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【摘 要】通过对六味地黄生物制剂的工艺研究活动，找出应用效果最好的醇沉工艺。方法：本次与醇沉工艺相关的药品研究活动选用正交试验法为主要研究方法，将浸膏得率、多糖含量以及丹皮酚含量为基本指标，对多种会对应用的醇沉工艺产生影响的因素进行研究，包括醇沉时间、醇沉浓度以及药液的基本浓度，通过评分的方法对这几种因素的影响程度进行探究。结果：对多种影响醇沉的工艺严格进行对比之后，确定应用效果最好的醇沉工艺如下：醇沉工艺研究取药液浓度为0.25g/ml，通过加入乙醇来调节药液的含醇量，使其保持浓度为65%，温度25℃时，醇沉时间24h。结论：本文最终确定的醇沉方法科学合理，适用于六味地黄生物制剂的制备工作。
【关键词】六味地黄生物制剂；醇沉工艺；药物制备；正交试验
六味地黄汤是一种药效显著的中药处方，其可以达到滋补肾阴的效果，既可以对脾阴起到优质的滋补效果，同时也可以对肝阴及肾阴起到极佳的滋补效果。常见的六味地黄汤主要由牡丹皮、茯苓、泽泻、山药、山茱萸以及熟地黄组成，随着药品生产工艺水平逐步提升，六味地黄处方的应用方式也出现了改进，将这种中药处方与现代生物制药技术进行结合，可以制造出全新的生物制剂，其药用功效更为全面，且其应用效果优于原有六味地黄汤。但是在制备过程中，一些不合理的处理方法会降低生物制剂的药用价值，醇沉是制备六味地黄生物制剂的重要环节，本文对这一制备环节进行研究，借助正交试验来对影响醇沉效果的因素加以分析，找出最为合理的醇沉工艺技术，现有药物制备试验研究活动，过程如下：
1 材料与方法
1.1 一般材料
六味地黄生物制剂(熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓6味中药按照8：4：4：3：3：3的质量比配药，加入8倍量蒸馏水，自然发酵一定时间，过滤，合并滤液，浓缩到0．5g/ml，按一定比例加入光合细菌与豆浆培养基，进行生物代谢(代谢过程中每天振摇，调节pH8～9)，即可得到六味地黄生物制剂。
LC一20AT高效液相色谱仪，RV10basic旋转蒸发仪，SHB—m循环式多用真空泵，DLSO一5/20低温冷却循环泵，DD5台式低速大容量离心机，SK8200H超声波清洗机，BL一220H电子天平,甲醇为色谱纯，水为屈臣氏蒸馏水，硫酸为分析纯，苯酚为分析纯，中国食品药品检定研究所购买对照品：丹皮酚，葡萄糖。
1.2 方法
对照品溶液的制备取丹皮酚对照品1.25mg，精密称定，置于 25ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，用 0.22μm微孔滤膜滤过 ，取续滤液作为对照品溶液。
分别精密吸取各正交试验项下样品溶液5ml，置具塞锥形瓶中，加入甲醇30ml，精密称定，超声处理30min，放冷，再精密称定，用甲醇补足减失的重量，摇匀，抽滤，用0．22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
精密称取于105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品16.09mg，定容至100ml容量瓶中，得质量浓度为0.1609mg/ml的葡萄糖标准溶液。精密吸取葡萄糖标准液2.0ml，定容到25ml容量瓶中，取2.0ml于具塞试管中，加5％苯酚试液1ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5ml，振摇5min，置沸水浴中加热15min，再置冰水(-2℃)中冷却15min。另取蒸馏水2.0ml同上平行操作为空白对照，在200～600nm波长范围测定吸光度。由于在488nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
精密吸取同一标准品溶液2ml，按照科学方法重复测定6次，记录吸光度值并计算RSD。精密吸取同一供试品溶液2ml，分别在0，30，60，90，120，150，180，210min时。记录吸光度值并计算RSD(％)。精密吸取同一供试品溶液2ml，平行制备6份供试品溶液。
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按照《中国人民共和国药典》(2010年版一部)附录XA浸出物测定法，精密量取六味地黄生物制剂20ml，经醇沉后，浓缩，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，在105℃干燥3h，至干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，减去蒸发皿的重量，即得干燥品重量。以干燥品计算其浸膏得率按照L9(34)正交表进行试验，分别测得丹皮酚含量、多糖含量及浸膏得率。首先对各指标进行归一记分，即各指标值与本指标所有结果的最大值之比再乘以100。再按照各指标地位给予不同的加权系数，综合评分Y=浸膏得率×0.2+(丹皮酚含量+多糖含量)x0.4。
2 结果
精密度试验结果：RSD为1．59％，表明该方法精密度良好。稳定试验结果：RSD 为 0．47％，表明供试品溶液在显色操作完成后210 min内基本稳定。由于醇浓度达50％～60％，可除去淀粉、粘液质 、树胶等物质；达 75％时，可除去蛋白质、油脂、脂溶性色素等；当醇浓度达80％时，多糖、无机盐、鞣质等成分也被除去。各因素对醇沉工艺影响顺序为：(药液 浓度)A > (醇沉时)C > (醇沉浓度)B；方差分析结果表明：因素A 对试验结果具有显著性影响，其他因素则无显著性影响。确定最佳醇沉工艺为 A B C ，即药液浓度为0．25g／m l，醇沉浓度为65％，醇沉时间为24h。通过醇沉，离心，能够除去光合细菌，保证六味地黄生物制剂的质量稳定可控。
3 讨论
本次研究试验的主要研究对象是六味地黄生物制剂，虽然六味地黄汤已经可以对食用者的一些药用需求进行满足，但是随着药物制备工艺进步，现代人对六味地黄药汤提出了更多的药用要求，因此技术人员应用全新的光合细菌生物代谢技术对六味地黄汤进行了处理，获取了该药品的生物制剂，液态的六味地黄药品不但可以调节人体的内分泌活动、还能提升人体免疫力，并能够起到一定的抗衰老作用。
在药物制备工作中，制备人员为了使该制剂保持较好的稳定性，使服用者使用较少的制剂就可以获得较好的药效，使患者对于该药品具有更好的依从性，应用了醇沉技术，借助这种醇沉工艺将药品制备过程中药物具有的大量果胶、树胶、色素等多种杂质去除，从而使制剂的纯度提升，具有更好的抗衰老活性特点。在该制剂的内部成分中，牡丹皮所含的丹皮酚物质可以起到抑制变态反应、解热、镇痛的效果。而构成六味地黄药液的每一种中药药材都富有多糖。根据已有的药物研究资料可以了解到，六味地黄药品具有多种功能，包括调节血脂、造血以及抗氧化等。这些功能都需要依靠多糖这一类的活性成分才能有效保持，而在果蝇测试过程中，该制剂可以增强果蝇的繁殖能力，还能减缓其衰老。因此在制剂制备环节中，必须要对多糖成分以及丹皮酚成分进行保留，而对于醇沉工艺的研究意义也在于此。
本次醇沉工艺可以将多种杂质有效去除，同时还可以在药液达到相对较高的醇浓度时，一些难以去除的成分也被有效去除，多糖成分以及丹皮酚却可以被有效保留。
参考文献
[1]丘婷. (2013). 六味地黄生物制剂片剂成型工艺与质量标准研究. (Doctoral dissertation, 广东药学院).
[2]刘文秀. (2015). 六味地黄生物制剂醇溶部分片剂成型工艺与质量标准研究. (Doctoral dissertation, 广东药学院).
[3]韦迎春, 闫明, 胡军华, 李雪峰, 吴云, & 萧伟. (2015). 六味地黄方醇沉工艺研究. 中草药, 46(8), 1161-1166.
[4]闫明, 韦迎春, 李雪峰, 孟瑾, 吴云, & 萧伟. (2015). 响应面法对六味地黄方醇沉工艺的优化研究. 中国中药杂志, 40(19), 3794-3799.
论文作者:孙中义
论文发表刊物:《世界复合医学》2018年第01期
论文发表时间:2018/5/15
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