王书彦翟雨佳曹丽琴
河北正定县人民医院口腔科河北正定050800
通讯作者：王书彦，大学本科，主治医师。【摘要】目的:研究加温对舌癌细胞增殖活性的影响，探讨高温治癌的作用机制。方法：对舌癌细胞Tca-8113进行体外加温，采用流式细胞术及MTT法研究加温后舌癌细胞增殖活性的变化。结果:Go～G1，S期细胞百分数在加温后无明显改变，而加温10minG2～M期细胞百分数则迅速降低，但它不随加温时间的延长而改变。结论：加温能使分裂期细胞减少，细胞的增殖活性降低，从而抑制细胞的增殖，达到治疗肿瘤的目的。
【关键词】加温；舌癌细胞；增殖
【中图分类号】R24125【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2013)08-0210-01
口腔黏膜鳞状细胞癌是口腔颌面部常见恶性肿瘤之一，其发展快、转移早、致死率高。细胞无限制的快速生长繁殖是恶性肿瘤的特征之一，改变细胞增殖活性，降低肿瘤恶性程度是肿瘤治疗的一个目的［1］。近30年，肿瘤热疗在细胞生物效应研究等方面取得了许多研究成果，在临床应用上也获得了很大的进展，并显出很好的效果［2］。本文采用人舌癌细胞Tca-8113进行体外加温，采用流式细胞术和MTT酶标技术检测细胞DNA含量变化，以了解高温对肿瘤细胞增殖的影响，从而探讨高温治癌的机制。
1材料和方法
11材料：人舌癌细胞系Tca-8113购自中科院上海药物研究所提供。
12方法:将冷冻保存的Tca-8113细胞复苏后接种于含10％胎牛血清、100IU·mL-1青霉素、100mL-1链霉素、4mmol·L-1谷氨酰胺、1mol·L-1HEPES的RPMI1640培养液中，于37℃、5%CO2的培养箱内培养。
13流式细胞术对细胞Tca-8113DNA含量测定：取指数生长期Ra-8113细胞，调整细胞浓度为5×105／nd，接种于25rnl培养瓶中，设1个对照组(37"C条件下培养24h)和10个实验组(分别给予43℃加热10、20、30min后继续培养24h，43℃加热40min后继续培养0、3、6、12、24、48、72h)，用消化液消化收取细胞，1：3醋酸甲醇固定，10％RNA酶37℃消化10min，离心后加入碘化丙锭(PI)染液1ml，室温下染色20min，200目尼龙网滤过细胞，Coulter Epics流式细胞仪检测Ra-81 13DNA含量。
14MTT法测定Tca-8113细胞增殖:将呈指数生长的Tca-8113细胞，调整细胞浓度为5×105、／ml，接种于25ml培养瓶中，设1个对照组(即37℃培养24h)和4个实验组(实验组分别给予43℃加热10、20、30、40min后继续培养24h)，用消化液收取细胞调整细胞浓度为5×104接种于96孔板，培养24h，每孔滴入5mg／ml的MTT 20u1DMSO继续孵育4h，终止培养，快速翻板倒出含有MTT的培养液，再加入200ul DMSO，放震荡器震荡15min使沉淀的结晶充分溶解，用Bio-Rad550酶标仪，以580nm波长测量，测定每孔oD值，按下列公式计算抑制率：抑制率=(对照组平均OD值-实验组平均0D值／对照组平均OD值)X100％。
2结果
流式细胞术测定Tca-8113 DNA含量结果显示G0～G1，S期细胞百分数在加温后无明显改变，而G2～M期细胞百分数在加温10min时迅速降低，但它不再随加温时间和培养时间的延长而发生明显改变，这提示加温促使细胞的增殖活降低，从而抑制细胞增殖，达到治疗肿瘤的目的。
3讨论
随着科学技术的发展，热疗逐渐引起关注，在肿瘤综合治疗手段中发挥积极作用。
细胞无限制的的快速生长繁殖是恶性肿瘤的特征之一，对细胞DNAA含量进行测定，将能提示其功能、分化及活性。流式细胞仪(flow cy-tometry，FCM)测定单个细胞DNA含量的方法先进、客观精确，敏感快速，一次检测的细胞数多，变异系数小［3］。本实验采用流式细胞检测高温处理前后舌癌细胞的DNA含量，发现G0～G1期、S期的细胞百分比无明显变化，G2～S期细胞百分比在加温10min即迅速降低，但是不再随加温时间的延长而有明显变化，这提示加温可使分裂期细胞减少，抑制细胞的增殖，从而达到治疗肿瘤的目的。MTT法结果也显示高温能使细胞增殖活性降低，细胞抑制率增高，这进一步证实了高温对肿瘤细胞的增殖性具有抑制作用。因此热疗可以抑制肿瘤细胞的DNA多聚酶、连接酶活性，导致DNA、RNA合成障碍。肿瘤细胞生长较快，癌细胞普遍处于慢性缺氧的酸性环境中，在酸性环境下热疗对诱发肿瘤细胞凋亡、扰乱细胞周期十分有利［4］。
综上所述，我们的研究表明，高温抑制人舌癌细胞增殖。因此热疗同转基因技术一样，可以抑制肿瘤细胞的生长及转变，从多方面发挥抗癌功能，相信随着研究的逐步深入，热疗必将为口腔鳞癌的治疗带来新的曙光。
参考文献
［1］王安训，曾荣生，丁学强，等.全反式维甲酸诱导分化舌癌细胞株的实验研究［J］.中山医科大学学报，2000，21（1）:1720
［2］明东，万柏坤，胡勇.肿瘤热疗及相关超声实用新技术研究研究进展［J］.生物工程医学研究，2006，23（4）：253256
［3］商庆新，张涤生，关文祥，等.丹参与川芎嗪对瘢痕成纤维细胞DNA含量及细胞周期进程的影响［J］.中国修复重建外科杂志，1998，12（6）：235237
［4］刘宝瑞，钱晓萍.肿瘤热化疗的基础与临床研究进展［J］.国外医学肿瘤学分册，2003，31（1）：3437
论文作者:王书彦翟雨佳曹丽琴
论文发表刊物:《中医学报》2013年8月第28卷供稿
论文发表时间:2014-3-21
标签：细胞论文; 舌癌论文; 肿瘤论文; 抑制论文; 目的论文; 实验组论文; 含量论文; 《中医学报》2013年8月第28卷供稿论文;