（成都市龙泉驿区中医院 四川 成都 610100）
【摘要】 目的：研究肺癌患者组织中KRAS基因突变情况，探讨KRAS基因突变与肺癌发生的关系。方法：选取某三级甲等医院病理科2013—2016年病理活检确诊的肺癌患者105例，应用PCR试剂盒分别扩增KRAS基因第2外显子并通过测序判定突变情况，分析基因突变与患者临床病理特征的关系。结果：本组患者标本中KRAS基因突变率为40.95%，KRAS基因突变类型共有8种，基因突变率在不同年龄组、不同分化程度组之间的差异具有统计学意义。结论：KRAS基因突变主要以KRAS基因外显子2第12密码子G12V、 G12R突变为主，第14密码子V14G突变为主，KRAS基因突变率与性别、淋巴结有无转移相关，为致癌机理的进一步研究及肺癌的早期预防提供了参考依据。
【关键词】 肺癌；KRAS基因；基因突变；测序分析；病理特征；关联性分析
【中图分类号】R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）27-0207-02
KRAS基因的全称为Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog [Homo sapiens (human)]，是诸多基础医学研究中常见的肺癌相关基因[1, 2]，而肺癌则是当今世界常见的恶性肿瘤之一，本研究结合肺癌患者组织标本中KRAS基因突变的检测结果进行分析，对肺癌的发生机理及早期预防提供参考依据。
1.对象与方法
1.1 研究对象
连续收集某三级甲等医院普外科2013-2016年间手术切除的肺癌患者标本共105例，临床病理资料完整。
1.2 实验方法
（1）DNA提取。具体步骤如下：①去除石蜡；②裂解；③加热；④结合；⑤洗涤；⑥提取。
（2）引物设计。根据PUBMED搜索KRAS、BRAF、PIK3CA基因mRNA基因组序列。引物由基因科技(上海)有限公司合成。引物序列及PCR扩增条件见表1。
（3）PCR反应。应用上述引物，分别扩增KRAS基因外显子2、BRAF基因外显子15、PIK3CA基因外显子20。
（4）琼脂糖凝胶电泳。每10ml 2%琼脂糖中加入澳化乙锭(EB)6ul以染色,电泳缓冲液为0.5×TBE。取PCR产物5ul和6×loadingBuffer lul混匀后轻轻加入凝胶点样孔中，95v电泳25min，凝胶成像仪成像记录结果。
（5）DNA序列分析。将经PCR检测出现电泳条带异常的样品送基因科技有限公司双向测序。
1.3 统计学分析
采用四格表χ2检验对基因突变率与临床病理变化的关联性进行分析，采用配对四格表χ2检验对不同基因间突变的关联性进行分析。
2.结果
2.1 一般情况
本研究所选取的116例肺癌患者组织标本中，只有105例石蜡包埋组织标本提取到足够量的DNA，其中男性标本61例，占58.09%；腺癌的患者标本34例，占32.38%；鳞癌的患者标本24例，占22.86%；小细胞癌的患者标本18例，占17.14%；发生淋巴结转移的标本36例，占34.28%。
2.2 KRAS基因突变频率与类型
本研究发现KRAS、BRAF、PIK3CA基因突变频率分别为54.74%，结果详见表2。
3.讨论
本研究中105例肺癌患者KRAS基因突变率都明显大于以往报道中的数值，可能是因为肿瘤组织的保存方式、检测突变所用的方法等不同，另外与样本所属的种族和地域也有一定关系，还可能与本研究中所选取的医院不够具有代表性以及样本量不足有关[3]。105例肺癌患者标本中共有43例发生KRAS基因突变，其中32例发生12密码子的突变，3例发生13密码子的突变，8例发生14密码子的突变。12位密码子的突变以G12A、G12D为主，13位密码子、14位密码子出现了新的突变类型，即G13G、V14G。
【参考文献】
[1]王琼，吕亚莉，钟梅，等.非小细胞肺癌中EGFR和K-ras基因突变检测分析与病理特征的关系[J].诊断病理学杂志，2012，19（2）：144-147.
[2]刘长姣.非小细胞肺癌生物标志物在个体化治疗方面的研究进展[J].中国药理学与毒理学杂志，2016，30（4）：375-380.doi：10.3867/j.issn.1000-3002.2016.04.012.
[3]杨健，蔡浩洋.肿瘤生物信息学数据库[J].生物技术通报，2015，31（11）：89-101.
论文作者:王丽
论文发表刊物:《医药前沿》2017年9月第27期
论文发表时间:2017/9/22
标签：肺癌论文; 密码子论文; 基因突变论文; 标本论文; 突变论文; 基因论文; 患者论文; 《医药前沿》2017年9月第27期论文;