于军[1]2006年在《热休克时SMMC-7721细胞糖皮质激素受体mRNA减少机理初探》文中进行了进一步梳理整体动物及培养细胞在热休克反应时,糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,GR)及糖皮质激素受体mRNA减少。本实验利用人肝癌SMMC-7721细胞初步探讨热休克时,GRmRNA减少的机理。 在44℃培养1h后,SMMC-7721细胞内Hsp70表达增加,GR与[~3H]地塞米松的特异性结合量降低,免疫组化证实GR含量也降低。我们利用44℃培养1h的该细胞作为探讨热休克反应时GRmRNA减少机理的模型。 以18srRNA为内参照,RT-PCR半定量实验表明,GRmRNA在热休克后含量最低,之后不断上升。制备GRmRNA的外显子和内含子RNA探针,对经不同处理的SMMC-7721细胞进行原位杂交,激光扫描共聚焦显微镜观察,计算机图像分析系统进行半定量分析表明热休克反应时GRmRNA转录过程受抑;GRmRNA前体剪接过程受抑;而GRmRNA降解加快。
徐晓辉[2]2001年在《热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机理的探讨》文中研究说明已报道，机体及培养细胞在热休克反应时糖皮质激素受体（Glucocorticoidreceptor，GR）减少，GRmRNA也减少，但对GRmRNA减少的机理尚未进行详细的研究。此外，人肝癌SMMC-7721细胞中GR的含量是正常人体细胞的十几倍。本实验也观察到，SMMC-7721细胞中GR的含量是骨肉瘤HOS-8603细胞的两倍以上。因此SMMC-7721细胞是探讨热休克反应时GR mRNA减少机理的一种较好的细胞。 本实验首先测定了SMMC-7721细胞分别在43℃～52℃培养1h，又在37℃培养1h后细胞的存活率，选择存活率在95％以上的温度进一步测定热处理1h37℃培养36h后细胞的存活率，发现43℃和44℃培养1h，37℃培养36h后细胞的存活率在95％以上。44℃培养1h后，细胞内Hsp70表达增加，SMMC-7721细胞GR与[~3H]Dex的特异结合量降低，免疫组化实验证实GR含量也降低。因此用44℃培养1h的SMMC-7721细胞作为探讨热休克反应时GRmRNA减少机理的模型。 用PCR技术从大鼠GRcDNA质粒中及SMMC-7721细胞基因组中分别获得大鼠GR跨外显子（与人GR跨3，4，5外显子的同源性在85％以上）及人GR内含子C，E的DNA片段插入转录载体，以之为模板进行体外转录并标记地高辛，用制备的反义RNA探针，对经不同处理的SMMC-7721细胞进行原位杂交，碱性磷酸酶底物NBT/BCIP显色，计算机图象分析系统进行半定量分析。发现SMMC-7721细胞44℃培养1h后，外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克处理组低，说明热休克反应时GRmRNA转录过程受抑。加放线菌素D后进行热休克反应组，外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单纯加放线菌素D组低，而内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单纯加放线菌素D组高，说明热休克反应时GR前体mRNA成熟过程存在剪接障碍。加放线菌酮后进行热休克反应组，外显子探针杂交显色所得的积分灰度值与单纯热休克反应组相比逐渐增高，而内含子探针杂交显色所得的积分灰度值相对 第二军医大学硕士学位论文于单纯热休克反应组维持在高位，推测热休克时细胞内某些蛋白的表达可能参与抑制GR前体mRNA的转录和剪接过程。
徐晓辉, 王学敏, 向正华, 郭兴中, 缪明永[3]2002年在《人肝癌SM MC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探》文中提出目的 探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法 利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 89%以上 )及人GR内含子E的DNA片段 ,构建转录质粒 ,并在体外进行转录 ,用地高辛标记反义RNA探针 ,进行细胞原位杂交 ,碱性磷酸酶底物NBT BCIP显色 ,计算机图像分析系统进行扫描半定量分析。结果 人肝癌SMMC 772 1细胞 44℃培养 1h后 ,用跨外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克反应组低 ;加放线菌素D后热休克反应组 ,用跨外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组低 ,而用内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组高 ;加放线菌酮后热休克反应组 ,用跨外显子探针和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比热休克反应组高。结论 热休克反应时GRmRNA转录过程受抑 ,GRmRNA前体成熟过程存在剪接障碍 ,GRmRNA降解加快
参考文献：
[1]. 热休克时SMMC-7721细胞糖皮质激素受体mRNA减少机理初探[D]. 于军. 第二军医大学. 2006
[2]. 热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机理的探讨[D]. 徐晓辉. 第二军医大学. 2001
[3]. 人肝癌SM MC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探[J]. 徐晓辉, 王学敏, 向正华, 郭兴中, 缪明永. 中华内分泌代谢杂志. 2002