河南省平顶山市中医医院 467000
摘要：目的 探讨和了解平顶山地区儿童呼吸道病毒感染的流行趋势及病原，达到早期诊断，指导治疗的目的。方法 采用直接免疫荧光法，利用抗病毒特异性单克隆抗体快速检测3023名儿童呼吸道分泌物中的呼吸道合胞病毒（RSV），流感病毒A型（IFVA），流感病毒B型（IFVB），副流感病毒1（PIV1），副流感病毒2（PIV2），副流感病毒3（PIV3），和腺病毒（ADV）等7种呼吸道常见病毒，并进行统计学分析。结果 在3023例呼吸道感染患儿中，检出病毒感染1026例，检出率为33.94%，其中RSV最多，为500例，占阳性率的48.7%，流感病毒A型为179例，占阳性率的17.45%，副流感病毒3（PIV3）共184例，占阳性率的17.90%，腺病毒（ADV）108例，占阳性率的10.50%，流感病毒B型（FIVB）51例，占阳性率的5.00%。结果进一步显示RSV是最常见的的病毒，其次为流感病毒A型、副流感病毒3，腺病毒和流感病毒B型，副流感病毒2，副流感病毒1。RSV高发季节为2013年9月—2014年1月，流感病毒A型为2013年7月—2013年9月，其他呼吸道病毒无明显季节性。结论 直接免疫法（DFA）能够提供快而可靠的方法用于呼吸道常见病毒的诊断。
关键词：直接免疫荧光法；呼吸道病毒；鼻咽分泌物；医院感染
儿童最常见的感染性疾病之一——急性呼吸道感染，是造成婴幼儿死亡的重要原因，对健康保健系统造成了巨大的经济负担[1，2]。研究资料显示，儿童期急性呼吸道感染大部分是由细菌以外的病原体引起的，尤以病毒最普遍[3]。其中，甲型流感病毒（IFA）、乙型流感病毒（IFB）、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）及副流感病毒1、2、3型（PIV1、PIV2、PIV3）等是最常见的病毒性病原体[4，5]。呼吸道病毒的流行因国家、地区、医院、年份、季节和年龄等存在差异，而病原学快速诊断对临床治疗具有指导意义[6]。因此，为了解平顶山地区儿童呼吸道病毒的感染状况，为预防和治疗提供科学依据，指导临床医生合理使用抗生素，提高呼吸道感染治愈率，我院于2013年11月——2014年11月对3023名急性呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物应用直接免疫荧光技术进行7种呼吸道病毒的检测，现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料 2013年11月——2014年11月收治急性呼吸道感染患儿3023例，年龄分成4组，其中0-6月586例；6月-1岁979例；1-3岁573例；＞3岁885例。诊断标准参照《实用儿科学》。
1.2方法
1.2.1标本的采集处理 采用一次性无菌鼻咽拭子从患儿的鼻孔进入7-8 cm到达鼻咽部，采集鼻咽部细胞，加入适量生理盐水置收集管中及时送实验室进行直接免疫荧光检测。
1.2.2直接免疫荧光法检测7项呼吸道病毒 将采集到的标本打匀，800g离心5 min后去除上清保留沉淀，用PBS洗涤沉淀，去除黏液等杂质。最后将沉淀溶解在0.3-0.5 ml的PBS溶液中，吹打成悬液，在玻片的7个孔中加样（25 μl/孔），干燥后，预冷丙酮固定10 min，再滴加FITC标记过的7种呼吸道病毒单克隆抗体（D3 Ultra DFA，Diagnostic Hybrids），37℃孵育20 min，再用洗涤液洗涤，最后封片，荧光显微镜观察。
1.2.3阳性结果判断 病毒抗原与其对应的抗体结合后，形成抗原抗体复合物，荧光显微镜下，呼吸道病毒抗原阳性细胞呈苹果绿荧光，阴性细胞无荧光，被伊文思蓝染成红色背景（见图1）。在200倍视野下，＞2个阳性细胞，该标本即判为阳性。
1.2.4统计学方法 应用SPSS16.0软件进行统计分析。计数资料采用c2检验，计量资料采用t检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。
图1.呼吸道合胞病毒荧光显微镜下图像
2.结果
2.1病毒检出结果 送检标本共3023份，阳性者1026份，总阳性率33.94%，其中以呼吸道合胞病毒感染最多，见表1。
2.2不同年龄组儿童呼吸道病毒的感染情况 不同年龄呼吸道病毒感染率不同，0-6月龄的占39.42%（231/586），6月-1岁的占33.50%（328/979），3岁以上的占23.84%（211/885），发病高峰在1-3岁组，达44.68%（256/573）。经c2检验，除0-6月组与1-3岁组感染率无显著性差异（P＞0.05），其余各组间均呈显著性差异（P＜0.05）（见表2）。
3.讨论
急性呼吸道感染严重危害儿童健康，经世界卫生组织统计每年约200万名五岁以下的儿童死于肺炎[7，8]。目前研究表明，儿童急性呼吸道感染最主要的致病因素是病毒。由于其感染力强、传播速度快，极易造成局部流行，甚至是爆发性流行，因此，需要各地区、国家进行重点监测[9]。然而，儿童急性呼吸道病毒的病原学诊断阳性率、病原谱比例在全国各地区存在一定的差异，给临床诊断治疗及疾病监控造成极大的困难。鉴于呼吸道感染病毒病原学的复杂性，高灵敏度及特异性的病原学分析不仅是确诊依据，也为后续合理治疗奠定了基础。
本文采用直接免疫荧光法能同时快速检测7种常见病毒，包括呼吸道合胞病毒（RSV）、流感病毒A、B型（IFVA、IFVB）、副流感病毒1、2及3型（PIV1、PIV2、PIV3）和腺病毒（ADV）。该法整个操作过程能在2 h内完成，是一种经济、高效、快速的呼吸道病毒检测方法。本文呼吸道病毒感染结果分析表明，平顶山地区3023例儿童急性呼吸道感染中，33.94%由这七种呼吸道病毒引起，其中RSV占的比例最大，占阳性病毒数的48.70%，其次为PIV3（17.9%）及IFVA（17.45%），该病原谱与山东及温州等地报道的相似[10，11]。不同年龄组中，1-3岁组感染率最高（44.68%），其次为0-6月组（39.42%），该病毒感染率年龄构成与其他地区相比差异较大[12]，可能检验病例均为住院病人，而门诊未计在内有关。从结果分析可见其与流感病毒的增长有关，可能2013.11-2014.11月平顶山地区流感病毒局部流行。此外，呼吸道病毒感染存在一定的季节性，本组资料显示平顶山地区秋冬季节是病毒感染的高峰期，但2013年与2014年相比，高峰期又不完全一致，提示呼吸道病毒每年流行特点又不同。因此，明确呼吸道病毒的流行特征，及时进行监测，不仅能为临川诊疗提供可靠依据，还能指导医师在各流行季节针对不同病毒进行有效积极的预防，避免病毒的流行性。
综上所述，本资料显示在2013年11月至2014年11月平顶山地区呼吸道合胞病毒RSV是儿童呼吸道感染的重要病原体，应重点防治。秋冬季节为本地区的高发期，应加强儿童尤其是1-3岁幼儿的预防保健工作。运用直接免疫荧光法同时检测7种常见呼吸道病毒，能迅速高效明确病原，为临床合理用药、实现早期治疗、早期康复奠定了良好的基础。
参考文献：
[1]Kanashiro，T.M.，et al.，Identification of respiratory virus in infants with congenital heart disease by comparison of different methods.Rev Inst Med Trop Sao Paulo，2011.53（5）：p.241-6.
[2]Ginocchio，C.C.，Detection of respiratory viruses using non-molecular based methods.J Clin Virol，2007.40 Suppl 1：p.S11-4.
[3]潘秀军，吕婕，and 沈立松，直接免疫荧光法同时检测儿童多种呼吸道病毒抗原的临床应用.放射免疫学杂志，2009（03）：p.267-270.
[4]李剑鸿，直接免疫荧光法用于多种呼吸道病毒抗原的快速检测分析.中外医疗，2013（22）：p.15-16.
[5]白华，et al.，2002～2007年重庆儿童医院住院儿童常见呼吸道病毒感染流行特点与临床特征比较分析.重庆医科大学学报，2009（08）：p.1073-1077.
[6]刘孙琴，韩晓峰，and 李明，直接免疫荧光法检测急性呼吸道感染病毒抗原的结果分析.中国卫生检验杂志，2013（18）：p.3537-3539.
[7]Williams，B.G.，et al.，Estimates of world-wide distribution of child deaths from acute respiratory infections.Lancet Infect Dis，2002.2（1）：p.25-32.
[8]吴茜，et al.，1402例小儿急性下呼吸道感染多病原学临床研究.中华妇幼临床医学杂志（电子版），2012（03）：p.312-316.
[9]黄凌，et al.，直接免疫荧光法对七种呼吸道病毒检测的临床应用.贵州医药，2009（05）：p.422-423.
[10]陈小芳，et al.，306例儿童急性呼吸道感染鼻咽分泌物病毒病原检测.温州医学院学报，2004（02）：p.108-110.
[11]马燕 and 于翠香，273 例急性呼吸道感染患儿呼吸道病毒抗原检测结果及分析.山东医药，2012.52（15）：p.75-76.
[12]蒋旻，et al.，南京地区患儿急性呼吸道感染常见病毒监测.中国卫生检验杂志，2013.23（4）：p.932-934.
论文作者:胡香玉1,李,倩2,徐灿灿1,赵艳超1,胡丽娜1
论文发表刊物:《健康世界》2015年10期供稿
论文发表时间:2016/1/19
标签：病毒论文; 呼吸道论文; 流感论文; 平顶山论文; 呼吸道感染论文; 免疫论文; 儿童论文; 《健康世界》2015年10期供稿论文;