（安徽省安庆市食品药品检验中心 安徽 安庆 246000）
【摘要】目的：建立较科学合理的氯霉素搽剂中氯霉素含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱-质谱/质谱法（LC—MS/MS）进行测定。结果：氯霉素浓度在1～20ug/mL(r=0.9992)线性关系良好，（平均回收率为99.7%, RSD=0.5% (n=6)。结论：该法灵敏、准确、可靠、专属性强，可用于氯霉素的含量测定。
【关键词】 LC—MS/MS；氯霉素；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）20-0380-02
氯霉素是由链丝菌产生的抗生素。属抑菌性广谱抗生素。因对造血系统有严重不良反应，需慎重使用。对早产儿和足月产新生儿均可能引起毒性反应，发生“灰婴综合征”，严重的骨髓抑制反应等，现在对氯霉素测定有液相色谱法[1]、气相色谱-质谱法[2]、紫外分光光度法[3]、气相色谱法[4]、薄层色谱法、微生物法及免疫学检验方法，实际工作中用高效液相色谱-质谱/质谱法测氯霉素报道的很少，笔者参考文献，采用高效液相色谱-质谱/质谱法测定氯霉素搽剂中氯霉素含量，结果表明本方法准确，可靠，稳定性好，其方法学考查如下。
1.仪器与试药
1.1 仪器
安捷伦G6460三重四极杆质谱仪（美国安捷伦公司）；AUW 220D型百万分之一/十百万分之一电子天平（日本岛津公司）
1.2 试药
氯霉素标准品（中国食品药品检定院，批号：130303-200614，0.1g）；甲醇（色谱纯）乙腈（色谱纯）；水（重蒸水）；其它试剂为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
SB-C18（150mm×4.6mm,5um)；流动相：乙腈-水（60：40）柱温40℃，流速:0.25ml/min,进样量：1ul
2.2 质谱条件
离子源：ESi扫描模式：负离子扫描；电喷雾电压：-3500V 离子源温度：350℃，定性离子对(320.9/151.9,320.9/256.9),定量离子对（320.9/151.9)，碰撞气能量为－25ev,－16ev标准品与样品图谱分别见图1。
A B C
图1 质谱图（ A.对照品 B.供试品 C .棒状图 ）
2.3对照品溶液的制备
精密称取氯霉素标准品，加入乙腈稀释成1ug·mL-1工作标准溶液,备用。加入乙腈稀释成0.1ug·mL-1内标工作溶液,备用。
2.3 供试品溶液的制备
称取本品约0.5ml，精密称定置50ml的离心管中，再用50ml乙腈定容，用0.22mn的滤膜到进样瓶中。
2.4 线性关系的考察
精密吸取氯霉素标准品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置10ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀。分别吸取1ul依次注入液相色谱仪中，并按照色谱、质谱条件测定，以氯霉素溶液的浓度为横坐标，峰响应值为纵坐标，以质谱峰面积(9151,17174,23538,29800,36835)对进样浓度ug·mL-1进行线性回归，得回归方程：Y=3253.4X＋671140 (r—O.9994)。实验表明氯霉素在1ug·mL-1～20ug·mL-1浓度范围内线性关系良好。
2.6 稳定性实验
取氯霉素同一标准品溶液，分别在放置0、2、4、6、8小时，精密吸取标准品溶液1ul依次注入LC—MS/MS，照色谱、质谱条件测定，结果测得氯霉素峰响应值(17182、17174、17222、17151、17443)在8小时内的RSD为0.69%，结果表明氯霉素标准品溶液在8小时内稳定。
2.7 精密度实验
精密吸取氯霉素标准品溶液1ul注入LC—MS/MS，连续进样5次，按照色谱、质谱条件测定，测得氯霉素峰响应值(17115、17122、17111、17099、17036)，其RSD为0.20%，结果表明其精密度良好。
2.8 重复性试验
分别取2.3项下供试品溶液5份，分别精密吸取1ul注入LC—MS/MS，按照色谱、质谱条件测定，测得氯霉素峰响应值为（23355、23022、23077、23036、23064），其RSD为0.80%，表明样品重复性良好。
2.9 回收率试验
取已知含量样品，分别加入一定量的氯霉素，按样品溶液制备方法制备，按照色谱、质谱条件测定，记录氯霉素的面积，以按外标法计算含量的平均回收率为99.7%，RSD为0.5%， 见表1。
表1 加样回收率测定结果
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3.讨论
3.1 流动相的选择
笔者曾参考国家标准及相关文献用水-乙腈-10mmol/L的乙酸铵溶液、水-乙醇-10mmol/L的乙酸铵溶液等为流动相结果发现不但出峰时间延长，经过多次实验发现以水-乙腈（60：40）为流动相，氯霉素峰分离效果最好，而且时间适宜。
3.2 实验条件的优化
国家标准及相关文献用的大部分都是梯度洗脱的方法来分析的，通过实验发现等度来做更好，更加稳定故本次实验采用了等度实验分析。
【参考文献】
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京：中国医药科技出 版社，2010.
[2]王峰恩.酸碱度对气相色谱-质谱联用法检测氯霉素提取的影响[J];山东农业学，2011，7.
[3]张聪敏.紫外光谱法测定水产品中氯霉素的残留量[J].重庆科技学院学报(自然科学版)，2009，11(3).
[4]刘燕.气相色谱法测定替诺福韦脂中有机溶剂残留[J].安徽医药，2015，19(1) .
[5]莫金娜.薄层色谱法检测化妆品质的氯霉素[J].中国卫生检验杂志，2008，18(9).
论文作者:董帮兴,姚军
论文发表刊物:《医药前沿》2016年7月第20期
论文发表时间:2016/7/29
标签：氯霉素论文; 色谱论文; 溶液论文; 质谱论文; 精密论文; 标准论文; 条件论文; 《医药前沿》2016年7月第20期论文;