胞癌组织中P19的表达，探讨P19与肾细胞癌的发生发展以及临床病理特征之间的关系，综合分析其临床意义。方法：收集肾细胞癌病例30例，应用RT-PCR以及western bolt综合分析P19基因及蛋白肾细胞癌组织中的表达。结果：P19在两种组织中表达有明显差异， P19在肾细胞癌组织中基因及蛋白表达量明显低于其配对的正常非肿瘤肾组织（P＜0.05）。结论：P19表达差异对判断其发生和转移有重要价值，可作为肾细胞癌临床进程潜在的指标，为治疗和预后评价提供依据。
【关键词】P19；肾细胞癌
【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）20-0172-02
肾细胞癌(Renal cell carcinoma,RCC)起病隐逸，恶性程度高，死亡率高，其中有关肾细胞癌与细胞因子的关系研究是肾细胞癌分子生物学领域探索的热点[1]。P19是近年来新发现的一种与肿瘤发生有关的基因，属于抑癌基因家族成员之一[2]，目前有研究显示，伴随着肿瘤的发生发展以及迁延的过程，作用逐渐被国内外专家学者的重视。检测P19在肾细胞癌的组织以及周围组织中的表达，宏观以及微观的检测其定量半定量结果，使用反转录酶联集合反应以及免疫印迹等方法P19基因以及蛋白的变化关系，并结合临床病理标本资料以及临床相关的参数，探讨其在肾细胞癌中作用有重要理论意义，探讨其与临床治疗的重要意义。
1.材料与方法
1.1 标本的收集
收集手术切除新鲜肾细胞癌组织30例，其中男性患者病例38例，女性患者病例24例，男女比例比例1.6：1，年龄45～78岁之间，平均年龄为56±2.5岁，男中位年龄55.6岁，女中位年龄为61±1.1岁。按WHO分类标准进行肾细胞癌组织学分级：高分化级别为28例（男21例，女7例）、中分化级别18例（男4例，女4例）、低分化级别16（男3例，女3例）例。我国基本参照美国癌症标准学会（2008版），泌尿外科分会标准为准，其中Ⅰ期 28例（其中男22例，女6例），Ⅱ期18例（其中男3例，女15例），Ⅲ期14例（其中男12例，女2例），Ⅳ期2例（其中男1例，女1例）。正常对照组病例标本，取自由于外伤引起的肾挫伤严重的切除病例标本，标本处理同上。
1.2 RT-PCR方法检测P19 RNA表达
通过阅读参考文献并从GeneBank检索出人P19序列，使用Oligo6软件分析合符实验条件的基因片段进行扩增引物，上游引物：F:5’-AAGCACCTGCACCAGGC-3’，下游引物：R:5’- AATAGAAGTTGTCATGGAT-3’，经过严格的实验步骤，后进行电泳，分析结果（试剂盒购于上海生物工程公司）。
1.3 Western-blot检测P19蛋白表达
组织提取试剂盒购于武汉博士德公司通过组织蛋白的提取、定量等等一系列步骤检测P19蛋白表达，实验用抗体均购于Abcam公司。
1.4 统计分析
所有数据以x-±s表示，采用单因素方差分析，最终结果导入SPSS13.5统计软件进行蛋白量的半定量统计分析。
2.结果
2.1 RT-PCR结果
从结果看出肾对照组组条带较肾细胞癌组明显量亮，显色均匀。比值平均数为0.221±0.012，而非肿瘤肾组织也有表达，但条带明显亮，切条带均匀，比值明显大于肿瘤组，校对平均数值为0.467±0.017，二者比较统计分析后，P值为0.009，P＜0.05，差异有统计学意义。
2.3 肾细胞癌组织中P19蛋白表达与肾细胞癌临床病理参数间的关系（见表1）
在肾细胞癌的发生发展过程中，从治疗过程中部分死亡病例标本中研究发现P19有种重要的作用，虽然目前得到的信息不多，P19为重要的抑癌基因，参与肿瘤的生成过程中的防御体系过程，但一旦得到休眠后，其不能下游信号传导，信使作用不能到达，即被休眠或旷置，最终导致肿瘤的生成及发展，所以逐步成为研究的热点及重点[3-4]。作为在生理机能作用上可以看做具有酶功能的P19，在被激活后，有着高度的活化功能，降低反应的活化能比普通酶效能高出十倍级以上的作用[5]；主要作用于活体细胞的表面的识别编码基因系列，细胞的周期缩短改变，细胞的脱离轨道生长，化生变化，基本是首先就会被察觉或是被纠正，使细胞的生长转化，老化等过程不能偏离方向，不能纠正的情况下，可以自动启动修正程序基础上，启动细胞凋亡程序，不能产生新的低分化或不成熟细胞[6]；本次实验研究发现与管家基因进行对比校正，从结果看出肾对照组组条带较肾细胞癌组明显量亮，显色均匀，在肾癌组织中，P19表达明显减少，进一步发现，在肾细胞癌巢P19表达几乎为零，在癌巢周围组织中P19表达就高于癌巢中的，考虑在肾癌组织中，P19有被多种蛋白抑制，不能启动，或是出于休眠状态，而非肿瘤肾组织就没有这种现象的出现。而在对大体标本切片也可以发现，P19有表达稍高的病例标本中，其发现癌组织周围的血管少于没有P19表达的病例标本，从而可以看出，P19一旦被休眠后，其对异常生长的血管程序也不能有所节制，导致血管异常增生以及化生，甚至部分淋巴管也可以被发现，最终导致肿瘤的蔓延或转移，如何保持P19不被休眠或包埋，将可能成为治疗肾细胞的方向之一。
【参考文献】
[1] 陈启光,杨琦,张哲,于秀月,单广夷,孔垂泽.Galectin-3在膀胱癌中的表达及临床意义[J].中国医科大学学报. 2010(09).
[2] 杨国华,刘海鹰.??Galectin-3与肿瘤的研究进展[J]. 中华肿瘤防治杂志. 2007(22) .
基金项目：河南卫生厅科技攻关项目（2013085）
论文作者:胡国森,赵康乐,徐文中（通讯作者）,郭建桥
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第20期供稿
论文发表时间:2015/9/30
标签：细胞论文; 组织论文; 肿瘤论文; 标本论文; 基因论文; 蛋白论文; 病例论文; 《医药前沿》2015年第20期供稿论文;