黄鹏, 阎丽萍, 张宁, 石金磊[1]2018年在《利用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达人鹅型溶菌酶2》文中研究指明利用甘油醛叁磷酸脱氢酶(glyceraldehydes-3-phosphatedehydrogenase,GAP)启动子在毕赤酵母中表达人鹅型溶菌酶2(human goose-type lysozyme 2,h LysG2),并在小试规模建立一套有效的重组hLysG2(recombinant hLysG2,rhLysG2)生产工艺流程。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成hLysG2基因,将其连接至pGAPZαA质粒中,构建重组表达质粒pGAPZαA-h LysG2。将重组表达载体线性化后电转化毕赤酵母GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性筛选获取高拷贝重组菌株,并在5L生物反应器中进行发酵培养。发酵60h后发酵液上清酶活性达到最高,发酵液上清经SDS-PAGE及Western blot检测证实rhLysG2得到表达。与诱导型表达相比,组成型表达发酵时间缩短了48h,上清中rhLysG2总活性提高了23. 8%;使用甲壳素亲和层析和分子筛层析对rhLysG2进行纯化后,每升发酵液上清可纯化到187. 4mg重组蛋白,纯化产物纯度达99. 0%以上;浊度测定法分析显示,在pH 5. 6、30℃和0. 1mol/L Na+的条件下,rhLysG2可达到最大酶活性13 500U/mg。利用GAP启动子在毕赤酵母中成功表达了高纯度和高活性的rh LysG2,避免了甲醇的使用,缩短了发酵时间,提高了蛋白产量,为将rhLysG2开发为新型抗耐药菌药物奠定了基础。
范源, 罗嘉, 甘麦邻, 谭娅, 张顺华[2]2018年在《长链非编码RNA TERRA的研究进展》文中认为端粒是染色体末端的特殊结构,对染色体具有保护作用,并且和衰老及很多疾病相关。长链非编码RNA是长度大于200bp且一般不具有编码功能的RNA。TERRA(telomeric repeat-containing RNA)是由端粒重复序列转录的一类长链非编码RNA,研究表明TERRA具有参与调控端粒长度,促进异染色体形成和保护染色体末端等功能,并且TERRA的表达与疾病和衰老相关。由于TERRA对于端粒具有重要作用,因此对于TERRA的研究已经成为端粒相关研究中的热点。目前对于TERRA的转录调控及生物学功能已有较为深入的了解。现对TERRA的生物学特性,功能和与疾病及衰老的关系进行综述,以期为TERRA后续的研究如作为疾病治疗靶点,延缓衰老等提供参考。
庞云渭, 孙业清, 杜卫华, 郝海生, 赵学明[3]2015年在《硫氧还蛋白相互作用蛋白与卵母细胞葡萄糖代谢关系的研究进展》文中研究表明硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein, TXNIP)属于硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)超家族成员,是α-抑制蛋白家族中唯一能够与Trx结合并对Trx进行负调控的蛋白,通过与凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)竞争性结合Trx而抑制Trx系统功能,在诱导细胞凋亡和调节胞内氧化还原状态过程中发挥重要的作用。TXNIP也是参与葡萄糖代谢的一个关键调控因子,在高浓度葡萄糖的诱导下,通过招募碳水化合物应答元件结合蛋白(carbohydrate response element-binding protein,ChREBP)和转录因子MondoA:Mlx到TXNIP的启动子,引起TXNIP的表达。组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)、核因子Y(nuclear factor Y,NF-Y)和转录因子FOXO1等都能调控TXNIP的转录。TXNIP还能通过抑制周期蛋白依赖性激酶的活性对抗细胞增殖。研究发现,TXNIP通过诱导胰岛β细胞的凋亡,抑制胰岛素信号转导途径,促进糖尿病及其并发症的发生。临床数据表明,糖尿病引起的高血糖严重影响卵母细胞的代谢和质量。葡萄糖作为许多细胞功能的作用底物,能够调节卵母细胞的减数分裂进程。在卵母细胞成熟过程中,葡萄糖通过多条代谢途径进行代谢,包括糖酵解途径、磷酸戊糖途径、己糖胺生物合成途径和多元醇途径。近年的研究揭示TXNIP缺失使大部分卵母细胞阻滞在MI期,破坏了卵母细胞内的肌动蛋白网络,卵母细胞的葡萄糖摄取和乳酸生成量增加,说明TXNIP是卵母细胞葡萄糖代谢的一个关键调控分子。综上所述,TXNIP与卵母细胞的葡萄糖代谢之间可能存在复杂的调控关系。将TXNIP用作卵母细胞葡萄糖代谢调控的靶位点进行深入研究,将为生殖细胞代谢异常提供重要理论参考,具有重要的应用前景。因此,文章对TXNIP的结构及调控机制、卵母细胞葡萄糖代谢途径、及TXNIP与卵母细胞葡萄糖代谢的关系进行了综述。
尹馨, 史婉月, 潘怡, 金亮[4]2019年在《LncRNA CTD-3252C9.4抑制人胰腺癌Panc-1细胞体外侵袭迁移的机制》文中研究说明研究长链非编码RNA(lncRNA)CTD-3252C9.4对人胰腺癌细胞Panc-1体外迁移和侵袭的抑制作用及其机制。采用培养胰腺癌微球体的叁维半固体体系中的表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激培养Panc-1细胞;采用RT-qPCR检测lncRNA CTD-3252C9.4在Panc-1中的表达量和载体转染效率;采用划痕-愈合法和Transwell小室法检测lncRNA CTD-3252C9.4及其靶基因骨形态发生蛋白7(bone morphogenetix protein 7,BMP7)对Panc-1细胞侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot验证靶基因BMP7和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达量的变化。结果表明:EGF能显着抑制Panc-1中lncRNA CTD-3252C9.4的表达,且该lncRNA能够通过抑制促癌基因BMP7的转录影响细胞侵袭和迁移能力,并且抑制肿瘤的EMT过程。
温伟洪, 李玉珍, 汤英贤, 徐令清, 李介华[5]2019年在《2株皮肤软组织感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全基因组测序分析》文中指出目的 对2株(1株ST59型,命名为QY01;1株ST338型,命名为QY02)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行全基因组测序分析,了解2株菌携带的耐药基因和毒力基因及其差异,为后续对MRSA的耐药机制、群体进化研究提供模板比对序列。方法 使用二代测序平台Illumina Hiseq 2000,PE150测序策略对2株MRSA进行全基因组测序分析;使用Fast QC进行测序质控;使用SPAdes进行序列拼接;使用RAST(http://rast.nmpdr.org)进行基因预测及功能注释;使用毒力基因数据库(http://www.mgc.ac.cn/VFs/search＿V Fs.html)对携带的毒力基因进行筛查;使用抗生素耐药基因数据库(CARD;http://card.mcmast er.ca/)对携带的耐药基因进行筛查。结果 QY01菌株基因组大小为2 760 018 bp,GC占比32.7%,其基因组草图序列已提交至NCBI GenBank数据库(Bio Sample:SAMN09711465),QY01菌株携带6个耐药基因,分别是blaZ、mecA、aph(3’)-III、ant(6)-Ia、erm(B)、tet(K);QY02菌株基因组大小为2 776 622 bp,GC占比32.7%,其基因组草图序列已提交至NCBI GenBank数据库(Bio Sample:SAMN09711466),QY02菌株携带7个耐药基因,分别blaZ、mecA、aph(3’)-III、ant(6)-Ia、erm(B)、tet(K)、cat(pC233)。QY01和QY02菌株均携带11个相同的毒力基因,分别是aur、scn、lukS-PV、lukF-PV、seb、sek、seq、hlb、hlgA、hlgB、hlgC。结论 QY02(ST338型)菌株较QY01(ST59型)菌株携带更多的耐药基因,QY01和QY02菌株携带的毒力基因无差异,2株菌均可产生潘顿-瓦伦丁杀白细胞素(PVL)、金属蛋白酶(AUR)、葡萄球菌补体抑制剂(SCN)等致病物质。
罗亚东, 丁旭, 杜洪明, 宋海洋, 马虞楠[6]2019年在《四取代羧酸酞菁锌光动力诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡》文中指出目的 探讨光敏剂四取代羧酸酞菁锌介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞的光动力作用。方法 以人口腔鳞状细胞癌细胞系HN4为研究对象。实验分组为不同梯度浓度的暗反应组和光反应组,光反应组细胞行梯度光照剂量垂直照射处理。CCK-8法检测不同四取代羧酸酞菁锌浓度及不同光照剂量对HN4细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对周期及凋亡的影响。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测不同药物浓度下Caspase-3、Bcl-2表达的变化。结果 四取代羧酸酞菁锌浓度及光照剂量均影响细胞增殖(P<0.05)。暗反应组的半数抑制浓度(IC50)显着高于光反应组(P<0.05)。一定浓度范围内,随着四取代羧酸酞菁锌药物浓度的提高,细胞周期的S期相对减少,G2/M期相对增多,细胞凋亡率也随之增加(P<0.05),Caspase-3表达随之升高(P<0.05),Bcl-2表达随之降低(P<0.05)。结论 四取代羧酸酞菁锌介导的PDT是一种有效的抗癌方法,能高效诱导口腔鳞癌细胞凋亡。
何露, 王宏媛, 张茹, 侯本祥, 李红[7]2019年在《牙龈卟啉单胞菌clpP基因缺失株和回补株的构建和鉴定》文中认为目的 构建并鉴定牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)W83的丝氨酸蛋白酶(caseinolytic protease,Clp)基因缺失株和回补株,为探索clpP基因在P.g致病过程中的作用和机制奠定基础。方法 设计clpP基因的引物对,PCR扩增其上下游同源片段,克隆入质粒pUC18中,插入红霉素抗性基因ermB作为筛选标记,构建重组质粒,电转化入P.g W83构建缺失株;PCR扩增clpP基因片段与重组质粒pUC18-ΔclpP-ermB连接,电转化入P.g W83缺失株中构建回补株。采用PCR和酶切电泳鉴定序列的正确性,利用抗性培养基筛选高表达菌株。结果 clpP基因克隆成功并顺利导入质粒pUC18中,P.g W83的clpP基因缺失株和回补株构建成功,并能在体外稳定传代。结论 本研究运用同源重组技术构建了P.g W83的clpP基因缺失株,并建立了以pUC18质粒为载体的clpP基因回补方法,为进一步研究clpP基因在P.g致病过程中的作用打下了基础。
蔡悦, 张博, 郭静[8]2019年在《甘草附子汤对佐剂性关节炎小鼠滑膜成纤维样细胞增殖的影响》文中研究表明目的:观察佐剂性关节炎(AA)小鼠滑膜组织成纤维样细胞(FLS)增殖的变化及甘草附子汤对其的影响。方法:将48只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组,模型组,甘草附子汤组(7.8 g·kg~(-1)),雷公藤多苷组(10 mg·kg~(-1))。采用AA小鼠模型,模型成功后,治疗组小鼠给予相应给药灌胃18 d,1次/d,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水。采用足肿胀法评价药物治疗作用;苏木素-伊红(HE)染色观察各组踝关节组织病理变化;Vimentin免疫组化法检测滑膜组织成纤维样增殖;免疫荧光法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平以及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滑膜组织中细胞周期蛋白D_1(Cyclin D_1),增殖细胞核抗原(PCNA),p53和p21蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组足肿胀度增加,滑膜增生和骨侵蚀明显,滑膜组织成纤维样细胞增殖率升高(P<0.05),滑膜组织中TNF-α,Cyclin D_1,PCNA蛋白表达明显升高(P<0.05),p53和p21蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,甘草附子汤组小鼠足肿胀,滑膜增生和骨侵蚀有所改善,滑膜组织成纤维样细胞增殖率降低(P<0.05),滑膜组织中TNF-α水平,Cyclin D_1,PCNA蛋白表达显着降低,而p53和p21蛋白表达升高(P<0.05)。结论:甘草附子汤对AA小鼠关节和滑膜损伤具有明显改善作用,可能与降低局部慢性炎症,调节AA小鼠滑膜Cyclin D_1,PCNA,p53和p21的蛋白异常表达,抑制FLS增殖有关。
张雪琼, 徐宏喜, 刘义飞, 胡志刚, 刘霞[9]2019年在《本草基因组学的学科建设现状与展望》文中进行了进一步梳理本草基因组学是中药学与基因组学的交叉学科,是涵盖药用生物多组学研究和中药与人体相互多组学研究的综合性学科。在药用模式生物、中药合成生物学、中药分子鉴定和药用植物分子育种、药物体内过程组学、中药道地性和药性研究等领域得到了广泛应用,取得了一批标志性成果。随着《中华人民共和国中医药法》《中医药发展战略规划纲要(2016—2030年)》等重要文件的发布,中医药产业进入了全新的、高水平的发展机遇期,复合创新型研究人才的培养是中医药产业发展及医药专业高校教学改革面临的关键问题,该学科的建立对于中医药现代化发展尤为重要,已有多所高等院校开设《本草基因组学》课程,初步形成了特色鲜明的本草基因组学人才培养体系。该文从本草基因组学研究进展、教学开展情况、教材编写背景、主要内容及关键技术、学科特色、学科建设展望方面进行阐述,为本草基因组学的学科建设、人才培养和科学研究提供理论依据和方法学支撑。
吴朕君, 穆剑楠, 刘铭雪, 于明俭, 王岩[10]2019年在《基于DO和ORP一阶导数的短程硝化SBR实时控制研究》文中研究说明以序批式生物反应器(Sequencing Batch Reactor,SBR)为基础,研究了短程硝化SBR启动过程中在线监测信号(溶解氧(DO)和氧化还原电位(ORP))的变化规律,考察了不同进水氨氮负荷下DO和ORP一阶导数的变化特征,并对SBR中不同阶段的微生物群落结构进行了对比分析.结果表明,在特定的运行条件下(29～30℃,初始pH>8.2,SRT=14),避免硝化阶段的过度曝气,可在第6 d实现短程硝化-反硝化SBR的快速启动.SBR对氨氮去除率维持在97%以上,亚硝化率(NAR)可长期稳定在98%以上.对SBR运行过程中的DO和ORP进行了长期监测,并对它们的一阶导数进行实时计算,结果发现,在短程硝化终点和反硝化终点处,DO与ORP的一阶导数均出现了极值,并且在不同进水氨氮负荷下,极值基本维持稳定.微生物群落分析结果表明,全程硝化阶段的污泥中同时含有氨氧化菌(AOB)和亚硝酸氧化菌(NOB),短程硝化污泥中几乎不含NOB.研究表明,利用DO和ORP的一阶导数极值作为控制参数是稳定可行的,对实现短程硝化SBR工艺的实时控制具有潜在的研究和应用价值.
参考文献：
[1]. 利用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达人鹅型溶菌酶2[J]. 黄鹏, 阎丽萍, 张宁, 石金磊. 中国生物工程杂志. 2018
[2]. 长链非编码RNA TERRA的研究进展[J]. 范源, 罗嘉, 甘麦邻, 谭娅, 张顺华. 中国生物工程杂志. 2018
[3]. 硫氧还蛋白相互作用蛋白与卵母细胞葡萄糖代谢关系的研究进展[J]. 庞云渭, 孙业清, 杜卫华, 郝海生, 赵学明. 中国农业科学. 2015
[4]. LncRNA CTD-3252C9.4抑制人胰腺癌Panc-1细胞体外侵袭迁移的机制[J]. 尹馨, 史婉月, 潘怡, 金亮. 中国药科大学学报. 2019
[5]. 2株皮肤软组织感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全基因组测序分析[J]. 温伟洪, 李玉珍, 汤英贤, 徐令清, 李介华. 现代预防医学. 2019
[6]. 四取代羧酸酞菁锌光动力诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡[J]. 罗亚东, 丁旭, 杜洪明, 宋海洋, 马虞楠. 口腔医学. 2019
[7]. 牙龈卟啉单胞菌clpP基因缺失株和回补株的构建和鉴定[J]. 何露, 王宏媛, 张茹, 侯本祥, 李红. 口腔医学. 2019
[8]. 甘草附子汤对佐剂性关节炎小鼠滑膜成纤维样细胞增殖的影响[J]. 蔡悦, 张博, 郭静. 中国实验方剂学杂志. 2019
[9]. 本草基因组学的学科建设现状与展望[J]. 张雪琼, 徐宏喜, 刘义飞, 胡志刚, 刘霞. 中国实验方剂学杂志. 2019
[10]. 基于DO和ORP一阶导数的短程硝化SBR实时控制研究[J]. 吴朕君, 穆剑楠, 刘铭雪, 于明俭, 王岩. 环境科学学报. 2019
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