湘西自治州荣复医院 湖南湘西 416000
【摘 要】目的 比较分析不同炮制法对中药地黄中所含化学成分的影响。方法 采用九蒸九晒法与药典法制得地黄炮制品，并采用HPLC法测定不同地黄炮制品中益母草苷、梓醇及地黄苷D的含量。结果 以50%甲醇溶液为溶剂时，提取的地黄苷D和益母草苷含量高于甲醇为溶剂时，而加热回流和超声提取的含量，以超声提取的含量较高；相比于药典法，超声法测得的梓醇含量略高。结论 不同方法炮制的地黄其主要化学成分含量差异较大，应选择正确的炮制方法以提高有效药物含量。
【关键词】熟地黄；高效液相色谱；化学成分
[Abstract] objective to comparative analysis of different processing method of traditional Chinese medicine（TCM）Huang Zhong contains the influence of chemical composition. methods With nine nine drying method and the pharmacopoeia method，rehmannia processed products，and different rehmannia root were determined by HPLC method in the processed products of leonurus glycosides，the content of catalpa alcohol and digitalis glycosides D. Results with 50% methanol solution as solvent，the contents of digitalis glycosides D and motherwort extract is higher than methanol as solvent，and the content of heating reflux and ultrasonic extraction with ultrasonic extraction content is higher；Compared with the pharmacopoeia method，ultrasonic method of catalpa slightly higher alcohol content. Conclusion the different methods of radix rehmanniae，its main chemical composition content difference is bigger，should choose the correct processing methods to improve the effective drug content.
[Key words] rehmannia glutinosa. High performance liquid chromatography（HPLC）. Chemical composition
地黄在临床上应用广泛，是“四大怀药”之一。地黄是玄参科植物地黄的块根，依据不同药效，可将地黄分为鲜地黄、干地黄、熟地黄等，不同炮制方法对地黄化学成分的影响不同，本研究采用九蒸九晒法与药典法（2005年版）[1]制得地黄炮制品，并采用HPLC法测定不同地黄炮制品中益母草苷、梓醇及地黄苷D的含量，探讨了不同炮制法对中药地黄中所含化学成分的影响。
1仪器与材料
1.1仪器及材料（1）仪器。采用上海亚荣仪器厂生产的RE-2A型旋转蒸发仪和上海友声衡器有限公司提供的BS-300A、BS-600 型电子分析天平，采用日本岛津生产的万分之一分析天平、UV2265 紫外光谱仪及高效液相分析仪，济宁科特超声电子有限责任公司提供的KT-350W超声波清洗机，瑞士Mettler FP52 型熔点测定仪，VXR-400、Bruker-AM400 型核磁共振光谱仪，IFS25 型及 perkin-Elmer 983 型红外光谱仪。（2）材料。生地黄产自河南省，由本省中药研究院专业研究员鉴定为玄参科植物地黄的块根。北京绿百草科技有限公司提供的大孔树脂 SP-850，青岛海洋化工厂生产的硅胶 H，瑞士 Pharmacopeia提供Sephadex LH-20，美国 Merk 公司提供的HPLC 级别乙腈，乙酸乙酯、氯仿、硫酸、甲醇、盐酸等均为分析纯，自制梓醇、益母草苷、地黄苷 D 对照品，均通过HPLC 归一化法测定，含量＞98%[2]。
1.2方法
1.2.1制备样品 ①生地黄：鲜地黄洗净泥土后，置于50℃干燥箱内干燥72h，取出。②清蒸熟地黄。取生地黄置入蒸锅内蒸24h后取出，再置入干燥箱内干燥，在不粘手状态时取出切厚片，再在50℃干燥箱内干燥。③九蒸九晒熟地黄。将生地黄在蒸锅内蒸制6h后取出，干燥，为为一蒸一晒熟地黄，如此法反复蒸制干燥9次，得到各个样品，将其切片，干燥。
1.2.2 制备样品溶液 ①生地黄溶液。将适量生地黄粉碎、过筛后，精密称取0.5g，放入25ml的50%甲醇中，超声提取半小时后不租重量，过滤，其续滤液即得。②熟地黄溶液。取适量熟地黄，粉碎、过筛、精密称取、超声提取、过滤，方法与生地黄溶液相同。
1.2.3制备标准溶液[3] ①益母草苷标准溶液。精密称取干燥益母草苷适量，加甲醇定容至 10ml，从中量取十分之一将其稀释至10ml（每1μl标准溶液含益母草苷0.221μg），即得。②梓醇标准溶液。精密称取干燥梓醇适量，方法同益母草苷标准溶液制法，制成的标准液每1μl标准溶液含梓醇0.104μg。③地黄苷D标准溶液。方法同益母草苷标准溶液制法，制成每 1μl 标准溶液含地黄苷 D0.223μg。
1.2.4测定含量
1.2.4.1 色谱条件 ①梓醇。色谱柱：Hypersil GOLD C18（250mm×4.6mm，5μm）；流速：1ml/min；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（1：99）；柱温：25℃；检测波长：210nm；理论塔板数按梓醇峰计算应≥5000；保留时间9.717min。②益母草苷和地黄苷D。色谱柱：Hypersil GOLD C18（250mm×4.6mm，5μm）；流速：1ml/min；柱温：25℃；流动相：乙腈-水（3：97）；检测波长：203nm；益母草苷保留时间为18.597min，地黄苷 D 保留时间为 9.726 min，理论塔板数按峰计算均≥5000[4]。
1.2.4.2提取条件的选择 地黄苷D和益母草苷的提取分别采用加入回流和超声的方法提取，梓醇的提取分别采用中国药典（2005版）梓醇含量样品提取方法与超声提取方法（分别称取一蒸一晒熟地和二蒸二晒熟地样品粉末，依照如上梓醇色谱条件进行梓醇含量测定）。
1.2.5重现性实验、精密度实验、稳定性实验及回收率实验 均在上述色谱条件下进行实验操作[5]。
1.3数据处理方法 研究数据采用EXCEL2013进行整理分析，连续性资料采用均值±标准差进行描述；分类资料采用构成比（%）进行描述。
2结果
2.1不同提取条件下益母草苷和地黄苷D提取结果
以50%甲醇溶液为溶剂时，提取的地黄苷D和益母草苷含量高于甲醇为溶剂时，而加热回流和超声提取的含量，以超声提取的含量较高。
3结论与讨论
本研究在不同提取条件下进行益母草苷和地黄苷D提取，结果提示，采用50%甲醇作为溶剂、以超声法提取0.5h的方法所提取的益母草苷和地黄苷D含量更高，这提示应选择50%甲醇溶液并采用超声提取0.5h方法提取。同时，相比于药典法，超声法提取梓醇更为完全，且超声法制备样品简单、方便，有更大优势。本研究结果还显示，在地黄用酒进行九蒸九晒过程中，地黄苷D的含量随着时间延长和蒸晒过程的加深而增加，而益母草苷的含量不断降低，这可能与三糖苷地黄苷 D性质稳定，而单糖苷益母草苷性质不稳定有一定关系。随着时间的延长和蒸晒次数的增加，梓醇的含量不断降低，直至测定不出。这可能与干燥的温度有一定的关系。从本次研究结果来看，我们认为梓醇成分也许是生地黄性寒、味苦、清热凉血且有养阴生津效果的主要有效成分和物质基础，而三糖苷地黄苷 D则可能是经蒸晒后成熟地黄性温、味甘、滋阴补血的主要有效成分和药效物质基础。
综上，不同方法炮制的地黄其主要化学成分含量差异较大，应选择正确的炮制方法以提高有效药物含量。
参考文献：
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典，一部[S].北京：化学工出版社，2005：82-83.
[2]国家药典委员会．中国药典，一部［Ｍ］．北京：中国医药科技出版社，2015：124-126.
[3]杨飞飞，李胜男，郭怀忠，等.古法炮制地黄与市售地黄成分的比较[J].河北大学学报（自然科学版），2017，37（1）：47-55.
[4]陶益，蒋妍慧，唐克建，等.地黄炮制前后化学成分的 UHPLC-Q-TOF/MS 比较研究[J].2016，27（1）102-106.
[5]王小平，胡志方，王进，等.不同炮制法对熟地黄中化学成分影响的比较研究[J].时珍国医国药，2015，26（1）：91-93.
论文作者:陈晓玲
论文发表刊物:《航空军医》2017年第7期
论文发表时间:2017/6/16
标签：地黄论文; 益母草论文; 溶液论文; 含量论文; 超声论文; 生地黄论文; 熟地黄论文; 《航空军医》2017年第7期论文;