湖南省邵阳市中心医院 421000
摘要：目的 探讨肺结核患者疱疹病毒感染的检测及临床意义。方法 选取我院收治45例肺结核患者作为观察组，同时选取38例正常健康人作为对照组，对两组患者均采用酶联免疫法检测血清中人巨细胞病毒（HCMV）及单纯孢疹病毒（HSVⅠ型、Ⅱ型）感染的IgM抗体，采用化学发光法检测血清中EB病毒VCA IgM抗体，再采用PCR-southern对两组患者外周血单个核细胞中EBV DNA表达进行检测。结果 观察组患者血清HCMV-IgM及HSV-IgM阳性率分别为20.0%，15.6%，对照组分别为5.3%，0%；两组比较差异明显P<0.05；观察组VCA-IgM阳性率为6.7%，对照组未检出VCA-IgM阳性，两组比较无明显差异，P>0.05；观察组EBV DNA阳性率为33.3%，对照组为7.9%，两组比较差异具有统计学意义，P<0.01。结论 肺结核患者存在较高的HCMV、HSV及EBV活动性感染，疱疹病毒感染与肺结核患者病情有一定联系。
关键词：肺结核；疱疹病毒感染；检测
结核病对人类健康产生严重危害，结核病是一种慢性传染疾病。近年来，结核病的发病率明显升高。有研究表明，肺结核患者一般免疫功能较低，可能存在疱疹病毒活动性感染，加重了结核病患者病情[1]。疱疹病毒一般表现为潜伏感染，一旦患者免疫功能下降即可引发激活感染。为更好了解疱疹病毒对结核病病情的影响，本研究对我院收治的45例结核病患者的血清进行检测，重点检测HCMV-IgM及HSV-IgM（Ⅰ型、Ⅱ型）和EB病毒VCA-IgM及外周血单个核细胞中EBV-DNA。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院呼吸科门诊于2014年7月-2015年4月间收治的肺结核患者45例，其中男25例，女20例，年龄18-79岁，平均年龄（47.4±2.1）岁。其中继发性肺结核38例，原发性肺结核7例。同时选取正常人38例，其中男27例，女11例，年龄17-78岁，平均（48.1±1.9）岁。两组患者在年龄、性别等方面比较无明显差异，P>0.05，具有临床可比性。
1.2 方法
1.2.1 IgM抗体检测
分别采集观察组和对照组外周血，将血清分离，采用北京贝尔生物工程有限公司生产的酶联免疫法试剂盒对HCMV抗体（IgM）、HSV Ⅰ型、Ⅱ型抗体（IgM）进行检测，采用深圳市新产业生物工程有限公司生产的化学发光法试剂盒检测血清中EB病毒VCA IgM抗体，过程严格按照说明书进行，对阳性和可疑阳性标本进行重复检验。其中HSV的Ⅰ型、Ⅱ型IgM抗体只要有一种结果检测为阳性，即HSV-IgM判读为阳性。
1.2.2 EBV-DNA的检测
分别采集观察组和对照组外周静脉血，行EDTA抗凝，将PBMC分离，加入消化液中，56℃水浴，1h后将其煮沸，持续15min，12000r/min离心10min，提取上清液。采用EBV Bam H I-W区特异性引物和探针，检测提取细胞DNA，上游引物序列选为5’-CCAGACAGCAGCCAATTGTC-3，下游引物序列选为5’-GGTAGAAGACCCCCTCTTAC-3’，PCR反应体积为30μl，引物含量20pmol/L，Tag酶1.0U，dNTP83μmol/L。设立阴性对照和阳性对照，模板DNA 5μl，阴性对照组采用去离子水，94℃预变性，持续5min，再行以下循环30次：94℃持续1min，60℃持续2min，72℃持续3min，最后72℃持续5min，最后取10μl PCT以20g/L琼脂糖凝胶电泳，时间为45min，再给予溴化乙锭染色，于紫外线下进行观察。
1.3 观察指标
观察两组患者血清中HCMV及HSV感染的IgM及EB病毒VCA-IgM和外周血单个核细胞中EBV DNA表达，并作临床对比分析。
1.4 统计学方法
所有数据均采用SPSS13.0统计学软件处理，计数和计量资料分别采用X2检验和t检验，检验水准为σ=0.05。
2 结果
观察组HCMV-IgM阳性率为20.0%，对照组为5.3%，两组比较差异明显，P<0.05；观察组HSV-IgM阳性率为15.6%，对照组为0%，两组比较有显著差异，P<0.05；观察组VCA-IgM阳性率为6.7%，对照组未检出VCA-IgM阳性，两组比较无明显差异，P>0.05；观察组EBV DNA阳性率为33.3%，对照组为7.9%，两组比较差异明显，P<0.01。详见表1。
3 讨论
结核病是由结核杆菌感染导致，人体各个器官均可累及，但主要侵入器官是肺部，肺部感染后，可继发脑膜、颈淋巴、肠、腹膜等部位感染。此病主要传播方式为呼吸道传播。结核病发病时常伴有全身乏力、低热、咳血、咳嗽等症状。有研究表明，结核病的发生发展除了与结核病菌数量有关，还有患者机体免疫能力密切相关[2]。研究已证实，结核病患者免疫功能存在紊乱，免疫功能紊乱有可导致疱疹病毒活动性感染，继而加重结核病情，形成恶性循环[3]。
疱疹病毒是具有包膜的DNA病毒，疱疹病毒感染分为潜伏期和活动性感染，潜伏期是指病毒非活动状态。目前我国疱疹病毒感染患者数量较多。一般为潜伏感染，无明显临床症状，一旦宿主免疫功能下降，即可激活[4]。目前临床中熟知的与人类疾病相关的疱疹病毒主要有单纯疱疹病毒Ⅰ型、单纯疱疹病毒Ⅱ型、EB病毒、水痘、带状疱疹病毒、HCMV、人类疱疹病毒6型、人类疱疹病毒7型及人类疱疹病毒8型。近年来，肺结核发病率逐年增加，肺结核患者若并发疱疹病毒，则会给治疗增加难度，影响患者预后。因此对肺结核患者进行疱疹病毒的检测，对于了解疱疹病毒的状态及治疗方案有重要意义，对伴有疱疹病毒活动性感染患者不仅要用抗结核药物，也需给予抗疱疹病毒类药物。
病毒早期感染和潜伏期激活的重要标志之一是血清特异性IgM抗体的出现。本研究中，对外周静脉血检测发现，观察组HCMV-IgM阳性率为20.0%，对照组为5.3%，两组比较差异明显，P<0.05；观察组HSV-IgM阳性率为15.6%，对照组为0%，两组比较有显著差异，P<0.05。由此可说明，肺结核患者存在HCMV和HSV活动性感染。较多文献也已证实，肺结核患者在机体免疫功能低下情况下可引起疱疹病毒活动性感染[5]。VCA-IgM是检测EBV原发感染的重要标志，相关研究表明，VCA-IgM仅存在与EBV原发感染[6]，是检测患者的急性期抗体。而本次研究中观察组VCA-IgM阳性率为6.7%，对照组未检测VCA-IgM抗体。本研究中观察组EBV DNA阳性率为33.3%，对照组为7.9%，两组比较差异明显，P<0.01。由此可说明，结核病患者存在潜伏EBV病毒的激活感染风险。故应检测EBV-DNA载量，明确患者EBV感染情况。
参考文献：
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论文作者:罗浩明
论文发表刊物:《健康世界》2016年1期供稿
论文发表时间:2016/3/24
标签：疱疹论文; 肺结核论文; 病毒论文; 阳性论文; 患者论文; 两组论文; 对照组论文; 《健康世界》2016年1期供稿论文;