朱明[1]2001年在《褪黑素对人激素非依赖性前列腺癌细胞的作用及其部分机制》文中指出本文采用前列腺癌PC-3m细胞分别和不同浓度的褪黑素（MT）进行不同时间的培养，选用MTT法和平板克隆法进行检测。结果表明，MT对PC-3m细胞有浓度和时间依赖性的抑制作用，MTT法IC_(50)为419.75μg·ml~(-1)，平板克隆法IC_(50)为435.88μg·ml~(-1)。 将不同浓度的MT和不同浓度的5-氟尿嘧啶（5-Fu）与PC-3m细胞培养，采用MTT法和平板克隆法检测A值，引入金氏q值公式计算得出MT可以增强5-Fu对PC-3m细胞增殖的抑制作用，并随浓度的增加而增强。当5-Fu浓度为0.5～5μg·ml~(-1)时，与MT15.63～125μg·ml~(-1)合用均有协同作用。 MT不同浓度和不同时间作用于PC-3m细胞，可以明显影响其形态学变化，光镜下表现为细胞质浓缩和体积缩小；超微结构观察发现线粒体肿胀，胞浆流失呈空泡状。流式细胞仪（FCM）测定表明细胞周期已发生变化，G_1/G_0细胞比例下降，S期、G_2/M期增高。透射电镜下可见PC-3m细胞有明显的凋亡发生，形成典型的凋亡小体。 研究提示，MT能够抑制前列腺癌PC-3m细胞的增殖，并可相加或协同5-Fu的作用，减少5-Fu的用量，并可能降低5-Fu的不良反应。
蒋继浩[2]2011年在《褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用及其对survivin、livin表达的影响》文中进行了进一步梳理目的观察褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,并通过研究其对凋亡抑制蛋白survivin和livin的调控,探讨褪黑素促进胃癌细胞凋亡的一些可能的机制。方法①建立人胃癌细胞SGC-7901细胞褪黑素干预模型:人胃癌细胞SGC-7901传代培养,按褪黑素干预浓度不同分为5个组,1mM组、2mM组、3mM、4mM组、5mM组,并设立空白对照组。褪黑素干预24h。②CCK-8法观察褪黑素干预对培养胃癌细胞生长的影响。③应用流式细胞术检测褪黑素干预后各组细胞的凋亡率。④应用TUNEL法检测褪黑素干预后各组细胞的凋亡率。⑤应用免疫组织化学染色和图像分析软件分析比较各组细胞survivin和livin的表达情况。⑥应用蛋白免疫印迹(western bolt)技术和图像分析软件分析各组细胞survivin和livin蛋白表达量的变化。⑦应用实时荧光定量PCR比较分析各组细胞survivin和livin的mRNA表达变化。结果①CCK-8结果显示褪黑素干预下各组胃癌细胞生长受到抑制,呈剂量依赖性。②流式细胞术结果显示随着褪黑素浓度增高,肿瘤细胞的凋亡率增加;与对照组相比,3、4、5mM组结果有统计学意义。③TUNEL结果显示随着褪黑素浓度增高,肿瘤细胞凋亡率增加,与对照组相比,结果有统计学意义,与流式细胞术结果基本一致。④免疫组化结果显示,各褪黑素干预组survivin阳性肿瘤细胞平均光密度值减少,与对照组相比,除1mM外,各组均有显着性差异;褪黑素各干预组livin阳性肿瘤细胞平均光密度值减少,与对照组相比,除1mM外,各组均有显着差异。⑤Western bolt结果显示,各褪黑素干预组肿瘤细胞survivin蛋白表达减少,与对照组相比,除1mM组外,各组均有显着性差异;各褪黑素干预组livin蛋白表达减少,与对照组相比,各组均有显着性差异。⑥实时荧光定量PCR结果显示,各褪黑素干预组肿瘤细胞survivin mRNA表达减少,与对照组相比,除1mM外,各组均有显着性差异;各褪黑素干预组livin mRNA表达减少,与对照组相比,各组均有显着性差异。结论人胃癌细胞SGC-7901经褪黑素干预24h后,肿瘤细胞生长受到抑制,出现凋亡,呈剂量依赖性;同时,凋亡抑制蛋白survivin、livin基因的转录、翻译、表达水平都有不同程度的下降,大体呈剂量依赖性。表明褪黑素具有下调survivin、livin表达的作用。褪黑素下调survivin、livin的表达,可能是其抗肿瘤的机制之一。
祝兆怡[3]2006年在《2，3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的抗肿瘤作用研究》文中进行了进一步梳理目的 研究2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的抗肿瘤作用。 方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞株,MTT法检测加药细胞存活率;流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞周期分布的影响;RT-PCR检测加药后抑制凋亡基因bcl-2、凋亡基因bax和血管生长因子VEGFmRNA表达水平的变化;免疫细胞化学方法检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶caspase-3的影响。 结果 2,3-吲哚醌能显着抑制SH-SY5Y细胞增殖,加药后48小时各组SH-SY5Y细胞MTT代谢率的统计结果显示:加药各组的MTT代谢率明显低于正常对照组,与正常对照组比较有统计学意义(P<0.05);流式细胞检测加药48小时后细胞周期阻滞于G_0/G_1期。RT-PCR结果显示2,3-吲哚醌能下调SH-SY5Y细胞bcl-2mRNA和VEGFmRNA的表达,但对baxmRNA表达无影响。免疫细胞化学分析表明caspase-3蛋白随着2,3-吲哚醌浓度的升高其表达逐渐增加。 结论 本研究证实,2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞具有抗肿瘤作用,其作用主要通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖和肿瘤血管形成以及改变细胞周期而实现的。本文应用人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞作为靶细胞,探讨2,3-吲哚醌对其的抗肿瘤作用及可能的作用机制。 实验证明,2,3-吲哚醌能够促进SH-SY5Y细胞凋亡,抑制其增殖及肿瘤血管的形成。本课题从细胞水平、mRNA水平及蛋白水平上探讨了2,3-吲哚醌抗肿瘤的可能机制,从而得出在细胞水平上2,3-吲哚醌可成功应用于人神经母细胞瘤治疗的结论,为其临床应用提供理论基础。同时在我们研究2,3-吲哚醌抗肿瘤作用机制的过程中,进一步的揭示了在应用2,3-吲哚醌治疗人神经母细胞瘤中的有效的靶位点。综上所述,我们的研究证明了应用2,3-吲哚醌可以有效抑制肿瘤细胞的增殖,从而为肿瘤治疗提供了新的思路。而且2,3-吲哚醌能够成功应用于体外培养的人神经母细胞瘤细胞系作为治疗肿瘤的临床前试验,极有可能成为未来治疗肿瘤的新兴药物。
参考文献：
[1]. 褪黑素对人激素非依赖性前列腺癌细胞的作用及其部分机制[D]. 朱明. 安徽医科大学. 2001
[2]. 褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用及其对survivin、livin表达的影响[D]. 蒋继浩. 福建医科大学. 2011
[3]. 2，3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的抗肿瘤作用研究[D]. 祝兆怡. 青岛大学. 2006