郭秀春 刘秀军（通讯作者） 秦娜
（巴彦淖尔市医院 内蒙古巴彦淖尔 015000）
【关键词】 KL-6粘蛋白；E-钙粘蛋白；乳腺癌
【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）11-0048-02
我国乳腺癌的发病率呈明显上升趋势，在女性恶性肿瘤中居首位。目前乳腺癌的临床治疗虽然取得了一定的进展，但其发病率仍高居不下，生存率仍然不能令人满意[1]。本实验拟观察试图通过收集乳腺癌及癌旁组织标本，并通过采用逆转录酶聚合酶链反应技术检测大肠癌组织及癌旁组织中KL-6粘蛋白和E-钙粘蛋白的RNA水平表达变化，更进一步完善对大肠癌组织的早期诊断和预后判断提供一个新的思路。
1.对象与方法
1.1 研究对象
收集2013年l0月至2015年3月来自我院乳腺外科乳腺癌根治术后癌及癌旁标本各60例．其中年龄22～80岁，TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为13、23和24例，其中淋巴结转移38例。
1.2 实验方法
按一步Trizol法 提取样本组织的RNA：按说明书配制20ul的RT反应液（反应液配制请在冰上进行）。1 Total RNA用量为1ug。反转录反应条件如下: 37℃ 15min，85℃ 5sec按说明书配制50ul的PCR反应液，94℃ 30sec，56℃* 15sec，25Cycle 72℃ 30sec。设循环25个,实验采用GAPDH片段作为内参照。KL-6 mucin、E-cadherin、GAPDH引物采用Oligo软件进行设计，由invitrogen公司合成（具体序列见表1）。取PCR产物5ul，加5xLoading Buffer 2ul，2%琼脂糖凝胶电泳 110V，100mA，25min，凝胶成像仪成像并保存结果。
表1 PCR引物详细序列：
1.3 统计学处理
实验数据采用x-±s表示，组间比较采用t检验，两组以上比较采用方差分析，相关分析采用直线相关分析法分析。以SPSS13.0统计软件进行统计学分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
KL-6 mucin、E-cadherin基因表达量结果一致，癌组织明显高于癌旁组织，差异显著有统计学意义（P<0.05）（见图1，2，表2）。相对应内参基因GAPDH表达无差异（见图3）。乳腺癌组织中KL-6 mucin、E-cadherin基因表达与年龄、性别、TNM分期无关(P>0.05)，与组织分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)（详见表3）。
KL-6 mucin、E-cadherin基因相关性分析：60例乳腺癌标本RT-PCR法检测mTOR基因和eIF4E基因灰度值相关性分析统计处理后结果为：r=0.892，P＜0.05，二者呈明显正相关性。
表2 RT-PCR法大肠癌及癌旁组织KL-6 mucin、E-cadherin基因总RNA表达:(n=60，x-±s)
注：P1为KL-6mucin，P2为E-cadherin
3.讨论
肿瘤的形成是一个慢性长期渐变过程，而其肿瘤细胞的侵润及远处转移是一个多因素共同作用的结果，其中会涉及肿瘤的细胞和宿主得细胞及基质之间的相互作用。多项研究表明，MUC1利用多种方式在肿瘤的侵袭和转移中发挥了相当重要的作用。然而其发挥作用的方式和途径在不同的肿瘤类型中，也会有所差别[2]。KL-6粘蛋白在肿瘤组织中表现异常的过度表达[3,4],例如乳腺癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、前列腺癌、肺癌等。本研究结果与有关参考文献研究结果一致。KL-6粘蛋白的表达量与年龄、性别、TNM分期无关(P>0.05)，与组织分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。进一步预示着KL-6粘蛋白表达随着肿瘤的恶性程度密切相关，恶性程度越高，KL-6粘蛋白表达越强。
E-cadherin作为粘附分子的成员之一，具有决定性的作用。在在人类的许多种肿瘤的检测发现，E-cadherin基因的表达有不同程度的降低。例如胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、食管癌等[5,6]。一些中低分化结直肠癌的组织中检测发现，E-cadherin基因整体的表达降低或者缺失，而且其表达的下降程度和肿瘤的转移有明显的正相关性。本研究结果与有关参考文献研究结果一致。E-cadherin粘蛋白的表达量与年龄、性别、TNM分期无关(P>0.05)，与组织分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。进一步预示着E-cadherin粘蛋白表达随着肿瘤的恶性程度密切相关，恶性程度越高，E-cadherin粘蛋白表达越低。
有文献报道：MUC1能够选择性的减少E-cadherin/catenin复合体的形成,进而加速肿瘤细胞由肿瘤主体中游离出来,促进其远处转移的发生[7]。本研究发现:乳腺癌癌组织中KL-6粘在mRNA水平和蛋白水平表达呈现出过度表达，但是在于正常大肠组织中KL-6粘蛋白基本微弱；相反，乳腺癌正常组织中钙粘蛋白E呈现出过表达，但是在于癌组织中低表达或不表达，二者呈明显负相关。分析原因可能为大肠癌的浸润生长和MUC1能够竞争性的抑制E-cadherin/catenin复合体的形成，使得E-cadherin游离后活性降低，使得肿瘤细胞的侵袭转移可能性增大。
4.结论
KL-6 mucin、E-cadherin基因的异常表达在乳腺癌的发生、发展中起重要作用，KL-6 mucin、E-cadherin基因的表达与乳腺癌的分化程度及淋巴结转移情况有关;联合检测两者在乳腺癌中的表达有助于恶性程度的评估与预后判断。
【参考文献】
[1王露,孙怡,李惠等.乳腺癌石蜡肿瘤组织和相应血液细胞 BR CA 1、ER CC 1、 TS mRNA的表达相关性研究[J]中国当代医药 2014 ;21 : (27 ):7-15.
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[7]张海生,鲁海文,孔广忠等.MUCl、E一Cadherin在胰腺癌中的表达及其临床意义.内蒙古医学院学报.2005;27(2):88一91.
论文作者:郭秀春,刘秀军（通讯作者）,秦娜
论文发表刊物:《心理医生》2015年11期供稿
论文发表时间:2016/4/27
标签：乳腺癌论文; 肿瘤论文; 组织论文; 蛋白论文; 基因论文; 程度论文; 淋巴结论文; 《心理医生》2015年11期供稿论文;