长沙医学院 410000
【摘 要】目的 探究辣椒素对缺氧复氧所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 建立H9c2心肌细胞缺氧复氧模型，模拟缺血再灌注损伤，设置空白对照组和模拟缺血再灌注实验组。结果 H9c2心肌细胞缺氧复氧模型构建成功；加入辣椒素的H9c2细胞经H/R处理后，细胞存活率明显升高、LDH漏出量显著降低、细胞内MDA含量降低，同时细胞内ROS含量显著下降（P<0.05），抗氧化酶SOD及GPx的酶活性增强，与相应的Control组比较均具有显著性差异（P<0.05）。结论 辣椒素对缺氧复氧所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤具有一定的抵抗力，其机制可能是通过上调抗氧化酶（CAT、HO-1等）的表达，从而协同加强细胞内抗氧化防御能力而得以实现。
【关键词】辣椒素；H9c2心肌细胞；缺氧复氧；HO-1；MnSOD
随着人们生活习惯和方式的改变，心血管疾病的发病率明显增高，冠心病是导致人类死亡的主要原因。寻求有效的防治措施已成为当今心血管疾病的研究热点，急性心肌梗死最理想的治疗措施是在冠状动脉已通的基础上实现心肌水平的完全再灌注，如何防治再灌注损伤及改善心肌组织再灌注正是急需解决的问题。心肌缺血再灌溉损伤是指在短时间心肌血供中断，一定时间内恢复血供，原缺血心肌发生较血供恢复前更严重的损伤[1]。但关于辣椒素对心肌细胞的作用却知之甚少，如何减轻或避免心肌缺血再灌注所带来的氧化应激损伤是现在基础和临床研究的热点，研究辣椒素是否对缺氧复氧所致H9c2心肌样细胞氧化应激损伤具有抵抗作用具有重要的意义。
1 实验对象与方法
1.1 材料与方法：大鼠H9c2心肌细胞株由四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室保种提供。
1.2方法
1.2.1 细胞培养：取H9c2心肌细胞培养于含15%胎牛血清的完全培养基中，并置于37℃、5% CO2恒温培养箱内，细胞复苏后传代2次以上，取生长良好的细胞进行实验。
1.2.2 建立H9c2心肌细胞H/R模型：根据文献[2，3]的方法建立H9c2心肌细胞H/R模型。
1.2.3 实验设计与分组：取正常培养的H9c2细胞随机分为5组。
（1）正常对照组（C组）：不进行缺氧处理；
（2）缺氧/复氧组（H/R组）：按照上述缺氧/复氧模型培养；
（3）缺氧/复氧+低剂量辣椒素组（H/R+L组）：在进行缺氧复氧模型24h前，加入30uM浓度的辣椒素；
（4）缺氧/复氧+中剂量辣椒素组（H/R+M组）：在进行缺氧复氧模型24h前，加入50uM浓度的辣椒素；
（5）缺氧/复氧+高剂量辣椒素组（H/R+H组）：在进行缺氧复氧模型24h前，加入70uM浓度的辣椒素。
1.2.3 观察指标：实验处理后，MTT比色法检测各实验组心肌细胞存活率；根据试剂盒说明分别检测各组细胞内LDH的漏出量，应用可见光比色法测定MDA含量以及SOD、GPx等抗氧化物酶的活性；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）含量的变化。
1.3 统计分析：采用统计软件SPSS17.0进行分析，多组计量资料使用F分析，以P＜0.05为有统计学差异。
2 结果
2.1 各实验组心肌细胞的缺氧复氧损伤指标比较
各组心肌细胞的缺氧复氧损伤指标有差异（P<0.05），H/R组心肌细胞的细胞存活率明显低于H/R+L组、H/R+M组、H/R+H组3组，差异具有统计学意义（P<0.05），H/R组中的MDA、LDH明显高于其他实验组，差异具有统计学意义（P<0.05），见表１。
注：*表示差异有统计学差异
3.讨论
众所周知，心肌I/R损伤是多因素、多层面综合作用的结果，而氧化应激是其中起关键作用的一个环节[2]。鉴于心肌缺血/再灌注损伤过程中，氧化应激的诱发主要来源于再灌注期间ROS的爆发性产生及/或细胞内ROS清除能力的降低，余海红[2]等人进一步检测对照细胞（H9c2、H9c2/sham）及DJ-1高表达细胞（H9c2/DJ-1-A和H9c2/DJ-1-B）经sI/R处理后，ROS产生及细胞内关键抗氧化酶（SOD、CAT、GPx）活性的变化。结果发现：对照的H9c2细胞经sI/R处理后，ROS产生明显增加，伴随抗氧化酶（SOD、CAT、GPx）活性显著下降；然而，在DJ-1高表达的H9c2细胞，sI/R所诱发的ROS产生及抗氧化酶活性下降效应均被显著缓解。这些结果提示，H9c2细胞内DJ-1过表达对抗sI/R所诱发的氧化应激效应可能与ROS的清除及内源性抗氧化物酶活性增加有关。
研究结果表明辣椒素的H9c2细胞对sI/R所致的氧化应激损伤具有一定的抵抗力，其机制可能是通过上调抗氧化酶（MnSOD、CAT、HO-1等）的表达，从而协同加强细胞内抗氧化防御能力而得以实现，可以减少细胞死亡，提示具有心肌保护作用。
参考文献：
[1]孙韬.膳食辣椒对糖尿病大鼠神经损害及心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制研究[D].山西医科大学，2016.
[2]曹雪明.黄连素预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的机制研究[D].南方医科大学，2014.
[3]余海红.DJ-1稳定高表达对模拟缺血/再灌注所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用研究[D].南昌大学，2013.
作者简介：
刘佳佳，女，（1995-），长沙医学院临床医学专业在校生。
孙叶盛，男，（1995-），长沙医学院临床医学专业在校生。
基金项目：基金项目：长沙医学院2015年度校级立项大学生研究性学习和创新性实验计划项目长医教〔2015〕15号-73.
通讯作者：黄晓珊，女，助教，主要从事药理学教学工作
论文作者:刘佳佳,孙叶盛,李峥,黄晓珊
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2016年6月第13期
论文发表时间:2016/10/31
标签：心肌论文; 细胞论文; 损伤论文; 辣椒论文; 细胞内论文; 抗氧化论文; 作用论文; 《中国医学人文》(学术版)2016年6月第13期论文;